Zell- und Gewebekultur: Allgemeine Grundlagen und spezielle Anwendungen

331 Pages·2013·9.01 MB·German

by  Prof. Dr. Gerhard Gstraunthaler

Gerhard Gstraunthaler
Toni Lindl
Zell- und
Gewebekultur
Allgemeine Grundlagen
und spezielle Anwendungen
7. Aufl age
Zell- und Gewebekultur
Gerhard Gstraunthaler Toni Lindl
Zell- und
Gewebekultur
Allgemeine Grundlagen und spezielle Anwendungen
7. Auflage
Prof. Dr. Gerhard Gstraunthaler
Medizinische Universität Innsbruck
Sektion für Physiologie
Fritz-Pregl-Str. 3
A-6020 Innsbruck
[email protected]
physiologie.i-med.ac.at
Prof. Dr. Toni Lindl
Institut für angewandte Zellkultur
Balanstr. 6
D-81669 München
[email protected]
www.I-A-Z-Zellkultur.de
ISBN 978-3-642-33112-1 ISBN 978-3-642-35997-2 (eBook)
DOI 10.1007/978-3-642-35997-2
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3.–6. Aufl.: © Spektrum Akademischer Verlag Heidelberg 1999, 2000, 2002, 2008
7. Aufl.: © Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2013
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Planung und Lektorat: Dr. Ulrich G. Moltmann, Dr. Meike Barth
Satz: TypoStudio Tobias Schaedla, Heidelberg
Einbandabbildung: Prof. Gerhard Gstraunthaler
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Vorwort zur 7. Auflage
Ein wissenschaftliches Buch, vor allem in der modernen Biolo- plasmen und deren regelmäßige Überwachung, (3) die Prüfung
gie, lebt von der Veränderung und Aktualisierung seines Inhalts auf Authentizität humaner Zelllinien und die Erkennung und
und der Darstellung. Seit der ersten Auflage im Jahr 1987 hat sich Vermeidung von Kreuzkontaminationen, (4) die Verringerung
nicht nur die Vermittlung der Inhalte der Zellkulturmethoden des Gebrauchs von fetalem Kälberserum durch die Suche nach
gründlich geändert, sondern auch die Bedeutung des damaligen Serum-Alternativen und letztendlich die Propagierung einer
„Nischenprodukts“ Zell- und Gewebekultur. War es damals „nur“ serumfreien Zellkultur.
ein Methodenansatz unter vielen, ist im Laufe der bisherigen Stichwort Standardisierung: Im Sinne einer übergreifenden
sechs Auflagen und einem Vierteljahrhundert diese „Technik“ didaktischen Vermittlung der Zell- und Gewebekultur wurden
zu einem universellen „Werkzeugkasten“ für die Biologie und uns von Dr. R. Ian Freshney dankenswerterweise Wachstums-
die Medizin geworden, aus dem man nicht nur dreidimensionale kurven und andere ausgewählte Graphiken aus seinem Buch
Gewebe modellieren kann, sondern mit den In-vitro-Ansätzen Culture of Animal Cells, 6th Edition, Verlag Wiley-VCH, zur
dem Geschehen im Körper auch immer näher kommt. Verfügung gestellt, womit sich nunmehr in den beiden großen
Nach dem Relaunch des Buches, wie es auf Neudeutsch englischen und deutschen Standardwerken zur Zell- und Ge-
heißt, in welchem eine gründliche Umgestaltung der früheren webekultur eine einheitliche Darstellung und Nomenklatur zu
Auflagen vorgenommen wurde, ist bereits wieder eine Neu- diesem Thema befindet.
auflage notwendig geworden. Die Reaktionen auf die in der 6. Unser beider Dank gilt wieder allen, die uns am Zustande-
Auflage vorgenommene Neugliederung des Buches, vor allem kommen dieser Auflage unterstützend zur Seite standen. Be-
aber die „Nichtreaktionen“ darauf haben uns bestärkt, den ein- sonders danken möchten wir Dr. Cord Uphoff, DSMZ, für den
geschlagenen Weg in der Konzeption der 7. Auflage weiterzuge- PCR-Test auf Mycoplasmen, sowie Dr. Wilhelm Dirks, DSMZ
hen. Als untrügliches Erfolgszeichen mag auch der Absatz des und Prof. Dr. Walther Parson, Gerichtsmedizin Innsbruck,
Buches gelten, welcher nach bereits vier Jahren eine Neuauflage die uns zur Aktualisierung des Kapitels Kreuzkontaminationen
erforderte. Die Kritiken zur 6. Auflage, die „Überfrachtung“ und Authentifizierung mittels DNA-Profiling Abbildungen und
des Buches und die teils „nachkriegsähnlichen“ Abbildungen wertvolle Hinweise lieferten. Ein weiterer Dank geht an Dr.
mit den fehlenden Farbnuancen, haben wir uns sehr zu Herzen Martin Müller, Bayerische Landesanstalt für Landwirtschaft
genommen. (LFL), Freising, für die Fotos zur Pflanzenzellkultur und Dr.
Den Umfang des Buches haben wir allerdings beibehalten, Günter Körtner, PAA Laboratories GmbH, für das Kultur-
ist doch der „Lindl“ in all den Jahren zu einer im deutschen medien-Diagramm. Besonders danken möchten wir Stephan
Sprachraum einzigartigen Methodensammlung der Zell- und Gstraunthaler für die professionellen Aufnahmen an der steri-
Gewebekultur gewachsen. Diese Sammlung einschlägiger Me- len Arbeitsbank.
thoden, im Teil IV zusammengefasst, soll weiterhin als Nach- Ein weiterer Dank gilt Prof. Dr. Bernhard Flucher und
schlagewerk dienen, wobei auch für jene Leser das neu gestal- Solmaz Etemad, M.Sc., Prof. Dr. Judith Lechner, Dr. Caroline
tete Buch und speziell dieser Teil nützlich sein sollte, die nicht Rauch, Dr. Elisabeth Feifel und Dr. Sinikka Prajczer, Innsbruck,
direkt mit dem Buch ins Labor gehen müssen, um die eine oder für viele praktische Hinweise und Anregungen, die Überarbei-
andere Methode „nachzukochen“. tung einzelner Abschnitte und die aktuellen Zellfotos.
Auffälligste Neuerung ist jedoch das neue Layout und die Danken wollen wir auch wieder allen Firmen, die uns mit
mehrfarbige Gestaltung des Buches. Alle Abbildungen sind qualitätsvollen Bildern und Hinweisen versorgten, sodass wir
nunmehr in Farbe und alle Bilder in digitaler Qualität auf dem aus der ganzen Fülle des Angebots nur ausgewählte Abbildun-
letzten Stand der Technik. Trotz Widerstände auf unserer Seite gen einbringen konnten.
ist die „Ringbuchbindung“, die seit der 1. Auflage Tradition Danken möchten wir auch dem Verlag, Herrn Dr. Ulrich G.
hatte, leider Geschichte, obwohl diese sicherlich am „labortaug- Moltmann, besonders aber Frau Dr. Meike Barth für ihre Ge-
lichsten“ für solche Art von Büchern ist, jedoch anscheinend duld, die sie mit uns bei der Herstellung des Buches hatte.
auf Seiten der Buchhändler die meisten „Gegner“ hatte. Nun möge das Buch allen Lesern die Freude und den Nut-
In der vorliegenden Auflage wurden vor allem jene Kapi- zen bringen, den sie erwarten und auch erwarten dürfen.
tel überarbeitet und aktualisiert, die uns für die Einhaltung
höchster Qualitätsstandards in der Zell- und Gewebekultur im
Sinne einer Good Cell Culture Practice vorrangig erscheinen: Innsbruck und München, im Januar 2013
(1) Standardisierung und Qualitätskontrolle in der Zellkultur, Gerhard Gstraunthaler
(2) Überprüfung der Kulturen auf Kontamination mit Myco- Toni Lindl
Inhaltsverzeichnis
I A llgemeine Grundlagen der Zell- und 6 Z ellkulturmedien 69
Gewebekultur 1 6.1 Zusammensetzung der Medien 72
6.2 Kurze Beschreibung der gebräuchlichsten
1 D as Zellkulturlabor: Räumliche und Kulturmedien 80
apparative Voraussetzungen 3 6.3 Herstellung gebrauchs fertiger Medien 83
1.1 Der Reinigungsbereich 3 Literatur 86
1.2 Der Vorbereitungs- und Verarbeitungsbereich 3
1.3 Der Sterilbereich 4 7 S erumfreie Zellkultur 89
Literatur 12 7.1 Grundmedien 90
7.2 Zusätze zu serumfreien Medien 90
2 Steriltechnik – Kontaminationen 13 7.3 Modularer Aufbau serumfreier Medien 90
2.1 Der Sterilbereich 14 7.4 Übergang von serumhaltigen zu serumfreien
2.2 Laborreinigung 14 Medien 92
2.3 Hygiene 15 7.5 Serumfreie und proteinfreie Kulturmedien 95
2.4 „Aseptische“ Arbeitstechnik 15 7.6 Zusammenfassung: allgemeine Grundsätze
2.5 Sterilisationsverfahren 17 in der Herstellung und Verwendung von Zell-
2.6 Antibiotika (Verwendung von Antibiotika in der kulturmedien 95
Zellkultur) 25 Literatur 96
2.7 Mycoplasmen 27
2.8 Kreuzkontaminationen 37 8 P hysiologische Zellkulturparameter 99
Literatur 41 8.1 Osmolarität 99
8.2 Temperatur 99
3 S icherheit in der Zellkultur 43 8.3 Oxygenierung 100
3.1 Sicherheitsvorschriften 43 8.4 pH-Wert und Pufferung 100
3.2 Entsorgung 46 Literatur 102
3.3 Generelle Probleme 47
Literatur 47 9 R einstwasser für Zell- und Gewebe-
kulturen 103
9.1 Verfahren der Aufbereitung, Vorbehandlung 104
II Die Zelle und ihre Umgebung 49 9.2 Reinstwasseraufbereitungssysteme 104
9.3 Lagerung von Reinstwasser 105
4 Z ellbiologische Grundlagen der Zell- und 9.4 Wasser für Reinigungs zwecke 106
Gewebekultur 51 Literatur 106
Literatur 52
5 K ulturgefäße und ihre Behandlung 53 III R outinemethoden zur allgemeinen
5.1 Züchtung von Zellen auf Glas 53 Handhabung kultivierter Zellen 107
5.2 Züchtung von Zellen auf Plastikmaterial 54
5.3 Züchtung von Zellen auf anderen Materialien 58 10 M ediumwechsel und Fütterungszyklen 109
5.4 Spezielle Kulturgefäße 58 10.1 Mediumwechsel bei Monolayerkulturen 109
5.5 Reinigung und Vor behandlung von 10.2 Mediumwechsel bei Suspensionskulturen 111
Glaswaren 61 Literatur 112
5.6 Vorbehandlung von Kulturgefäßen mit Polylysin
oder mit Komponenten der extrazellulären 11 S ubkultivierung/Passagieren 113
Matrix zur Modifizierung der Oberflächeneigen- 11.1 Subkultivierung von Monolayerkulturen 113
schaften 63 11.2 Subkultivierung von Suspensionskulturen 119
Literatur 67 Literatur 119
VIII Inhaltsverzeichnis
12 B estimmung allgemeiner Wachstums- 18 K ultivierung spezieller Zelllinien 177
parameter 121 18.1 Mammaliazelllinien 177
12.1 Mikroskopische Betrachtung der Kulturen 121 18.2 Kaltblütige Vertebraten 188
12.2 Bestimmung der Zellzahl (und Zellmasse) 121 18.3 Invertebraten 188
12.3 Bestimmung allgemeiner Stoffwechsel- 18.4 Insektenzellen für die biotechnologische
parameter 129 Produktion rekombinanter Proteine (Sf9-Zellen
12.4 Vitalitätstests 129 aus Spodoptera frugiperda) 189
Literatur 134 Literatur 191
13 E infrieren, Lagerung und Versand von 19 S pezielle zellb iologische Methoden in der
Zellen 137 Zellkultur 195
13.1 Einfrieren von Zellen 137 19.1 Transfektion 195
13.2 Lagerung der Zellen 139 19.2 Klonieren 200
13.3 Auftauen von Zellen 140 19.3 Zellfusion, Hybridoma technik 202
13.4 Versand von Zellen 141 19.4 Zellsynchronisation 209
13.5 Probleme mit Zellen 141 19.5 Cytometrie/Cell Sorting 212
Literatur 142 19.6 Versuche zur In-vitro-Toxizität 218
19.7 Migrationsassays 228
14 Q ualitätskontrolle und Cell Banking 143 19.8 Chromosomenpräparation 231
14.1 Qualitätskontrolle 143 Literatur 232
14.2 Cell Banking 144
Literatur 144 20 O rgankulturen 237
20.1 Präparation eines Säugerdünndarms als
15 S tandardisierung in der Zellkultur Beispiel für eine Organpräparation in der
(Good Cell Culture Practice) 147 Pharmakologie 239
Literatur 148 20.2 Präparation eines peripheren Nerven (oberes
Halsganglion) zur Messung der neuronalen
Übertragung (Neurotransmission) 240
IV S pezielle Methoden und 20.3 Leberschnitte in vitro 240
Anwendungen 149 Literatur 242
16 Allgemeine Aspekte der Primärkultur 151 21 S tammzellen und Tissue Engineering 243
16.1 Anlegen einer Primärkultur 151 21.1 Adulte Stammzellen 244
16.2 Etablierung einer Zelllinie, Zellalterung und 21.2 Embryonaler-Stammzell-Test (EST)
Seneszenz 154 (Spezies: Maus) 248
16.3 Apoptose in der Zellkultur 157 21.3 Tissue Engineering und dreidimensionale
16.4 Transformation und Immortalisierung 157 Zellkultur 256
Literatur 161 Literatur 259
17 S pezielle Primärkulturen 163 22 Z ellkultur im großen Maßstab,
17.1 Kultivierung von Herz muskelzellen des Automatisierung 263
Hühnchens 163 22.1 Monolayerkulturen für große Zellmengen 263
17.2 Kultivierung von Herz muskelzellen aus 22.2 Suspensionskultur für große Zellmengen 268
neonatalen Rattenherzen 164 22.3 Automatisierung in der Zellkultur 271
17.3 Primärkulturen aus frischen Hautproben Literatur 272
(Biopsien) menschlichen Ursprungs 164
17.4 Isolierung von Lympho cyten aus Vollblut
mittels Dichtegradientenzentrifugation 165 V Pflanzenzellkultur 273
17.5 Primärkulturen aus Mäusecerebellum
(Kleinhirn) 166 23 P flanzenzell- und Gewebekultur 275
17.6 Primärkulturen von Hepatocyten 168 23.1 Herstellung von Kultur medien 275
17.7 Isolierung und Primärkultur von 23.2 Kalluskulturen 279
Endothelzellen 170 23.3 Suspensionskulturen 281
17.8 Gewinnung einer Zellkultur aus soliden 23.4 Isolierung von Protoplasten aus Pflanzenzell-
Humantumoren 172 kulturen 282
17.9 Gewinnung von Keratinocyten 174 23.5 Antherenkultur 285
Literatur 176 23.6 Embryonenkultur 287
Inhaltsverzeichnis IX
23.7 Einfrieren und Lagerung von Pflanzenzell- B.4 Zeitschriften 320
kulturen 287 B.5 Internetinformationen zur Cytometrie 320
Literatur 288 B.6 Institutionen und Firmen, die Zellkulturkurse
anbieten 320
B.7 Zellbanken und Institutionen, die eine
VI Glossar und Anhang 291 Authentifizierung humaner Zelllinien mittels
STR-Analyse anbieten (Abschn. 2.8) 320
A G lossar (Kleines Zell- und Gewebekultur- B.8 Wissenschaftliche Gesellschaften für Zell-
lexikon) 293 kultur 321
Literatur 309 B.9 Übersichtswerke zur Beschaffung von Geräten,
Labormaterial und Reagenzien 321
B A nhang 311
B.1 Was kann die Ursache von schlechtem C L ieferfirmen und Hersteller 323
Zellwachstum sein? 311
B.2 Berechnungen in der Zell kultur 312 Index 331
B.3 Nachschlagewerke und Handbücher der
Zell- und Gewebekultur 319 Methoden und Anwendungen 339
Einleitung
Werden tierische oder humane Zellen in vivo aus dem Gewe- binanter Proteine zum Einsatz kommen. Hier spielen in
beverband isoliert, können die Zellen unter geeigneten Bedin- Zukunft auch Pflanzenzellkulturen eine immer größere
gungen über verschieden lange Zeit in vitro in Kultur gehalten Rolle.
werden. Die Zell- und Gewebekultur ist damit – neben der • Die Verwendung kultivierter Zellsysteme in In-vitro-Toxizi-
Pflanzenzellkultur – zu einer der wichtigsten integralen Ar- tätstests als Alternativen zu Tierversuchen.
beitstechniken der Zell- und Molekularbiologie und der Biome- • Der Einsatz humaner Zellkulturen in der Medizin, sowohl
dizin geworden (Abb. 1). in der Diagnostik, z. B. der Chromosomenanalyse an Am-
Was ist der Zweck einer Zellkultur, und wie führt man eine nionzellkulturen in der pränatalen Diagnostik, als auch im
Zellkultur auf hohem Standard durch? Je nach Fragestellung Tissue Engineering, also der Anzucht von Zellimplantaten
ergeben sich unterschiedlich hohe Ansprüche an die Zell- und zur Heilung von Gewebeschäden (z. B. nach Verbrennun-
Gewebekultur. gen oder bei Knorpel- oder Knochenersatz).
• Da ist einmal die Zellkultur in der Grundlagenforschung, • Die neueste Entwicklung ist die Isolierung und Kultivie-
also das Studium der Physiologie und der Biochemie kul- rung von Stammzellen, sowohl tierischen und humanen als
tivierter Zellen selbst, deren Ansprüche in vitro in Bezug auch embryonalen oder adulten Ursprungs, sowie die Re-
auf Nährstoffe oder das Angebot an Wachstums-, Prolifera- programmierung adulter somatischer Zellen in induzierte
tions- und Differenzierungsfaktoren sowohl für „normale“, pluripotente Stammzellen (iPS).
insbesondere aber auch für „entartete“ Zellen in der Tu-
morbiologie. Die Anfänge der Zellkultur lassen sich bis an den Beginn des
• In der Biotechnologie, wo gentechnisch veränderte Zellen 20. Jahrhunderts zurückverfolgen.
zur Produktion und großtechnischen Herstellung rekom-
BIOTECHNOLOGIE:
Produktion rekombinanter Proteine,
monoklonale Antikörper, Sekretion,
PHARMAKOLOGIE und TOXIKOLOGIE: Transfektion, Bioreaktorbau, OMICS-TECHNOLOGIEN:
Infektion, Cytotoxizität, Nekrose, Irritation, Prozessoptimierung, Produktgewinnung, Genomics, Proteomics,
Arzneimittelwirkung, In-vitro-Testung, Anreicherungs- und Reinigungs- Metabolomics
Alternativen zu Tierversuchen verfahren (down-stream processing)
GENETIK/GENTECHNOLOGIE:
gentechnische Analysen, Mutationen,
Transfektion, Transformation,
Karzinogenese, Immortalisierung,
Seneszenz
INTRAZELLULÄRE AKTIVITÄT:
DNA-Replikation, Zellteilung und
Proliferation, Genexpression (Transkription TISSUE ENGINEERING (Gewebeersatz):
und Translation), zelluläre Homöostase, Gewebeaufbau, polymere Gerüstmatrix
Stofftransport, Stoffwechsel und Energie- (scaffold), Stammzellen, Differenzierung,
haushalt, Signaltransduktion, autologe Zellexpansion
Differenzierung, Apoptose
ZELL-MATRIX-INTERAKTIONEN:
Adhärenz (Anheftung) und Motiltität (Beweglichkeit)
ZELL-ZELL-INTERAKTIONEN:
der Zellen, Zell-Matrix-Wechselwirkungen,
Zellverbindungen (junctions), parakrine (autokrine)
Differenzierung, Morphogenese
Signalvermittlung, epitheliale Gewebekultur,
Differenzierung, Morphogenese
Abb. 1 Übersicht über Anwendungen von Zell- und Gewebekulturen (modif. nach Freshney, 2010).
XII Einleitung
Inzwischen sind viele kontinuierliche Zelllinien seit mehr als
Meilensteine in der Entwicklung der Zell- und 60 Jahren in Kultur. Die meisten der heute gebräuchlichen
Gewebekultur Zellkulturmedien basieren noch auf den Originalrezepturen
1885 Roux hält Zellen aus einem Hühnerembryo über mehrere der 1950er- und 1960er-Jahre. Die damalige Entwicklung der
Tage in einer warmen Salzlösung Zellkulturmedien ist über weite Strecken die Geschichte der
1907 Harrison kultiviert reproduzierbar Rückenmarkszellen aus Zellkultur an sich (Pollack, 1981).
Froschembryonen in einem Gerinnsel aus Froschlymphe Trotz größter Anstrengungen, die Zellkulturbedingungen
1912 Carrel setzt erstmalig aseptische Techniken ein und kann bestmöglich an die In-vivo-Situation anzugleichen, muss die
Herzmuskelzellen aus einem Hühnerembryo in Langzeit- In-vitro-Kultivierung von Zellen immer noch als ein künstlich
kultur halten geschaffenes System betrachtet werden. Die Vorteile der Zell-
1916 Rous und Jones verwenden erstmals Trypsin, um adhä- und Gewebekultur liegen in der Möglichkeit, unter genau defi-
rente Zellen zu subkultivieren nierten und reproduzierbaren Bedingungen homogene Zellpo-
1940 Erstmalige Verwendung von Antibiotika in der Zellkultur pulationen anzuzüchten und mit diesen zu arbeiten. Allerdings
1943 Earle und Mitarbeiter verwenden ausgereifte Kulturme- ist zu beachten, dass man es mit lebenden Systemen zu tun hat,
dien und etablieren eine Mausfibroblastenlinie (L-Zellen) welche einer besonderen Dynamik unterliegen. Zellen können
1948 Sanford und Earle gelingt erstmals die Klonierung von sich unter den gewählten Kulturbedingungen adaptiv verän-
L-Mausfibroblasten dern oder es werden bestimmte Zelltypen unbewusst selektiert.
1950 Morgan, Morton und Parker entwickeln das erste synthe- Langzeitkultur und hohe Zellteilungszahlen können zu geneti-
tische Zellkulturmedium (Medium 199) schen Veränderungen führen, wodurch die kultivierten Zellen
1952 Gey isoliert Zellen aus dem Cervixkarzinom einer Pati- sich in wesentlichen Merkmalen von jenen der Ursprungszelle
entin (Henrietta Lacks) und etabliert die erste humane unterscheiden können.
Zelllinie (HeLa-Zellen) Ziel jeder Zellkultur ist es, dass Zellen wachsen und ent-
1954 Cohen und Levi-Montalcini entdecken den Nervenwachs- sprechend differenzieren. Um dies zu erreichen, muss eine
tumsfaktor, der das Wachstum von kultivierten Axonen Vielzahl von Kulturparametern berücksichtigt, genau definiert
stimuliert und aufeinander abgestimmt werden.
1955 Eagle untersucht systematisch die Nährstoffansprüche Die Beschäftigung mit lebenden Zellen in Kultur ist ein
kultivierter Zellen und entwickelt aufbauend auf seinen faszinierendes Betätigungsfeld, welche tiefe Erkenntnisse und
Erkenntnissen die synthetischen Kulturmedien BME und wissenschaftlichen Fortschritt bringt, die aber auch aufgrund
MEM der Variabilität und Komplexität der In-vitro-Technologie ei-
1961 Hayflick und Moorhead beschreiben das Phänomen der nigen Frust bereiten kann. Dass ersteres überwiege, dazu möge
limitierten Replikationsfähigkeit humaner diploider Fibro- dieses Buch seinen Beitrag leisten.
blasten in Kultur
1962 Grace entwickelt Methoden zur Kultivierung von Insek-
tenzellen
Literatur
1963 Ham beschreibt das erste serumfreie Kulturmedium (Ham
F-10), 1965 folgt mit Ham F-12 eine Weiterentwicklung
Carrell A. On the permanent life of tissues outside of the organism. J. Exp.
dieses Mediums
Med. 15: 516–528, 1912.
1963 Todaro und Green etablieren die 3T3-Mauszelllinie durch
Cohen S., Levi-Montalcini R. and Hamburger V. A nerve growth-stimu-
spontane Immortalisation
lating factor isolated from mouse sarcoma 37 and 180. Proc. Natl.
1973 Graham und van der Eb führen die erste Transfektion an Acad. Sci. USA 40: 1014–1018, 1954.
kultivierten Zellen durch Eagle H. Nutrition needs of mammalian cells in tissue culture. Science
1975 Köhler und Milstein verwenden die Zellfusion (Hybrido- 122: 501–504, 1955.
matechnik) zur Produktion monoklonaler Antikörper Earle W.L., Schilling E.L., Stark T.H., Straus N.P., Brown M.F. and Shelton E.
1976 Sato führt die serumfreie Zellkultur mit chemisch defi- Production of malignancy in vitro; IV: The mouse fibroblast cultures
and changes seen in the living cells. J. Natl. Cancer Inst. 4: 165–212,
nierten, hormonsupplimierten Kulturmedien ein
1943.
1977 Nelson-Rees und Flandermeyer berichten erstmals über
Evans M.J. and Kaufmann M.H. Establishment in culture of pluripotential
breite Kreuzkontaminationen von etablierten Zelllinien
cells from mouse embryos. Nature 292: 154–156, 1981.
durch HeLa-Zellen Freshney R.I. Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique and
1981 Martin und Evans und Mitarbeiter isolieren die ersten em- Specialized Application. 6th Ed., Wiley, 2010.
bryonalen Stammzellen aus einer Blastocyste der Maus Gey G.O., Coffman W.D. and Kubiek M.T. Tissue culture studies of the
1998 Thomson und Shamblott, Gearhart und deren Mitarbei- proliferative capacity of cervical carcinoma and normal epithelium.
Cancer Res. 12: 264–265, 1952.
ter etablieren die ersten humanen embryonalen Stamm-
Graham F.L. and van der Eb A.J. A new technique for the assay of infec-
zelllinien
tivity of human adenovirus 5 DNA. Virology 52: 456–467, 1973.
2006 Takahashi und Yamanaka erzeugen aus adulten Fibro-
Ham R.G. An improved nutrient solution for diploid Chinese hamster and
blasten durch simultane Transfektion von vier Transkripti- human cell lines. Exp. Cell Res. 29: 515–526, 1963.
onsfaktoren induzierte pluripotente Stammzellen (iPS) Ham R.G. Clonal growth of mammalian cells in a chemically defined, syn-
thetic medium. Proc. Natl. Acad. Sci USA 53: 288–293, 1965.