Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ

110 Pages·2010·2.78 MB·English

Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ
Este trabajo se realizó en el Laboratorio de
Metabolismo Fosfocálcico y Vitamina D “Dr. Fernando
Cañas” de la Cátedra de Bioquímica y Biología
Molecular de la Facultad de Ciencias Médicas,
Universidad Nacional de Córdoba

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Dedicada
A mi mamá
A mi esposo
A mi hija

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Escribir los agradecimientos de esta Tesis Doctoral significa haber
concluido un inmenso trabajo realizado en colaboración con
varias personas que me han apoyado durante los años que he
dedicado a la realización de este proyecto.

Quiero expresar, en primer lugar, mi más sincero agradecimiento a la
Prof. Dra. Nori Tolosa de Talamoni por la confianza depositada en mí al
aceptarme en su grupo de investigación para realizar esta Tesis. Además, por
su dedicación, por su continua labor de orientación en la dirección de la
misma, conocimientos y motivación.

A los Señores Profesores de la Comisión Asesora de Seguimiento: Dr.
Rubén Hugo Ponce y Dr. Carlos Rafael López, por sus constantes estímulos
para seguir adelante con los resultados de esta Tesis.

Mi gratitud también a mis compañeras de laboratorio: Gabi, Adri, Vivi,
Ana María, Elena, María Angélica, Ceci, Lu, Agata, y un agradecimiento
especial a Gaby Díaz, con quien compartí muchas horas contando células y
armando los paneles de fotos.

A todos mis compañeros de Cátedra, por su afecto.

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A todas las personas que me ayudaron en la captura de los ratones
Graomys griseoflavus: integrantes del laboratorio “Dr. Cañas”, Dr. Gerardo
Theiler, Dr. Rubén Hugo Ponce, y los ratones Graomys centralis: Dr. Ricardo
Ojeda.

A las Dras. Silvia Garagna y Valeria Merico, por sus asesoramientos en
espermatogénesis y por sus colaboraciones en el trabajo.

A la Dra. Liliana Muñoz por las determinaciones de testosterona.

A mi papá, por ser mi ángel guardián. A mi mamá, por brindarme día a
día con ternura todo su apoyo.

Finalmente, debo un agradecimiento especial a mi esposo Guillermo,
por su amor, comprensión y aliento constante. Y a mi hija Azul, quien siempre
me esperó después del trabajo con los brazos abiertos, ella me da la fuerza
para concretar todos mis sueños.

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Con los resultados de esta Tesis se realizaron las siguientes
publicaciones:

“A mitochondrial mechanism is involved in apoptosis of Robertsonian
mouse germ cells”. V. Merico, G. Díaz de Barboza, C. Vasco, R. Ponce, V.
Rodríguez, S. Garagna, N. Tolosa de Talamoni. 2008. Reproduction. 135:
797-804. Cambridge, Inglaterra.

“Spermatocyte apoptosis, wich involves both intrinsec and extrinsec
pathways, explains the sterility of Graomys griseoflavus x Graomys
centralis male hybrids”. V. Rodríguez, G. Díaz de Barboza, R. Ponce, V.
Merico, N. Tolosa de Talamoni. 2010. Reproduction, Fertility and
Development. 22: 478-488. Collingwood, Australia.

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El trabajo de esta Tesis se realizó con los aportes

recibidos de FONCYT (PICT 2005-32464), CONICET
(PIP 2005-2006), SECyT (UNC 2006-2007) (Dra. Nori
Tolosa de Talamoni). Convenio Bilateral (2005-2007)
entre SECyT (Dra. Nori Tolosa de Talamoni) y
Ministero degli Affari Steri (Italia) (Dra. Silvia Garagna).

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“LA FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS NO SE HACE
SOLIDARIA CON LAS OPINIONES DE ESTA TESIS”

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ÍNDICE DE CONTENIDO
RESUMEN……………….…………………………………….……….1
SUMMARY………………………………………..…….…….………..4
ABREVIATURAS…….……………………….……….…….………...7
INTRODUCCIÓN………………….……………………….…………..8
MATERIAL Y MÉTODOS……………….………….…………….….26
Animales de experimentación................................................27
Análisis morfológico.............................................................28
Histología……….…………………………………………....28
Microscopía óptica…………………………………………....29
Microscopía electrónica……………………………………….29
Ensayo hormonal……………………………………………..29
Análisis inmunohistoquímico….……………………………....30
Análisis de la fragmentación del ADN………………………....31
Análisis de Western blots…………………..………………....32
Análisis estadístico…………....…………………………….....35
RESULTADOS……………..…………..……………………………..36
Ratones Mus musculus domesticus……………....…………...37
Ratones Graomys………….…………………..……..………45
DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES…………………….…….…...….66
BIBLIOGRAFÍA………….…………………………………..…..……80

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ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1. Frecuencia de túbulos seminíferos TUNEL positivos por sección
testicular y porcentaje de células germinales TUNEL positivas por túbulo
seminífero en los ratones CD1, Milano II e híbridos subfértiles………..……38
Tabla 2. Frecuencia de espermatocitos en metafase positivos por sección
testicular para los marcadores apoptóticos estudiados en ratones híbridos
subfértiles……………………………………………………………...…41
Tabla 3. Colocalización de calbindina con los distintos marcadores
apoptóticos en testículos de ratones híbridos subfértiles………………..…44
Tabla 4. Relación peso testicular/peso corporal y testosterona sérica de los
diferentes citotipos de Graomys…………………………..…………...….46
Tabla 5. Frecuencia de túbulos seminíferos positivos por sección testicular
para los marcadores apoptóticos en diferentes citotipos de
Graomys……………………………………………………….........……54
Tabla 6. Frecuencia de espermatocitos en paquitene positivos para los
marcadores apoptóticos en diferentes citotipos de Graomys…….……....…57
Tabla 7. Frecuencia de túbulos y espermatocitos en paquitene calbindina
positivos en híbridos Graomys a diferentes edades………..………..……..64
Tabla 8. Colocalización de calbindina con los marcadores apoptóticos
estudiados en los híbridos Graomys a diferentes edades……..……..…….64

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