Molecular characterization and dynamic analysis on vitellin of Propylea japonica (Thunberg) (Coleoptera：Coccinellidae)

2007·0.26 MB·

昆 虫 学 报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$，!"#$%&’())*，+（) ,)）：-*+.-/) 0112)3+345(-5
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龟纹瓢虫卵黄蛋白的分子特性及发生动态
李 恺，张天澍，张丽莉，王 斌，王 群
（华东师范大学生命科学学院，上海 ()))5(）
摘要：研究了龟纹瓢虫 -.’/0)1$2$/’&+"$（9JDC%&’K）卵黄蛋白的基本特性以及卵黄发生过程中卵黄蛋白的动态变
化。LHM=和1N14LHM=实验表明，龟纹瓢虫卵黄蛋白分子量为(-3O/,P3)O*) AN，并由分子量分别为,33O5/P)O)<
AN和+,O(<P)O(* AN的两种亚基组成。对卵黄蛋白的氨基酸组成和含量分析发现，其必需氨基酸总量占+*O3/Q，
略高于非必需氨基酸，其中谷氨酸（M:D）含量最高，为,+O(5Q；色氨酸（9’I）和蛋氨酸（7&#）含量较低，分别为)O+)Q
和)O,,Q。采用间接竞争=R01H法，系统测定了龟纹瓢虫成虫期脂肪体、血淋巴和卵巢中卵黄蛋白的动态变化，结
果表明：脂肪体是卵黄原蛋白合成的场所，卵黄原蛋白的合成始于羽化后第(天；脂肪体、血淋巴和卵巢中卵黄原
蛋白的滴度在羽化后第3天开始迅速上升，至成虫期的第/天左右达到高峰期。
关键词：龟纹瓢虫；卵黄蛋白；性质；卵黄发生
中图分类号：6-55 文献标识码：H 文章编号：)3+345(-（5 ())*）,)4)-*+4)5
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卵黄蛋白（G@#&::@C，a#）是一类在一定发育阶段先 成为胚胎发育研究中的一个热点。就昆虫而言，目
由特定组织（如脂肪体）合成其前体物质卵黄原蛋白 前已针对飞蝗 3’"45#$ (+*.$#’.+$、蜚蠊 314"’/6$1$
（G@#&::$K&C@C，aK），后经血淋巴转运至卵巢加工沉积 ($71.$1、天 蚕 蛾 -)$#05$(+$ "1".’/+$、蓖 麻 蚕
而成的雌性特异性蛋白（X&>?:& YI&"@?: I’$#&@C，b1L）。 -6+)’5$(+$ "0&#6+$ .+"+&+、埃及伊蚊 !1715 $1*0/#+、七星
由于卵黄蛋白可为正在发育的胚胎提供氨基酸、脂 瓢 虫 8’""+&1))$ 51/#1(/4&"#$#$、天 蚕 !&#61.$1$
肪、糖、维生素等营养和功能性物质（张士璀等， 0$($($+、大褐蝉 9.$/#’/5$)#.+$ &+*.’:45"$#$ 等的卵黄
())(），对胚胎发育具有重要的影响，故卵黄蛋白已 原蛋白或卵黄蛋白的基本特性进行了较为详细的研
基金项目：上海市青年科技启明星计划项目（)3678,3,/）
作者简介：李恺，女，,-*,年生，陕西人，博士，副教授，研究方向为昆虫生理学，9&:;：)(,45((<<,*3；=4>?@:：A?@:@B%@$;&"CD;&ED;"C
收稿日期 F&"&@G&E：())*4)34(*；接受日期 H""&I#&E：())*4)*4)5
)*+ 昆虫学报 5("#72"*+*$*6,(#8,2,(# R?卷
究（!"##$%%"& !" #$’，()*+；,-&."# /&0 1/&，()*+； 量（龚和等，()5=）。具体方法如下：浓缩胶浓度均
23$&4，()**；23"& !" #$’，()*5；6&7"#8/&&，()*)； 为DP，分离胶浓度则分别采用RP、*SRP和(?P三
9/:&$%3 /&0 ;3$<"，()5=；龚和等，()5=；叶恭银等， 个浓度梯度；取样品 (? >，加入等体积样品缓冲
!
())5；>"" !" #$’，=???）。在卵黄发生的研究上，23"& 液，混匀后上样；浓缩胶恒压+? @，分离胶恒压(=?
等（()*5）对飞蝗的研究发现，在保幼激素的调控下 @，至溴酚蓝迁移到分离胶底部时停止电泳，考马斯
@7随着卵巢的周期性发育而波动；龚和等（()5?）应 亮蓝TJ=R?染色(R 8$&，脱色液脱色，多次更换脱色
用免疫扩散技术研究了七星瓢虫卵黄蛋白的发生； 液直至凝胶底色透明。电泳结果扫描保存。标准蛋
A0/8%和 B$#$C（$ ()5D）对家蝇 %&’(# )*+!’",(# 的研究 白为A8":%3/8 U$4%V$"&V"%公司生产的高分子量标准
表明，血淋巴中 @7在羽化后 =E 3或卵巢发育第四 蛋白质，蛋白质名称和分子量依次为甲状腺球蛋白
阶段（即刚进入卵黄发生期）开始出现，并且其含量 （++) .I）、铁蛋白（EE? .I）、过氧化氢（=D= .I）、乳酸
随着卵巢的成熟发生变化；叶恭银等（()))）对天蚕 脱氢酶（(E? .I）和牛血清白蛋白（++ .I）。实验重
卵黄蛋白的合成、转运与沉积进行了探讨；陶淑霞 复D次。
等（=??E）对大草蛉 -./0’*1# ’!1"!+1&2("#"# 卵黄蛋白 采用 HIHJ1A!6 技术，用已知蛋白的分子量对
的形成与沉积进行了研究。龟纹瓢虫 3/*10$!# 数和相对迁移率确定卵黄蛋白的亚基组成和各亚基
4#1*2,(#（F3-&G":7）作为我国重要的天敌昆虫之一， 的分子量（龚和等，()5=）。具体方法如下：浓缩胶
沈志成等（())?，())=）已对其卵黄蛋白的亚基组成、 浓度为DP，分离胶为RP；将样品和标准分子量蛋
卵黄蛋白在龟纹瓢虫体内和卵巢中的动态变化进行 白质与等体积的样品缓冲液混匀，沸水加热 (? 8$&
了研究，但对其卵黄蛋白分子量、氨基酸组成及其卵 后上样，其余操作同 1A!6。采用的标准蛋白为大
黄蛋白在脂肪体和血淋巴中动态变化的研究尚属空 连宝生物工程有限公司生产的次高分子量标准蛋
白。本研究采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（1A!6）和 白，名称及分子量分别为猪肌球蛋白（=?? .I）、 半
"
HIHJ聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳（HIHJ1A!6）等方法 乳糖苷酶（((+ .I）、磷酸酶（G )*S= .I）、牛血清白蛋
和间接竞争酶联免疫吸附反应（6>KHA）技术对龟纹 白（++ .I）和卵清蛋白（EESD .I）。实验重复D次。
瓢虫成熟卵中卵黄蛋白的基本特性以及卵黄蛋白的 !"#"$ 氨基酸组成和含量分析：取适量卵黄磷蛋
发生进行探讨，旨在为深入开展龟纹瓢虫的人工饲 白样品于RS+ 84#W> 92#中消化 =E 3后加蒸馏水蒸
养提供依据。 干，再用?S?= 84#W> 92#溶解后，以 U$4V3:48=? 氨基
酸自动分析仪分析测定其氨基酸组分及含量。
! 材料与方法 !"$ 血淋巴、脂肪体和卵巢样品的收集及卵黄（原）
蛋白含量的测定
!"! 供试材料 !"$"! 动态取样：羽化后即开始取样，每 = 天取 (
龟纹瓢虫采自上海市浦东郊区棉田，实验室内 次，每次D个重复，每个重复取样虫数EOR头。（(）
用棉蚜 51.,’ 6*’’01,, !#4L":喂养至其产卵，收集所产 血淋巴样品的收集方法：剪断成虫后足基部，用 (
卵，部分用蒸馏水洗净，滤纸吸干后 M*?N保存，用 >定量毛细管吸取溢出的血淋巴，吸满后，将血淋
!
于卵黄蛋白的分离提纯；剩余部分在 ==N O=EN、 巴放入?S( 84#W>磷酸缓冲液（C9 *SE）。（=）脂肪体
相对湿度 *?P O5?P、光周期 (+>Q5I 的条件下孵 和卵巢样品的收集方法：取龟纹瓢虫成虫，用生理
化并配对饲养，供研究其卵黄发生使用。 盐水（?S)P X/2#）将虫体洗净，用滤纸吸干，然后解
!"# 分子量和氨基酸测定方法 剖取出脂肪体和卵巢，加入 1UH 匀浆，(? ??? :W8$&
!"#"! 卵黄蛋白及其抗体的制备：根据龚和等 离心=? 8$&，取上清液待测。
（()5=）方法，从刚产下的龟纹瓢虫卵中提取卵黄蛋 !"$"# 卵黄（原）蛋白含量的测定：采用间接竞争
白，并用1A!6鉴定纯度。将提纯的卵黄蛋白用多 酶联免疫吸附反应法（6>KHA 法），具体方法如下：
点注射法免疫雄兔，制备兔抗卵黄蛋白血清，M*?N 用?S?R 84#W>、C9 )S+ 的包被缓冲液倍比稀释经纯
保存备用。 化的卵黄蛋白，不同浓度卵黄蛋白稀释液纵向包被
!"#"# 卵黄蛋白分子量及其亚基组成的测定：利 （每孔(?? >）。其中 E 孔未包被，作为非特异性吸
!
用 1A!6技术，根据分子量对数和已知蛋白在不同 附对照。包被板放于湿盒中EN孵育过夜。弃包被
浓度凝胶中相对迁移率的比值确定卵黄蛋白的分子 液后加入(P的 UHA室温下继续孵育 ( 3以封阻抗
!"期 李 恺等：龟纹瓢虫卵黄蛋白的分子特性及发生动态 >;;
体的非特异性结合（每孔 !"" #）；弃 $%& 液，用
!
’$%(洗涤 ) 次。将不同稀释浓度的抗血清（!*+,
!") -!*.,!".）横向加入板孔内（每孔!"" #），再将
!
酶标板放于湿盒中室温下孵育/ 0，然后用 ’$%(洗
)次。将山羊抗兔 123456’ 用 ’$%( 以 !*+ """ 稀
释，加入各孔中（每孔!"" #）室温下孵育! 0，倾去
!
山羊抗兔 123456’，’$%(洗 + 次，每次 + 789。在各
孔中加入底物显色液（每孔!"" #），轻轻摇晃，室温
!
孵育!" 789后每孔加入+" #终止液，读数。用纯
!
化的卵黄（原）蛋白制作标准曲线，并通过倍比稀释
法使所测样品的含量位于标准曲线的线性段，由标
准曲线计算卵黄（原）蛋白含量。
! 结果与分析
!"# 卵黄蛋白的分子量及其亚基组成 图/ 龟纹瓢虫卵黄蛋白;<+: %A%4’&3Q
B82C / %A%4’&3QEOTIK8O8GVP8MGFF89
卵黄蛋白在+:、;<+:和!":三种凝胶中的相
OKE7 !"#$%&’()($#*+,(
对迁移率分别为 "</=、"<!) 和 "<"+，根据分子量对
D：蛋白质分子量标准’KEMG897EFGHIFJKLG820M7JK@GK；!：卵黄蛋白
数和已知蛋白在不同浓度凝胶中的相对迁移率的比
W8MGFF89C
值作图（图 !），计算出卵黄蛋白的分子量为 />.<=!
?."<;" @A。
图) 龟纹瓢虫卵黄蛋白亚基组成及分子量测定
图! 龟纹瓢虫卵黄蛋白分子量测定 B82C ) %IXI98MNJ9V7EFGHIFJKLG820MGNM87JM8E9EO
B82C ! DEFGHIFJKLG820MGNM87JM8E9EOP8MGFF89 P8MGFF89OKE7 !"#$%&’()($#*+,(
OKE7 !"#$%&’()($#*+,( 酪氨酸（(UK）S丝氨酸（%GK）S精氨酸（&K2）S苯丙氨
卵黄蛋白经 %A%4’&3Q 后，显示 / 条明显的条 酸（’0G）S色氨酸（(KT）S蛋氨酸（DGM），其中色氨酸
带（图/），表明该蛋白由两种亚基组成；将已知蛋白 （(KT）和蛋氨酸（DGM）含量较低，仅为 "<+": 和
的分子量对数和相对迁移率作图（图 )），计算出两 "<!!:；半胱氨酸（YUN）因在实验中完全水解而无法
种亚基的分子量分别为!..<R=?"<") @A和+!</)? 检测。
"</; @A。 !"$ 卵黄发生过程中卵黄蛋白含量的动态变化
!"! 卵黄蛋白的氨基酸组成和含量 !"$"# 龟纹瓢虫脂肪体中卵黄原蛋白含量的变化：
卵黄蛋白的氨基酸组成和含量见表 !。从表中 从图（. &）可见，刚羽化的成虫脂肪体中未检测到卵
可见，卵黄蛋白氨基酸组成的特点是：必需氨基酸 黄原蛋白，第/天卵黄原蛋白含量达到/<// 72Z7#，
总量（+;<.=:）高于非必需氨基酸总量（./<+/:）。 在随后的几天内卵黄原蛋白含量直线上升，到第 R
其中谷氨酸（3FI）含量最高，为!+</R:，其余依次为 天达到;;<.) 72Z7#，在羽化后R-!.天内卵黄原蛋
亮氨酸（#GI）S 天门冬氨酸（&NT）S 赖氨酸（#UN）S 白的含量维持在最高水平，之后稍有回落，但仍保持
9?8 昆虫学报 62"#7,"/5/$/+&2#8&,&2# =E卷
较高水平。
表! 卵黄蛋白的氨基酸组成和含量
"#$%&! ’()*+#,)-,+(.+/)0)+*#*-,+*0&*0+12)0&%%)*
13+( !"#$%&’()($#*+,(
!
必需氨基酸 百分含量（-）! 非必需氨基酸 百分含量（-）
!""#$%&’( .#/+#$%’0#*1! 2*$3#""#$%&’( .#/+#$%’0#
!
’)&$*’+&, ’)&$*’+&, ! ’)&$*’+&, *1’)&$*’+&,
苏氨酸45/ 6789 !!天门冬氨酸:"; 97<=
丝氨酸>#/ <7?? !! 谷氨酸@(A B=7C<
缬氨酸D’( =7?E !! 甘氨酸@(F G7BB
蛋氨酸H#% E7BB !! 丙氨酸:(’ G7=G
异亮氨酸I(# =788 !! 酪氨酸4F/ ?7EE
亮氨酸J#A 97?< !! 色氨酸4/; E7=E
苯丙氨酸.5# <76E !! 脯氨酸./* G768
组氨酸K&" C7C< !!
赖氨酸JF" 97EE !!
精氨酸:/0 <7?B !!
总和4*%’( =?768 !! 总和4*%’( 6C7=C
45654 龟纹瓢虫血淋巴中卵黄原蛋白含量的变化：
由图（6 L）可见，在刚羽化的龟纹瓢虫血淋巴中亦未
检测到卵黄原蛋白，第C天卵黄原蛋白含量较低，仅
为E7E= )0M)J，随后卵黄原蛋白含量开始上升，第6
天后直线上升，至第 8 天达到最大值，含量为 G=766
)0M)J，之后有所回落并保持较高水平。
45656 龟纹瓢虫卵巢中卵黄蛋白含量的变化：由
图（6 N）可见，在刚羽化的雌虫中检测不到卵黄蛋 图6 龟纹瓢虫脂肪体（:）、血淋巴（L）中卵黄原蛋白
白，第C天卵黄蛋白的含量较低为87B= )0M)J，随后 及卵巢中卵黄蛋白（N）的含量
立即进入快速上升期，至第 < 天含量达到 B9<78C T&0S 6 N5’$0#"&$+*$%#$%"*1U&%#((*0#$&$&$%5#1’%
)0M)J，第8天时达到最大值，含量为CB679B )0M)J， V*,F（:）’$,5’#)*(F);5（L）’$,U&%#((&$&$*U’/F
之后略有回落，但其含量仍保持较高水平。 （N）*1 .(/’0$!#1#’/,&2#
类是具有大小两种亚基基因的原始昆虫及现有的大
6 讨论 多数昆虫；第二类是编码小亚基的基因丢失或失去
了表达活性，而只有编码大亚基的基因具转录活性，
65! 卵黄蛋白的基本特性 因此形成的卵黄蛋白仅有大亚基组成，如埃及伊蚊
蛋白质的分子量及其亚基组成是该蛋白的基本 只含有一种大亚基（K’/$&"5 !" #$S，B98C）；第三类是
属性，也是进一步了解其功能的基础。在昆虫中，目 编码大亚基的基因丢失或失去表达活性，而只有编
前已知的卵黄蛋白分子量范围在CBEO<C= PQ之间 码小亚基的基因具转录活性，这类昆虫通常可以产
（IRA)& !" #$S，B996），如埃及伊蚊为 G<E PQ，飞蝗为 生 G 个分子量很接近的小亚基，如黑腹果蝇
==E PQ，褐飞虱 %&$#’#()#"# $*+!,- 约为 GB6 PQ，七星 3(/-/’4&$#5!$#,/+#-"!( 的卵黄蛋白就由 G 个小亚基
瓢虫在 C8E O GEE PQ 之间（N5#$ !" #$S，B9?8；龚和 组成，分别为 66 PQ、6= PQ 和 6< PQ（K’/$&"5 ’$,
等，B98C；K’/$&"5 !" #$S，B98C；戴华国和衣维贤， W5&%#，B98C）。本研究通过 >Q>3.:@! 分析发现，龟
CEE<）。本研究证实，龟纹瓢虫卵黄蛋白在自然状态 纹瓢虫的卵黄蛋白有两种分子量大小不同的亚基组
下分子量约为C96 PQ，与七星瓢虫卵黄蛋白的分子 成，其分子量分别为B66S<8 PQ和=B7CG PQ，因此该
量较为接近。 蛋白为一个由大、小亚基组成的多聚体，与上述的第
昆虫卵黄蛋白通常具有BOG个亚基组成，根据 一类卵黄蛋白相似。
本实验测定龟纹瓢虫卵黄蛋白氨基酸的组成，
亚基的组成及其分子量大小可分为三种类型：第一
!%期 李 恺等：龟纹瓢虫卵黄蛋白的分子特性及发生动态 "#"
并根据忻介六和苏德明（!"#"）对昆虫十种常见必需 （龚和等，!"$%；=,>)?*+ ,(- 5?,->,++,，!""4；叶恭银
氨基酸的界定将其分为两大类：必需氨基酸和非必 等，!"""；陶淑霞等，4%%@），但有些昆虫如双翅目，其
需氨基酸，通过对所测结果的分析以及与已报道种 卵巢也具有合成卵黄蛋白的能力，甚至有些种类如
类的比较发现，龟纹瓢虫卵黄蛋白的氨基酸组成和 厩螫蝇 6*(’(78% ,"2,&*#"0% 的卵黄蛋白完全由卵巢合
含量与亲缘关系较近的七星瓢虫（龚和等，!"$%）十 成（A?*( /* "2B，!"$#）。此外，脂肪体合成的卵黄原
分相似，而与亲缘关系较远的德国蜚蠊和飞蝗 蛋白通常被分泌到血淋巴，再经血淋巴转运至卵巢，
（&’()*+ ,(- .,(，!"#/）差别较大。 并通过卵巢上的卵黄蛋白受体逆浓度梯度选择性地
从上述的结果不难发现，虽然不同的物种其卵 被摄取进入卵巢。本研究发现，在龟纹瓢虫羽化后
黄蛋白的分子量以及氨基酸组成存在差异，但龟纹 第4天就能在脂肪体中检测到卵黄原蛋白，且随着
瓢虫卵黄蛋白的分子量大小以及氨基酸组成，均与 时间的推移，其含量急剧增加。这一结果表明，龟纹
其亲缘关系较近的物种有较大的相似性，这是否与 瓢虫卵黄原蛋白与大多数昆虫一样也是由脂肪体合
亲缘关系的远近有关，尚需进一步深入研究。 成的。而血淋巴中同样较高的卵黄原蛋白含量以及
!"# 卵黄蛋白含量的测定 血淋巴中卵黄原蛋白达到峰值的时间则晚于脂肪
随着科学技术的发展，卵黄蛋白定量测定的方 体，表明脂肪体合成的卵黄原蛋白同样是通过血淋
法也不断地更新。最初研究者通常采用免疫扩散、 巴转运的。此外，羽化后第4天，在卵巢中即已能检
火箭免疫电泳等方法对卵黄蛋白的含量进行测定， 测到较高含量的卵黄蛋白，这是否说明龟纹瓢虫卵
如龚和等（!"$%）应用免疫扩散技术研究了七星瓢虫 巢也与七星瓢虫（龚和等，!"$%）同样具有合成卵黄
卵黄蛋白的发生，01,-+*2等（!""3）运用火箭免疫电 原蛋白的能力，尚有待进一步验证。
泳法研究了 !"#"$%&$% ’(#(%$% 的卵黄发生，叶恭银等
参 考 文 献（$%&%’%()%*）
（!"""）用火箭免疫电泳测定了天蚕卵黄原蛋白在脂
肪体、血淋巴和卵巢中的动态变化，彭宇等（4%%%）亦 <-,67C;，D>+>E>.<，!"$FB G>H*++>(,(- I>H*++JK*(>( LJ(L*(H1,H>J(7-’1>(K
采用该方法测定了真水狼蛛 )&#"*" +&#"*&,$% 胚胎发 JJK*(*7>7 >( H?* M>17H KJ(JH1JE?>L L2L+* JM H?* ?J’7*M+2，9$%,"
育过程中卵黄蛋白的变化。但这些方法特别是免疫 :(’/%*&,"B ;B <0%/,*).8%&(2B，4"：#4FN#FFB
<-,67C;，D>+>E> .<，O> ;P，4%%4B 8MM*LH JM ,K*，->*H，->,E,’7* ,(-
扩散法，灵敏度不高，且不适宜大量样品的检测（于
Q’I*(>+*?J16J(*J(JJK*(*7>7,(-H?*,6J’(HJMI>H*++JK*(>(,(-I>H*++>(
长明等，!""$）。虽然 5’6,7 等早在 !"$4 年建立了
>( H?* HRJ7EJHH*- 7H>() S’K， )/#&22$% 5&(,$2"*$% （T*H*1JEH*1,：
89:;<竞争法测定过蜚蠊 -"$+.(/*" ,&0/#/" 卵黄蛋 .*(H,HJ6>-,*）B ;B <0%/,*).8%&(2B，@$：@##N@$/B
白含量，但其实验未采用酶标板进行，而且其抗原用 01,-+*2UC，V,7*HH>V，A*LL?*HH>(><，W>J1K>D，!""3B G>H*++JK*(*7>7>(H?*
碱性磷酸酶标记，显色底物复杂，增加了工作量，不 ,++,H*LHJ6>X*- 7H>L) >(7*LH !"#"$%&$% ’(#(%$%（01B）（.?,76,HJ-*,：
适合大量样品的快速测定。近年来，随着研究进一 9J(L?J->(,*）B !(’+B 1&(,./’B ).8%&(2B，!!（% !）：433N4//B
A?*(<A，&>6T=，V,2*1=C，!"$#B G>H*++JK*(*7>7>( 7H,S+*M+2 6*(’(78%
步完善，89:;<竞争法逐渐应用到昆虫卵黄蛋白的
,"2,&*#"0%B !(’+B 1&(,./’B ).8%&(2B，$$0：$"#N"%FB
定量测定上，如于长明等（!""$）建立了 89:;<直接
A?*(UP，;?*( U，;J(K 59，Y?,(K9，O,( OT，4%%4B 8MM*LH JM -(%/’"
法测定德国小蠊 12"**/22" 3/#’"0&," 卵黄蛋白含量的 2(,$%*"/J(H?*LJ(H*(HJMI>H*++JK*(>(JM 4(,$%*"’&3#"*(#&"’"0&2/0%&%B
方法；陈建新等（4%%4）运用该法测定了蝗虫微孢子 =,*">0*(’(2B 6&0B，@（3 4）：!#%N!#@B［陈建新，沈杰，宋敦伦，
虫 -(%/’" 2(,$%*"/ 对东亚飞蝗 4(,$%*" ’&3#"*(#&" 张龙，严毓骅，4%%4B 蝗虫微孢子虫对东亚飞蝗卵黄原蛋白含
’"0&2/0%&% 卵黄原蛋白含量的影响；<-,67等（4%%4） 量的影响B 昆虫学报，@（3 4）：!#%N!#@］
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运用灵敏度更高的间接竞争89:;<方法检测了蝽象
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龟纹瓢虫中运用间接竞争 89:;<方法和酶标板对其 A?>(JT，!"##B D’1H?*1 L?,1,LH*1>X,H>J( JM +*E>-JEH*1,( I>H*++JK*(>( M1J6
卵黄蛋白进行了检测，实验结果证实，该方法具有较 ?*6J+26E?,(-6,H’1**KK7B <0%/,*1&(,./’B，#：!43N!F!B
高的灵敏度，且适于大量样品的测定。 5,> TW，O> ZP，4%%/B ;*E,1,H>J( ,(- L?,1,LH*1>X,H>J( JM I>H*++>( JM
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6&0B，@（" !）：4"NFFB［戴华国，衣维贤，4%%/B 褐飞虱卵黄蛋白
卵黄蛋白的合成场所以及转运途径也是研究者
的分离及其生化特性B 昆虫学报，@（" !）：4"NFF］
关心的一个焦点。有关脂肪体离体培养的研究表
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明，大多数昆虫卵黄蛋白都是由其体内脂肪体合成 >(I>H*++JK*(*7>7B =00B @/?B >0*(’(2B，!@：@"N!%$B
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-9A."C$A"##$&%-9%"C"0(#*-**$&"##$8%? !#26.0+#7;’/@*0.>3>6*-2+1260+ （责任编辑：黄玲巧）