The Preliminary Floristic Study on the Elements of Lithocarpus variolosa Forest in Mt. Xiaobaicaoling,CYunnan

6 Pages·2003·0.55 MB·

by  Wang Lisong，peng Hua

云 南 植 物 研 究 !$$"，89（;）：#$9\#%$
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蕨菜多酚氧化酶的酶学性质!
陈乃富
（皖西学院生物系，安徽六安 !"#$%!）
摘要：研究了蕨菜［!"#$%&%’( )*’%+%,’(（&’）()*+ ,-.’ +)"%’-.’+’(（/01,’）2+30.4’］多酚氧
化酶的动力学性质，结果表明：以邻苯二酚为底物，该酶最适56为#78，最适温度为!9:，
;$:以上使酶迅速失活，动力学方程 /<;%=7$>［?］（@ $7$"%A［?］），BC、异BC钠、D-6?E 、
"
&FGH1可完全抑制酶活性，饱和D-GI能显著抑制酶活性，蔗糖、?/?对酶有激活作用。该酶
能催化邻苯二酚、焦性没食子酸氧化，但对焦性没食子酸亲和力更强。
关键词：蕨菜；多酚氧化酶；动力学特性
中图分类号：J=8; 文献标识码：K 文章编号：$!9"L!#$（$ !$$"）$;L$#$9L$;
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（0%1+1234#5)$"(#,"，6#-"7,8’%9,%/#$-%"3，&)’-+!"#$%!，G*N+-）
563%(2&%：P*N15-50.N1-+-+-IH1N1Q+R*0SN+0RNC5.Q50.RHQT5QIH5*0+QIQUN3-10（VVE）N+ !"#$%&%’()*:
’%+%,’(（&’）()*+’ ,-.’ +)"%’-.’+’(（/01,’）2+30.4’ P*0.01)IR1*Q41R*-R，WH)1N+XR*0C-R0C*QI-1
R*01)W1R.-R0，R*0YQ1R1)NR-WI056,-I)0-+3R0Y50.-R).0TQ.R*N10+ZHY0N1-R#78-+3!9: .0150CRN,0IH，
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蕨菜别名拳头菜、龙爪菜、如意菜等，自古以来就被人们视 为山珍野菜食用。它是
采自蕨科蕨属中的蕨（!"#$%&%’( )*’%+%,’(（&’）()*+ ,-.’ +)"%’-.’+’(（/01,’）2+30.4’）
的幼嫩叶，因其富含对人体有益的多种营养成分，加之其生长在野外的天然林地无污染，
所以倍受人们青睐。但蕨菜采摘后极易褐变，甚至发黑，这给采后的运输、贮存及深加工
带来不便和困难。新鲜蕨菜的褐变主要是由多酚氧化酶（VQIH5*0+QI QUN3-10，简称 VVE，
MG%7%$7"7%）催化引起的酶促褐变，本文对蕨菜多酚氧化酶的酶学特性进行了研究，为合
! 收稿日期：!$$"L$8L%8，!$$"L$9L!!接受发表
作者简介：陈乃富（%=;!L）男，安徽人，学士，副教授，主要从事植物生化及植物资源开发与利用研究。
A%0 云 南 植 物 研 究 $"卷
理利用这一资源，科学控制深加工过程中的酶促褐变提供依据。
! 材料与方法
!"! 材料
采摘蕨菜长出地面!"#$%&’高的幼嫩叶为试验材料，采后立即进行研究。
采摘地点：六安市郊区的丘陵林地。
!"# $$%粗酶液提取
!%%(新鲜蕨菜预冷、剪碎，加入$%%’)预冷的%*$’+)·,-! ./0*1的柠檬酸-磷酸缓冲液，在组织捣
碎机中打浆!%’23，然后4%%%56’23离心!%’23，取上清液-!17条件冷冻约!$8后室温下解冻，再!4%%%
56’23冷冻离心!%’23，得到上清液即为99:粗酶液。
!"& $$%的酶活性测定
参照/;)2’和<+3=>(+’>5?（!@A1）的方法修改。用%*$’+)·,-! ./ A*4的柠檬酸-磷酸缓冲液配制
%*$B的邻苯二酚底物液，取此底物液"’)，加入%*"’)粗酶液，迅速混匀，以"’)%*$’+)·,-! ./A*4的
柠檬酸-磷酸缓冲液代替底物液，并加入%*"’)粗酶液为对照，在4!"3’处准确测定酶促反应!’23时
:*C值，按$"7条件下反应体系每分钟增加%*%%!:*C值为一个相对酶活性单位计算99:活性。
!"’ $$%的酶学性质
本文有关酶学性质研究，除说明外，皆以邻苯二酚为底物。
!*4*! 不同酶促反应时间的反应产物吸收光谱特征 按测定酶活性方法加入底物及粗酶液，在 DE-
!$%!紫外可见分光光度计下于4%%#1%%3’波长范围内，连续扫描!$次，获得不同酶促反应时间的吸收
光谱。每次扫描间隔$F$%G，!$次扫描共计酶催化底物反应$1’23。从!$次扫描的吸收光谱中可得到每
次扫描时的产物最大吸收波长!’;H，及其在此最大波长下的吸光度值（:*C值!），也可得到每次扫描时
产物在4!"3’处的吸光度值（:*C值$）。
!*4*$ 99:催化反应的速度曲线 取%*"’)粗酶液加入"’)底物液，在4!"3’处，每隔$%I测定:*C
值，共测!"次，可得"’23的酶促反应速度曲线。
!*4*J ./值对99:活性的影响 用./分别为4*%，4*4，4*1，"*$，"*0，0*%，0*4，0*1，A*%，A*$，A*4，A*0，
A*1，1*%的柠檬酸-磷酸缓冲液准确配制%*$B的邻苯二酚底物液，取不同./值的底物液测定酶活性。
!*4*4 温度对99:活性的影响 将"’)底物液分别在!$*"7，!"7，!17，$"7，J%7，J"7，4%7，
4"7水浴!%’23，加入%*"’)粗酶液测定酶活性。
!*4*" 温度对99:热稳定性影响 分别取%*"’)粗酶液在0%7，A%7水浴中保温J%I、0%I、@%I、!$%I、
!"%I；在1%7水浴中保温J%I、0%I、@%I、!$%I；在@%7水浴中保温J%I、0%I、@%I。水浴保温至规定时
间时立即冷至室温，测定酶活性。以室温酶活性为对照，可得99:经热处理后的相对酶活性。
!*4*0 底物浓度对99:活性的影响 酶浓度一定，配制不同浓度的邻苯二酚底物液，测定酶活性，研究
不同底物浓度对99:活性影响。
!*4*A 99:催化不同底物体系的吸收光谱及酶活性差异 用%*$’+)·,-! ./A*4柠檬酸-磷酸缓冲液分
别配制邻苯二酚、焦性没食子酸、愈创木酚J种底物液，浓度均为%*%4’+)·,-!，配制 ,-酪氨酸饱和
液，各取这4种底物液"’)，分别加入%*"’)粗酶液，立即在4%%#1%%3’范围扫描得吸收曲线。在!K
4!"3’处测定:*C值计算4种底物的酶活性，并以催化邻苯二酚的酶活性为参照，计算出相对酶活性。
!*4*1 抑制剂与激活剂对99:活性的影响 分别研究了L&、异L&钠、M;/N: 、OCDPQM;、,QR?I、NCN、
J
苯甲酸钠、蔗糖、M;R)等对以邻苯二酚为底物的酶活性影响，并与无抑制剂、激活剂存在时对照样
（RS）的酶活性相比得出相对酶活性。

-$% 云 南 植 物 研 究 ’*卷
出各种来源的 !!"以邻苯二酚为底物的产物最大吸收波长都在#$%&#’%()范围。邻苯二
酚（二元酚）、焦性没食子酸（三元酚）是普遍适宜的底物，而酪氨酸、愈创木酚等一元
酚不是他们的适宜底物。除牛蒡 !!"的最适温度较高为 *%+外，其余的最适温度皆在 ’%
&,*+范围。各种来源的 !!"耐热性都较差，一般在 -%+以上短时高温处理即可有效钝
化酶的活性。./、0123" 、45678、9:;<对各种来源的 !!"的活性都有抑制作用。蕨菜
,
!!"的最适 =2值与梨、莲藕及牛蒡!!"的最适 =2值相近，比苹果梨及草莓 !!"的最适
=2值高出约$个 =2值单位。另外，一定浓度的蔗糖、3:3对蕨菜 !!"有激活作用，而异
./钠、苯甲酸钠对其有抑制作用，这在其它的!!"研究中尚未见报道。
表! 抑制剂、激活剂对""#活性的影响
;1>?@, 9AA@/BCAD(ED>DBCF81(G1/BDH1BCF8C(!!"1/BDHDB7
抑制剂或激活剂 6I ./ 异./纳 0123", 苯甲酸钠 蔗糖 016? 9:;< 45678 3:3
J(ED>DBCF81(G 6C)=1F@ .DB1)D(6 3CGDK) 3CGDK) 3CGDK) 3KL1F 3CGDK) 501 45678@D(@ 3CGDK)
1/BDH1BCF8 :5D8C18/CF> >D8K?ADB@ >@(MC1B@ /E?CFDG@ GCG@/7?
51B@ 8K?B1B@
反应体系中含量 % $N $N $N $N $%N 饱和 %O*N %O,N %O$N
6C(B@(B8
!!"活性 #,$O$ % $O# % #%’OP *##O$ ’%QO$ ,#RO- $OP #P%O*
!!"1/BDHDB7
相对活性SN $%% % %O,’ % R,O# $’PO’ #QO, Q$O$ %O,- $%POQ
T@?1BDHDB71/BDHDB7SN
注：表中酶的相对活性：以6I酶活性为$%%，含不同的抑制剂或激活剂的酶活性分别与6I酶活性相比，得相对活性
（N）。 0CB@：T@?1BDH@</BDHDB7D(BE@B1>?@：B1UD(LBE@6I@(M7)@1/BDHDB718$%%，C>B1D(BE@T@?1BDH@</BDHDB7H1?K@8>7/C)=1FD(L
BE@@(M7)@1/BDHDB7H1?K@8VDBEGDAA@F@(BD(ED>DBD(L1L@(B8CF1/BDH1BD(L1L@(B8BCBE@6I@(M7)@T@?1BDH@</BDHDB7H1?K@F@8=@/BDH@?7W
〔参 考 文 献〕
XDY（毕阳），"K71(L6Z（欧阳春光），’%%$W 3C)@!FC=@FBD@8CA!C?7=E@(CD"[DG18@AFC)!D(LK?D!@1F［\］W !""#$%&（食品科
学），$$（$’）：’R—,$
21?D):2，]C(BLC)@F7]^，$R-QW !C?7=E@(C?C[DG18@CA“G1(_CK=@1F8”［\］W !""#$%&，%!：P%,—P%Q
4D(‘:（林向东），aE1(Lb（张琪），4D\‘（李冀新），’()*，’%%%W 3BKG7C(/E1F1/B@FD8BD/CA=C?7=E@(C?C[DG18@D(;EC)=8C(
3@@G?@88ZF1=@［\］W !""#$%&（食品科学），$&（$’）：#,—#*
4D(X0（林佰年），^K‘]（吴晓梅），2K\（胡军），$RR-W ;E@/E1F1/B@FD8BD/CA=C?7=E@(C?C[DG18@1(G/C(BFC?CA>FCV(D(LD(
=@1F1(G?CBK8［\］W +,-’.&)/0102&%3/&4（浙江农业大学学报），$!（*）：P,—P-
IC(Lc:（孔繁东），\D:2（姬得衡），3K(2（孙浩），’()*，’%%%W </BDHDB7=C?7=E@(C? C[DG18@D( 8BF1V>@FF7［\］W +5)*&)/
6&0-(7/#89(2:3/&4（大连轻工业学院学报），&’（$）：#Q—*%
bD1C‘Z（乔旭光），‘D1‘:（夏向东），aE1(LXa（张步志），’()*，$RR-W 8BKG7C(BE@UD(@BD//E1F1/B@FD8BD/8CA=C?7=E@(C?C[D5
G18@D(XKFGC/U［\］W +$-)/#"/0102&%3/&4（山东农业大学学报），$(（,）：,’-—,,%
aE1(L3Z（张淑改），Y1CY3（姚延 ），6E1(L]6（常明昌），’()*，$RRRW T@8@1F/ECA=C?7=E@(C?C[DG18@UD(@BD/=FC=@FBD@8
1(GD8CM7)@8CA?1FD[=FD(/D=D85FK==F@/EBDD［\］W +$-)/;&3/&4（山西大学学报）（01BW 3/DW），$$（$）：P$—P#