Table Of Content云 南 植 物 研 究 , ():
暋2010 322 134~140
ActaBotanicaYunnanica : /
暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋DOI10灡3724SP灡J灡1143灡2010灡09216
拟南芥黄化突变体chlm灢 的基因定位与分析*
4
曹志林 ,,林冠男 ,丁文庆 ,杨仲南 ,崔永兰**
12 1 1 1 1
上海师范大学生命与环境科学学院 上海 河南工程学院资源与环境工程系 河南 郑州
(1 , 暋200234;2 , 暋451191)
摘要:叶绿素是光合作用必需的重要色素 其合成需要 原卟啉 甲基转移酶等一系列酶的催化 我们
, Mg灢 桖 。
通过筛选拟南芥 乙基磺酸甲酯 突变体库 分离到一个黄化突变体 该
EMS( ,ethyl灢methanesulphonate) , 。
突变体叶绿素含量显著减少 叶绿体内垛叠的基粒缺失 遗传学分析表明 该突变体的黄化表型是由单基
, 。 ,
因控制的隐性性状 利用图位克隆的方法最终将基因定位在第 条染色体分子标记 和 之
。 IV F13M23 T30C3
间 的区间内 其中包含编码 原卟啉 甲基转移酶的 基因 通过测序及等位分析表明该
114kb , Mg灢 桖 CHLM 。
突变体是 的等位突变体 命名为 在 中 蛋白的 突变成 说明
chlm , chlm灢4。 chlm灢4 ,CHLM Gly59 Glu59,
对于 原卟啉 甲基转移酶功能的行使是必需的
Gly59 Mg灢 桖 。
关键词:拟南芥 等位分析 图位克隆
;CHLM ; ;
中图分类号: 文献标识码: 文章编号:
Q78暋暋暋暋暋暋暋 A暋暋暋暋 暋暋暋 0253灢2700(2010)02灢134灢07
MappingandAnalysisofaYellowMutantchlm灢
4
ofArabidopsisthaliana Cruciferae
( )
1,2 1 1
CAOZhi灢Lin ,LINGuan灢Nan,DINGWen灢Qing,
1 1**
YANGZhong灢Nan,CUIYong灢Lan
(1CollegeofLifeandEnvironment,ShanghaiNormalUniversity,Shanghai200234,China;
(2DepartmentofResourceandEnvironmentalEngineering,HenanInstitute
ofEngineering,Zhengzhou451191,China)
Abstract
:Chlorophyllsareessentialforphotosynthesis.Chlorophyllbiosynthesisiscatalyzedbyaseriesof
enzymecomplexes,suchasMg灢protoporphyrinIXmethyltransferase.AyellowmutantofArabidopsiswas
isolatedusinganenthyl灢methanesulfonate(EMS)mutagenesisstrategy.Chlorophyllcontentdramaticallyre灢
ducedandgranastackingwasabsentinthemutant.Geneticanalysisindicatedthatthemutantwascontrolled
byasinglerecessivegene.Usingmap灢basedcloningstrategy,thegeneresponsibleforthemutantphenotype
wasmappedtoaregionof114kbbetweenthemolecularmarkersF13M23andT30C3onchromosome4,in
whichtheCHLMgeneencodingMg灢protoporphyrinIXmethyltransferasewasincluded.Themutantwas
provedtobeanallelicmutantofCHLMgenebysequencingandallelismtestandthenwasdesignatedas
chlm灢4.Gly59ofCHLMwasreplacedbyGlu59inchlm灢4,whichindicatedthatGly59wasessentialforthe
functionofMg灢protoporphyrinIXmethyltransferase.
Keywords
:Arabidopsisthaliana;CHLM ;Allelismtest;Map灢basedcloning
叶绿素广泛存在于植物和光合细菌中 在收 作用 等 和其他生命物质一
暋暋 , (Fromme ,2003)。
集传递光能以及驱动电子传递过程中起着重要的 样 叶绿素也在不断进行合成与分解代谢 叶绿
, 。
基金项目 国家重点基础研究发展计划 计划 项目
* : (973 ) (2009CB118504)
通讯作者
** :Authorforcorrespondence;E灢mail:ylcui@shnu灡edu灡cn
收稿日期 接受发表
:2009灢11灢06,2009灢12灢28
作者简介 曹志林 男 讲师 在读硕士研究生 主要从事植物功能基因组学研究
: (1981-) , , , 。E灢mail:zhilincao@yahoo灡cn
期 曹志林等 拟南芥黄化突变体 的基因定位与分析
2 暋暋暋暋暋 暋暋暋暋暋暋 : chlm灢4 暋暋暋暋暋 暋暋暋暋暋暋13暋5
素代谢过程中某些环节出现问题 就有可能形成 在着 直 接 相 互 作 用
, (Alawadyand Grimm,
叶色突变体 出现白化 等 黄 通过进一步分析表达 基因反义
, (Pontier ,2007)、 2005)。 CHLM
化 等 等 常 绿 和正义 的转基因烟草植株
(Kim ,2005;Jung ,2003)、 RNA RNA ,Alawady
等 等突变表型 发现 的甲基转移酶
(Thomas ,2002) 。 andGrimm (2005) CHLM
目前参与高等植物叶绿素生物合成的酶及基 活性的变化可以参与直接调控 编码谷氨
HemA (
因都已鉴定 由 个基因编码的 种酶催化从 酰 还原酶 编码谷氨酸 半醛氨
, 27 15 灢tRNA )、Gsa( 灢1灢
谷氨酸到叶绿素 的生物合成过程 等 基转移酶 以及 编码镁螯合酶 亚基
b (Nagata , ) CHLH ( H )
谷氨酸经谷氨酰 还原酶 这些叶绿素合成代谢调节酶的基因转录活动 最
2005)。 灢tRNA (HE灢 。
谷氨酸 半醛氨基转移酶 等酶 新研究结果表明 的活性与植物体内的
MA)、 灢1灢 (GSA) ,CHLM
的催化形成 氨基酮戊酸 两分子的 叶酸状态有关 等
5灢 (ALA)。 (VanWilder ,2009)。
合成含吡咯环的胆色素原 个胆色素原 在本文中 我们鉴定并分析了一个拟南芥黄
ALA ,4 ,
再聚合形成原卟啉 原卟啉 是叶绿素和亚铁 化突变体 遗传学分析表明 该突变体
桖。 桖 chlm灢4。 ,
血红素共同合成途径中的最后一个中间产物 在 的黄化表型是由单基因控制的隐性性状 我们通
, 。
亚铁螯合酶 催化下与铁结合形 过图位克隆的方法克隆了该基因 结果表明该突
(ferrochelatase) ,
成亚铁血红素 而在镁螯合酶 变体是由于 蛋白的 突变成 引
, (Mg灢chelatase) CHLM Gly59 Glu59
作用下导入镁生成 原卟啉 原卟啉 起的
Mg灢 桖。Mg灢 桖 。
经 原卟啉 甲基转移酶
Mg灢 桖 (Mg灢protoporphy灢
的催化 第 材料和方法
rinIXmethyltransferase,CHLM) , 1暋
位丙酸侧链的羧基被甲基化 生成 原卟 植物材料与生长条件
13 , Mg灢 1灡1暋
啉 甲酯 拟南芥 分别以
桖 (Mg灢protoporphyrinIX monomethyl (Arabidopsisthaliana) Landsberg
后者再经 原卟啉 甲酯环化酶 和 两种生态型为遗传背
ester)。 Mg灢 桖 erecta(Ler) Columbia(Col灢0)
原叶绿素酯氧化还原酶 等一 景 的等位 插入突变体
(CRD1)、 (POR) ,chlm T灢DNA chlm灢2 (Stock
系列酶的催化最终形成叶绿素a和叶绿素b。 number:SALK_由110265)和chlm灢3 (Stocknumber:
高等植物中 拟南芥 等 和 SALK_028455) ABRC (ArabidopsisBiologicalRe灢
, (Block ,2002)
烟草 等 的 基因已经 sourceCenter;http://www灡biosci灡ohio灢state灡edu/pc灢
(Alawady ,2005) CHLM 提供 种植方法及
被克隆 其中拟南芥 基因 mb/Facilities/abrc/abrchome灡htm) ,
, CHLM (At4g25080) 生长条件同易君等
编码的 原卟啉 甲基转移酶定位于类囊体和 (2006)。
Mg灢 桖 方法
被膜两种叶绿体膜系统中 等 1灡2暋
(Block ,2002)。 野生型和突变体 的叶绿体电镜观察
年 等 分离鉴定了一株由 1灡2灡1暋 chlm灢4
取生长 天的野生型和突变体的子叶 置于 戊
2007 ,Pontier (2007) 5 , 2灡5%
于 插入导致的 基因敲除的拟南 二醛 磷酸缓冲液 中抽气 固定 再用
T灢DNA CHLM ( ,pH7灡2) ,0曟 1h,
芥突变体 在持续中等强度光照下 的锇酸 固定过夜 次日用磷酸缓冲液洗涤几次后
chlm 。chlm 1% 4曟 。 ,
呈现白化致死表型 不能长出真叶 若 天后转 经乙醇梯度脱水 然后用系列梯度的环氧树脂 环氧丙烷
, ; 5 , /
移至弱光下培养 则可以长出黄化的真叶 对该 渗透 最后包埋在 树脂中 样品经切片后 用
, 。 , Epon812 。 ,
突变体的分析表明 基因对于叶绿素的 醋酸铀及柠檬酸铅染色 再通过透射电镜进行观察
, 。
,CHLM
野生型和突变体 的叶绿体色素含量的测定
生物合成以及含有叶绿素的蛋白复合体如光系统
1灡2灡2暋 chlm灢4
取生长 周的野生型和 的叶片提取叶绿体色
光系统 和细胞色素 复合体的形成都是 暋暋 3 chlm灢4
栺、 栻 b6f 素 具体方法参照
必需的 的底物 原卟啉 是核编码 , LichtenthalerandWellburn(1983)。
,CHLM Mg灢 桖 分子标记的建立 参照陈辉等
的光合基因表达的负调控因子 的产物 1灡2灡3暋 暋 (2007)。
,CHLM 图位克隆 用于遗传学定位的 群体通
原卟啉 甲酯在叶绿体和细胞核的通讯中起 1灡2灡4暋 chlm灢4暋 F2
过 和野生型 杂交得到 基因初
M重g要灢作用 桖烟草的 表达分析表明在幼苗 chlm灢4 (Ler) (Col灢0) 。
定位的方法及所用分子标记参照 等 一旦
。 CHLM Zhu (2008),
转绿过程中存在着甲基转移酶活性的翻译后激活 找到了连锁的分子标记 就在该分子标记附近设计新的
,
过程 并且 和镁螯合酶的 亚基存 分子标记 表 用高通量提取 的方法 等
, CHLM CHLH ( 1), DNA (Xin ,
云 南 植 物 研 究 第 卷
1暋36暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋 暋暋暋暋暋暋暋 暋 暋 暋 暋 暋 暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋 32
提取大批 遗传群体中的突变体单株 对 物合成的相关基因 我们通过乙基磺酸甲酯
2003) F2 DNA, ,
这些植株进行基因型分析 对目的基因进行精细定位 诱变了一批
, 。 (ethyl灢methanesulphonate,EMS)
等位分析 以 插入的 等位突变体
野生型拟南芥 种子 经背景纯化最终筛
1灡2灡5暋为父本 突暋变体T灢DNA 为母本ch进lm行杂交 观察 (Ler) ,
chlm灢2 , chlm灢4 , 选到了一株拟南芥黄化突变体 与野生
植株表型并作基因型分析 chlm灢4。
F1 。 型 相比 植株呈现黄化表型 图
反转录聚合酶链式反应 提取生长 Ler ,chlm灢4 ( 1:
1灡2灡6暋 (RT灢PCR)暋 株型偏小 开花期略有延迟 但在营养
周的野生型 及突变体 和 的 用 A,B), , ,
3 Col chlm灢2 chlm灢4 RNA 生长和生殖生长等方面并无显著差异
于 分 析 具 体 方 法 参 照 等 。
RT灢PCR , Zhu (2008)。
为证明 突变体是否由单个基因控制
基因表达分析引物序列如下
CHLM :CHLMF:GCGAT chlm灢4 ,
我们将野生型 作为父本 突变体
AAGGAGGTTGTGAGG;CHLMR:TTGTTCTGCGGG (Ler) , chlm灢4
做母本杂交得到 植株叶色表型恢复正常
TAATGTATC。 F1,Fl ,
表明该突变为隐性突变 自交得到的 群体
。F1 F2
结果与分析 中野生型与突变体的分离比为
2暋 3暶1 (WT:
chlm灢4突变体的分离、表型和遗传分析 c2 表
2灡1暋 chlm灢4=81暶30, =0灡243,P>0灡5),
为了研究参与叶绿体生物发生以及叶绿素生 明该突变为单基因隐性突变
。
表 精细定位所涉及到的分子标记引物序列
1暋
Table1暋Primersequencesofmolecularmarkersinvolvedinfinemapping
分子标记 正向引物 反向引物
Molecularmarker Forwardprimer Reverseprimer
T32A16 AAAGGAAAATGGACCTAACT GGTTCATAAACTTTCAACTCAA
T22A6 TCGTAACAATGACAACACTTTT ATGAGAATGATTCAACTAGAGATG
F6I7 CACAATGTCCTGAAAGCCAC GGATCCTTGCAGCATAGAAT
F13M23 AATGCTTCCAGCTCGTTTTTA GTCCGGTCAATCTGAGTAGTAT
T30C3 TAGCAGACGAGCTTTATATCG TTTACGATTTATGACAGACCAA
T10C21 ATGGCTGCAGCGAATAAC GCAACGATGTGGTGCTGG
图 野生型 和突变体 及等位杂交 生长 天的幼苗表型
1暋 (A) chlm灢4(B),chlm灢2(C) F1(D) 18
Fig灡1暋18灢day灢oldseedlingsofwild灢type(A),chlm灢4(B),chlm灢2(C)andF1ofallelismtest(D)
期 曹志林等 拟南芥黄化突变体 的基因定位与分析
2 暋暋暋暋暋 暋暋暋暋暋暋 : chlm灢4 暋暋暋暋暋 暋暋暋暋暋暋13暋7
chlm灢4突变体叶绿体色素含量的测定及电 位 首先 我们选用了本实验室开发的在拟南芥
2灡2暋 。 ,
子显微镜观察 基因组 条染色体上分布相对均匀的 个分子
5 20
突变体 的叶片为黄化表型 而叶色 标记 进行了基因的初定位连锁分
chlm灢4 , (Zhu,2008)
主要与叶绿体色素即叶绿素和类胡萝卜素之间的 析 结果表明该突变基因与第 条染色体上的
, IV
比例相关 因此我们对突变体 和野生型 分子标记 与 连锁
, chlm灢4 F7K2 T10C21 。
的叶绿体色素含量进行了测定 结果如表 所 为了对突变体 进一步定位 在分子
, 2 chlm灢4 ,
示 与野生型相比 突变体 的叶绿素 标记 与 之间又设计了一些新的
。 , chlm灢4 a F7K2 T10C21
和 的含量分别减为野生型的 分子标记 表 结合高通量 方法
(Chla) b (Chlb) In/Del ( 1), PCR
和 叶绿素 的比值由野 对突变基因进行精细定位 最终将基因定位在第
1/2 1/4, a/b (Chla/b) ,
生型的 升至 而类胡萝卜素 的 条染色体长臂分子标记 和 之
2灡6 5灡1, (Car) IV F13M23 T30C3
含量减为野生型的 间 的区间内 图
2/3。 114kb ( 3:A)。
在此 区间内 经
表 野生型和突变体chlm灢4的叶绿体色素含量分析 暋暋 114kb , TargetP(version1灡1)
2暋
(http://www灡cbs灡dtu灡dk/services/TargetP/)
Table2暋Chloroplastpigmentcontentsofwild灢type 分析 发现有 个预测为编码叶绿体蛋白的基
(WT)andchlm灢4mutant , 6
因 我们从 获得了这些基因的相应
含量Content(毺g·g灢1FW) WT (Ler) chlm灢4 。 插入株系ABR发C现基因 T灢
Chla 1205灡2暲52灡0 523灡8暲11灡2 DNA , AT4G25080 (CHLM )
的 插入突变体 图 的表型
Chlb 469灡9暲48灡2 102灡2暲6灡9 T灢DNA chlm灢2 ( 3:B)
Car 199灡2暲8灡3 125灡3暲3灡4 图 比较接近突变体 由于表型的
Chla/b 2灡6暲0灡2 5灡1暲0灡2 ( 1:C) chlm灢4。
相似性 我们推测 很可能是 基因
, chlm灢4 CHLM
前人报道的叶色突变体通常伴随叶绿体发育 发生了突变 因此 我们对野生型 和
暋暋 。 , Ler chlm灢
异常 为观察突变体 的叶绿体结构是否 突变体中 基因进行了测序 结果显示
, chlm灢4 4 CHLM , ,
也发生了变化 我们进一步分析了野生型和突变 突变体中 基因发生了一个由
176
, chlm灢4 CHLM G
体中叶绿体的超微结构 透射电镜观察表明 野 到 的转换 从而引起了中性氨基酸
176 59
。 , A , Gly
生型在第 天时形成了比较完整的叶绿体结构 突变为酸性氨基酸 为了
59
5 , (GGA) Glu (GAA)。
可见明显的基粒垛叠 而突变体 的类囊 进一步验证 和 突变体之间是否为等
; chlm灢4 chlm灢4 chlm灢2
体结构松散 且几乎没有垛叠的基粒形成 表明 位突变体 我们以 为父本 为母本
, , , chlm灢2 ,chlm灢4
基因的突变也影响了类囊体片层的正常 进行杂交 所有的 群体均为黄化表型 图
CHLM , F1 ( 1:
垛叠 图 且 实验证明 群体中含有来自父本的
( 2)。 D), PCR F1
突变体chlm灢4的基因定位和分析 标记 数据未显示 综合上述结果 我
2灡3暋 T灢DNA ( )。 ,
为了进一步研究 突变体并最终克隆 们可以确定造成 突变体表型的基因为
chlm灢4 chlm灢4
该基因 我们采用了图位克隆的方法进行基因定 突变体和 为等位突变体
, CHLM ,chlm灢4 chlm灢2 。
图 野生型 左 和突变体 右 生长 天幼苗的子叶叶绿体超微结构 标尺为
2暋 (Ler, ) chlm灢4( ) 5 ( 1毺m)
Fig灡2暋Chloroplastultrastructureof5灢day灢oldcotyledonsofwildtypeandchlm灢4mutant(bars=1毺m)
云 南 植 物 研 究 第 卷
1暋38暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋 暋暋暋暋暋暋暋 暋 暋 暋 暋 暋 暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋 32
图 基因的分子鉴定及蛋白序列分析
3暋CHLM
基因的图位克隆 基因的结构及等位突变体中 插入的位点或核苷酸突变的位置
A.CHLM ;B.CHLM T灢DNA ;C.
基因在野生型及突变体 和 中的表达分析 蛋白序列的特征 箭头所示部位为叶绿
CHLM chlm灢2 chlm灢4 ;D.CHLM 。
体转运肽的剪切位点 黑色阴影部分肽段为跨膜结构域 下标黑线部分肽段为 腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶
; , S-
典型的基序 标示 的氨基酸 为突变体 发生突变的位点
, * G chlm灢4
Fig灡3暋 MolecularidentificationandproteinsequenceanalysisoftheCHLMgene
A.Map灢basedcloningofCHLM;B.GenestructureofCHLMandT灢DNAinsertionornucleotidechangeinallelic
mutants;C.ExpressionanalysisofCHLMgeneinwild灢type(WT)andchlm灢2andchlm灢4;D.Characterizationof
CHLMsequence.ThetransitpeptidecleavagesiteforCHLMasfoundbytheCHLOROPprogramisindicatedbyan
arrow.TwoputativetransmembranesequencesdeterminedbytheTMPREDprogramareindicatedinwhiteletterson
blackbackground.ThepositionofthethreeclassicalmotifsforAdo灢metdependentmethyltransferaseisunderlined
withablackbar.Starindicatespositionoftheaminoacidthatwastransformedinchlm灢4
期 曹志林等 拟南芥黄化突变体 的基因定位与分析
2 暋暋暋暋暋 暋暋暋暋暋暋 : chlm灢4 暋暋暋暋暋 暋暋暋暋暋暋13暋9
讨论 叶绿素合成受阻可能影响基粒类囊体的形成
3暋 3灡2暋
3灡1暋Gly59对于 Mg灢原卟啉桖甲基转移酶功能的 chlm灢4突变体叶绿素含量显著减少,同时
行使是必需的 叶绿体发育受影响 不能形成垛叠的基粒结构
, 。
叶绿素是参与光合作用的重要色素 其合成 诸多研究表明 叶绿素能稳定与其结合的光合蛋
, ,
需要镁螯合酶 原卟啉 甲基转移酶等一系 白复合体并且协助其进入类囊体膜 缺少了叶绿
、Mg灢 桖 ,
列酶的催化 本文鉴定分析了一个新的编码 素 原本与其结合的蛋白复合体会被蛋白酶水解
。 Mg灢 ,
原卟啉 甲基转移酶的基因 发生点突变 等
桖 CHLM (Eichacker ,1996;HooberandHughes,1992;
的黄化突变体 叶绿体色素分析表明 该突变体中叶绿素
chlm灢4。 , PlumleyandSchmidt,1995)。
叶绿素 和叶绿素 的含量显著降低 而 合成受阻或许是影响叶绿体基粒形成的主要原因
a b , RT灢 。
结果显示 基因转录水平并未受影响 CHLM基因的 个等位突变体分析
PCR CHLM 3灡3暋 4
图 推测该基因突变导致了蛋白质序列 与 的白化致死表型相比 及
( 3:C), chlm ,chlm灢2
及结构的改变 从而影响了该蛋白的生物学功能 的黄化突变表型相对较弱 突变体
, 。 chlm灢4 。chlm
用 程 序 中 的插入引起了包含第一个外显子在
TMpred (http://www灡ch灡embnet灡org/ ,T灢DNA
对 蛋白序 内的 端 片段的缺失 使 基因的
software/TMPRED_form灡html) CHLM 5曚 DNA , CHLM
列进行分析 预测该蛋白 端第 至 个氨 功能被敲除 从而呈现白化表型 及该
, N 54 72 , 。chlm灢2
基酸的肽段为一个高度疏水结构域 图 基因的另一个等位突变体 中 分
( 3:D), chlm灢3 ,T灢DNA
推测该疏水结构域为 与叶绿体膜 叶绿 别插在该基因的 非编码区及 非编码区内
CHLM ( 5曚 3曚 ,
体被 膜 和 类 囊 体 膜 结 合 的 部 位 表型分别为黄化和浅绿 结果也表明
) (Block, ,RT灢PCR
突变体在该结构域有一个氨基酸 基因在 中的表达严重下调 图
2002)。chlm灢4 CHLM chlm灢2 ( 3:
发生了突变 由中性氨基酸 变为酸性氨基 表明该基因的非编码区对于基因的表达也起
, Gly59 C),
酸 分析表明该突变使该疏水结 着非常重要的功能 而 突变体是由于第一
Glu59。TMpred 。 chlm灢4
构域的疏水性大大降低 形成跨膜结构域的分值 个外显子中的单碱基突变 使得 的 端
, , CHLM N
从 降为 图 这种疏水性的降低可 疏水结构域的疏水性大大降低 可能影响了
1749 986 ( 4)。 ,
能影响到了 与叶绿体膜的结合 进而影 与叶绿体膜的结合并进而影响 功
CHLM , CHLM CHLM
响到 原卟啉 甲基转移酶的正常功能 使得 能的行使 导致叶绿素含量降低 其突变性质不
Mg灢 桖 , , ,
叶绿素合成受阻 可见 对于 原卟啉 是完全的功能缺失性突变 这可能是其表型较弱
。 ,Gly59 Mg灢 ,
甲基转移酶功能的行使是必需的 的原因
桖 。 。
图 野生型和 的 蛋白 端 个氨基酸肽段的疏水性分析
4暋 chlm灢4 CHLM N 120 。
框内曲线为 处氨基酸所组成的疏水结构域的分析
54~72
Fig灡4暋ComparisionanalysisofCHLMhydropathyprofileofN灢terminal120aminoacidsinwild灢typeandchlm灢4.
box:hydropathyanalysisofhydrophobicdomaincomposedofaminoacids54-72
云 南 植 物 研 究 第 卷
1暋40暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋 暋暋暋暋暋暋暋 暋 暋 暋 暋 暋 暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋暋 32
目前 关于 的分子生物学和生化的
暋暋 , CHLM HooberJK,HughesMJ,1992.Purificationandcharacterization
分析研究已有一些报道 但有些问题仍有待解
, ofamembrane灢boundproteasefromChlamydomonasrein灢
决 的 端疏水结构域仅存在于植物 hardtii[J].PlantPhysiology,99(3):932—937
。CHLM N
中 而在光合细菌等原核生物的 中是没 JungKH,HurJ,RyuCHetal灡,2003.Characterizationofa
, CHLM
ricechlorophylldeficientmutantusingtheT灢DNAgene灢trap
有的 该结构域到底有什么功能 在细
, ? CHLM system[J].PlantandCellPhysiology,44(5):463—472
胞质中合成后被运输到叶绿体 并定位于叶绿体
, KimYK,LeeJY,ChoHSetal灡,2005.Inactivationoforganel灢
被膜和类囊体膜 这种双重定位对于叶绿素的合
, larglutamyl灢andseryl灢tRNAsynthetasesleadstodevelop灢
成具有重要意义 那么 进入叶绿体后是 mentalarrestofchloroplastsandmitochondriainhigher
, CHLM
如何分选而进入这两种不同的膜结构的 由于同 plants[J].TheJournalofBiologicalChemistry,280(44):
?
37098—37106
相比 是可育的 其营养及生殖生
chlm ,chlm灢4 , LichtenthalerHK,WellburnAR,1983.Determinationoftotal
长没有受到大的影响 因此 的鉴定和分
, chlm灢4 carotenoidsandchlorophyllsaandbofleafextractsindiffer灢
析将有助于解答上述问题 并且有助于对
, entsolvents[J].BiochemicalSocietyTransaction,11:
的遗传学和功能研究 如对 突变 591—592
CHLM , chlm灢4
体进行抑制子和增强子的遗传学研究 NagataN,TanakaR,SatohSetal灡,2005.Identificationofa
。
vinylreductasegeneforchlorophyllsynthesisinArabidopsis
thalianaandimplicationsfortheevolutionofProchlorococ灢
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