Linkage mapping of resistance to abamectin in the diamondback moth using AFLP marker

2007·0.56 MB·

by  Qian, Luo

昆 虫 学 报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$，!"#$%%&，’（% ’）：(&()(*% +,,-%(’(./$0/
"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
小菜蛾对阿维菌素抗性基因的
连锁图谱的构建
!"#$
罗 倩2，$，冯 夏2，吕利华2，!，万树青$，陈焕瑜2
（2< 广东省农业科学院植物保护研究所，广州 ’2%/(%；$< 华南农业大学资源环境学院，广州 ’2%/($）
摘要：世界性害虫小菜蛾 -).#/))$01)’2#/))$（KH）田间种群已对阿维菌素药剂产生了高抗药性。本研究以小菜蛾对
阿维菌素的抗性品系、敏感品系和回交群体组建作图家系，再利用>LKM技术构建小菜蛾对阿维菌素抗性基因的连
锁图谱。用2%组>LKM引物组合对未经药剂处理的小菜蛾成虫N->选择性扩增，共获得2%((条可区分的N->条
带，$&2条带具有多态性，!$ 检验表明只有2$1个位点符合2O2（-P%<%’），其中的22$个构成$*个连锁群，其总长
度为2$$$<&=!；用2%组>LKM引物对经药剂处理后存活的小菜蛾成虫N->扩增，所得的N->条带中有’(个条带
符合分离比2O2，经!"E4"QCA1<%对多态性位点分析，只有32!(.2’、32!2.(和32!(.$标记位点位于同一连锁群，1
个>LKM标记与抗性基因的遗传距离分别为%=!，*<1=!和21<2=!。比较分析得出，抗性基因所在的连锁群是第’
连锁群。结果显示>LKM连锁图谱对小菜蛾对阿维菌素的抗性监测具有很好的应用潜力。
关键词：小菜蛾；阿维菌素；抗性基因；>LKM标记
中图分类号：R0/’ 文献标识码：> 文章编号：%(’(./$0（/ $%%&）%’.%(&(.%&
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小菜蛾 -).#/))$ 01)’2#/))$（KH）是一种危害十字 常严重，对田间常用杀虫剂产生了较强抗药性（唐振
花科蔬菜的世界性害虫，近年来在我国南方为害非 华，$%%%），而且其田间种群对阿维菌素类生物杀虫
基金项目：广东省自然科学基金项目（%1$%$2）
作者简介：罗倩，女，20&0年生，四川人，博士研究生，研究方向为害虫抗药性，3.4"56：67895":95":$;2/1<=84
!通讯作者>7?@8AB8A=8AACDE8:FC:=C，3.4"56：6@67;GFEEA5H=84
收稿日期IC=C5JCF：$%%/.2%.2%；接受日期>==CE?CF：$%%/.2$.$%
7期 罗 倩等：小菜蛾对阿维菌素抗性基因的9>?:连锁图谱的构建 O07
剂也产生了较高抗药性（!"#$% $&’ ()*+,-，.//0；冯 N2K<7M的 > 组合；然后将 > 雄虫（ ）与 9FGA8
. . !
夏等，122.）。12世纪 /2 年代昆虫学家开始利用分 雌虫（"）群体回交得到回交后代。用 .K2 B+L? 区
子生物学技术研究小菜蛾的抗药性机制。34564%等 分剂量处理回交子代，.2个株系的回交子代平均死
（.//7）对小菜蛾抗苏云金杆菌品系的抗药性进行了 亡率为O0KPM [email protected]（$ QP2R02）。统计分析表
89:;分析，标记到..<条与抗性有关的特异性扩增 明，回交子代的存活虫数（抗性个体数）与死亡虫数
带；利用 89:; 方法对抗杀虫双、抗杀螟丹近等基 （杂合子和敏感个体数之和）相比值符合 .J.（ 1 S
!
因系的小菜蛾基因组;=9扩增，获得与抗性有关的 1 ）。饲养生物测定存活幼虫至成虫，将羽化@天
!2K27
特异性扩增带（程罗根等，122.）；利用代表性差异 的成虫置于 T02U冻存。另外，将未经药剂处理幼
分析技术初步分析了小菜蛾敏感品系及其抗杀虫双 虫饲养至成虫并置于 T 02U冻存。冻存成虫用于
和抗溴氰菊酯近等基因系之间的遗传差异，分别获 ;=9模板的提取。
得与抗药性有关的差异片段（李忠英等，1221）。 !"!"$ 生化试剂：%&’!和 ()*8!内切酶以及
34564%等（.///）利用扩增片段长度多态性（9>?:）技 9+=V（上海 H$+W&公司）；双丙烯酰胺，丙烯酰胺和
@
术和鳞翅目昆虫的双相连锁特性开展小菜蛾的苏云
XYGY;（FF!）；’=X:C和尿素（赛百盛公司）；X$" 酶
金杆菌抗性基因连锁研究，将获得120个9>?:标记 （X$Z$X$公司）；[4&48D%4)XG .22 #E ;=9 ?$’’4) :%DC
分为 @. 个连锁群，标记出其苏云金杆菌抗性基因 （GF!）；过硫酸胺及溴酚蓝。接头和引物均由上海
（!"#A.）位置。但目前国内外尚未见有关小菜蛾的 H$+W&公司合成。其余试剂均为国产分析纯试剂。
阿维菌素抗性基因连锁分析的研究报道。
供试原药为//K<M的阿维菌素原药，由浙江海
本研究以小菜蛾对阿维菌素的抗药性为研究对
正化工股份有限公司提供，用于室内小菜蛾的阿维
象，利用鳞翅目昆虫的双相连锁遗传特性和 9>?: 菌素高抗品系的选育和生物测定。
技术，建立小菜蛾抗性遗传家系并寻找与抗性连锁
!"# 生物测定
的9>?: 标记，分析小菜蛾的阿维菌素抗性基因的 采用 !CB$*% 和 ()*+,（- .//.）叶片药膜法进行生
连锁，明确其分子遗传机理，为抗性治理方案的制定
物测定，具体方法是：将菜芯叶片浸于 .K2 B+L?阿
提供科学依据。
维菌素溶液中处理 .2 C，取出放入培养皿中。每皿
接入.2R12头@龄幼虫（1R@ B+L头），以加 2K2.M
! 材料和方法
乳化剂的蒸馏水作对照处理。每处理重复@次。处
理后的幼虫置于（1@N2K7）U、光周期.O?J.2;和相
!"! 试虫和试剂 对湿度07M R <7M的培养箱中培养观察。在处理
!"!"! 试虫：采用蛭石萝卜苗法（陈之浩等，.//2） 1O ,、O< ,和01 ,时，检查并记录幼虫死亡数。
室内饲养小菜蛾供试品系。其中小菜蛾敏感品系
在小菜蛾敏感品系和抗性品系的半致死浓度测
（$#$B45-*&ACDC54E-*#%4 C-)$*&，9FGAH）由广东省农科 定试验中，经 .K2 B+L? 阿维菌素药液处理的 9FGA
院植物保护研究所农药研究室提供；阿维菌素抗性
:H和9FGA8的试虫中，/<M的9FGA:H试虫死亡（$
品系（$#$B45-*&A)4C*C-$&- C-)$*&，9FGA8）由广东省农 Q<2），仅有7M的 9FGA8试虫死亡（$ Q.22），因此
科院植物保护研究所农药研究室长期选育并室内保
确定.K2 B+L?为9FGA:H和9FGA8的区分剂量。
持，本实验时又继代选育了.@代，获得抗性指数/21 !"$ %&’(分析方法
倍的高抗品系。
!"$"! ;=9模板的制备：采用改进的 H$B#)WW6 等
!"!"# 抗性作图家系的构建：小菜蛾的阿维菌素 （./</）方法制备小菜蛾作图家系中父代、母代、> 代
.
抗药性属常染色体、不完全隐性遗传（李腾武等，
和回交后代的供试成虫的 ;=9模板。抗性亲本模
.///），因此 >. 雄虫（!）I 抗性雌虫（"）回交后代 板是从 9FGA8 中随机选取的 .7 头成虫的 ;=9 等
的抗感表现型的分离比例为 .J.，>. 代所有异质性 量混合而成，敏感亲本模板是从 9FGA:H 中随机选
标记位点在回交后代的分离比例也为 .J.。经筛选 取.7头成虫的;=9等量混合而成。从回交群体中
的敏感品系纯合子（$#$B45-*&AED)4 CDC54E-*#%4 C-)$*&， 随机选取1O个未经阿维菌素处理的回交个体，将其
9FGA:H）与9FGA8单对杂交得到 > 代。经.K2 B+L ;=9用于连锁图谱分析；从被阿维菌素处理后存活
.
?区分剂量处理，获得 .2 个平均死亡率达 /.K<7M 的回交群体中选取 1P 头成虫，将其 ;=9 用于抗性
8*L 昆虫学报 (")*!+)#,#-#./"*0/+/"* :;卷
基因分析。 K8;条，平均每组引物产生 ,*F( 条，占总扩增带数
!"#"$ !"#$方法：采用改进的 %&’等（())*）!"#$ 的,:F)LM。经 , 检验，,*( 个多态性位点中只有
!
方法。选择性扩增中用 !"#+!和 $%&! , 种限制 (,7个位点符合(J(（’ N;F;:），占多态性 ?@!带数
性内切酶，参照 -./0.1等（()))）方法，用 !"#+!引 的8:F7)M，占总?@!带数的((F*<M；其余位点为
物［23!!（2(）和 23!4（2,）］与 $%&!引物［536!6 无效位点。结果说明，不同 !"#$ 引物组合产生的
（5(），536!4（5,），5364!（57），53646（58）和53 扩增条带数、多态性条带数和有效位点数存在差异，
649（5:）］组配的 (; 个组合作为选择性扩增的引 !"#$引物有一定的特异性。
物组合。
!"#"# 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测：采用改进
的朱玉芳等（,;;(）电泳方法，将选择性扩增产物加
入，保持<; =恒定功率 7 >；采用许绍斌等（,;;,）
方法对扩增产物银染。
!"% &’()标记数据的统计
!"#$带型的分析和统计，具体操作过程为：将
用 !"#+!引物与 $%&!引物组合扩增的小菜蛾的
敏感品系、抗性品系、" 和回交后代成虫按 ?@!带
(
型的“有”或“无”记录，有带的赋值为(，无带的赋值
为;，缺失或模糊带型记为“A”。用 5BCDB0.E 7F;G
2H$分析回交群体的 !"#$ 标记，再用 5BC?EBI 软
件制作连锁图谱（刘仁虎和孟金陵，,;;7）。!"#$扩
增产生的?@!带的名称由引物 !"#+!与 $%&!的
代号名称及扩增片段顺序编号构成，如 2(5(38 为
23!!（2(）与 536!6（5(）引物组合扩增出来的第 8
条带。
本研究建立的连锁图谱的作图群体为小菜蛾回
图( 引物2,57的选择性扩增产物检测
交子代群体。其中，在未经药剂处理的回交个体中，
"OPQ ( R.1./SOT.BDC1OUO/BSO&VW’OVP
与抗性有关的!"#$标记的分离比的理论值为(J(，
CEOD.E/&DXOVBSO&V2,57
对实测的回交群体的!"#$分离比进行 , 检验，然 5：?@!标准 ?@! DBE0.E；R：敏感品系 !XBD./SOV3’W’/.CSOX1.
!
’SEBOV；+：阿维菌素抗性品系!BXBD./SOV3E.’O’SBVS ’SEBOV；"：敏
后符合分离比(J(的位点被用于连锁图的构建和分
感品系与阿维菌素抗性品系杂交所得第(代 "O1OB1P.V.EBSO&V；
析。 (K,8：未经药剂处理的,8个回交后代个体YVZOTOZWB1’&U S>.
WVSE.BS.ZXB/0/E&’’CE&P.V[Q
$ 结果与分析
用5BCDB0.E 7F; 对 (,7 个有效位点连锁分析
（表,），结果表明在所有获得有效位点中的((,个可
$"! 小菜蛾对阿维菌素抗性的连锁图谱构建与分
构成,<个连锁群（图,），还有((个位点没有连锁关
析
系，不能被组进连锁图谱。这些构建连锁群的位点
用(;组!"#$ 引物组合对未经药剂处理的 ,8
占有效位点的)(F;M，占总多态性位点的8(F7,M。
头小菜蛾成虫?@!扩增，电泳检测的选择性扩增产
由,<个连锁群构成的小菜蛾对阿维菌素抗性连锁
物结果见图 (。经过 !"#$ 带型的分析和统计（表
图谱覆盖基因组的总长度为 ( ,,,F* /5，每个连锁
(），共获得( ;88条可区分的?@!条带，每个引物组
群的标记数,K((个，每个连锁群长度范围为7F,K
合扩增的?@!带数为 *;K(8,条，平均每组引物产
,;,FL /5，平均长度为 87FL* /5，!"#$ 标记的遗传
生(;8条带；在所有 ?@!条带中，有 ,*( 条带具有
距离范围为(F;:K,:F,; /5。
多态性，每个引物组合扩增的多态性?@!带数为,;
E期 罗 倩等：小菜蛾对阿维菌素抗性基因的,J6!连锁图谱的构建 B??
表! "#$%不同引物组合产生的多态性分布
&’()*! +,-./,(0.,121341)561/47,-68*2*/’.*9(59,33*/*2."#$%4/,6*/:16(,2’.,12-
符合454的位点
引物组合 扩增带（条） 多态性（条） 6’&#/#++#)7/’"8%)0%.#*).*9 占总带数的比例（<）
!"#$%"&’$(#)*+#’) ,$-.#/#%0(*)01（(*)01） !’.2$’"-3#1$（(*)01） 带数（条） 占多态性的比例（<） =*+#’’/*$-.#/#%0(*)01
:;$(%"’/(*)01 =*+#’’/-’.2$’"-3#1$
>484 ?? @? 4A BCD4E 4FDCC
>48@ GH @H ? AEDHH ?D?C
>48A 44@ AE 4? BCDE? 4ED4C
>48B 4@H @H G BEDHH ?DEH
>48E 4HE @E G AFDHH CDE?
>@84 44C AH 4G FADAA 4FD4H
>@8@ 4B@ @F 4B EADCE GDCF
>@8A C? @E 44 BBDHH 4@DFB
>@8B 4@A @A G AGD4A ?DA@
>@8E ?H BH 4E A?DEH @4DBA
合计I’+*. 4HBB @?4 4@A BEDAG 44D?C
图@ 部分连锁图谱
J#7K @ 6#)L*7%7"’;-
:?C 昆虫学报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$ A;卷
表! 连锁群特征表
"#$%&! "’#()*+,%(-.#/&/’+01*
!
连锁群编号 标记数目 连锁群长度 标记的平均 !连锁群编号 连锁群长度 标记的平均
遗传图距 ! 标记数目 遗传图距
!"#$%&’ -*./’()0 !"#$%&’&()*+ ! !"#$%&’ !"#$%&’&()*+
&()*+#), .%($’(1 2’#&34（56） 78’(%&’.%($’( ! &()*+#), -*./’()0.%($’(1 2’#&34（56） 78’(%&’.%($’(
"#3’(8%2（56） !! "#3’(8%2（56）
9 : 9;<= ><?@ !! 9A 99 >;><B 9C<:>
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99 A >B<B A<@> !! >A @ >;<> B<?@
9> > >C<> 9:<9; !! >B @ 99<: @<C;
9@ @ @A<C 99<=@ !! >? @ ?A<B >A<>;
9: = 9B;<C 9?<C? !! >C A BC<C 9@<?B
!2! 小菜蛾的阿维菌素抗性基因连锁群的确定 A:个条带符合分离比9O9，再经6%+.%$’( @<;对多态
用9;组7E!N引物对药剂处理存活的>B头小菜 性位点分析，只有@个标记位点进入同一连锁群（图
蛾成虫 G-7进行扩增（图@），所得的 G-7条带中有 :），其余的未有进入。这个连锁群含有与抗性连锁的
标记D96:H9A、D969H:和 D96:H>，该连锁群被称为抗
性基因连锁群，这些7E!N标记与抗性基因间的遗传
距离分别为; 56、C<@ 56和9@<9 56。因此推断标记
D96:H9A是与抗性基因紧密连锁的7E!N标记。比较
分析抗性连锁群和连锁图谱，在连锁图谱中 D96:H
9A、D969H:和 D96:H> 三个 7E!N标记均位于同一连
锁群，即第A连锁群中，因此推断小菜蛾的阿维菌素
抗性基因位于第A连锁群。
图: 与小菜蛾阿维菌素抗药性连锁的7E!N标记图谱
E"&, : !"#$%&’.%+)07E!N.%($’(1%11)5"%3’LM"34
图@ 引物D96:的选择性扩增产物检测
%/%.’53"#(’1"13%#5’)034’L"%.)#L/%5$.)34
E"&, @ F’2’53"8’%.+2"0"5%3")#*1"#&
+(".’(5)./"#%3")#D96:
6：G-7标准 G-7 .%($’(；F：敏感品系 7/%.’53"#H1*15’+3"/2’ 3 讨论
13(%"#；I：阿维菌素抗性品系7/%.’53"#H(’1"13%#313(%"#；@;JAA：
处理存活的 >B 个回交后代个体 F*(8"8)(1 )0 34’ /%5$5()11
+()&’#K3(’%3’LM"34%/%.’53"#, 目前阿维菌素类药剂已被大量地用于小菜蛾防
@期 罗 倩等：小菜蛾对阿维菌素抗性基因的$%&’连锁图谱的构建 80/
治，国内部分地区小菜蛾田间种群已经对其产生了 23+5R&S，&I %&，*45 TE，&I TU，23+5 T*，!""#F B45NKJ 4JV.ILI+N
较高的抗药性（冯夏等，!""#）。本研究在选育出小 VK.AJK;V3I,CW$KL;+GIG=45,+=KNIJ+3AVK45N,4;=4VI5NI4JK5NH4,-
JK=3，$%&"’%%()*%+,"’%%(O 56"(2/"+3+%O 78/O，8（8 #）：#@P!"F［程
菜蛾的阿维菌素高抗品系基础上，利用双相遗传特
罗根，李凤良，韩招久，李忠英，陈之浩，!""#F 小菜蛾对杀虫
性建立小菜蛾的阿维菌素抗性连锁图谱的作图家
双和杀螟丹抗药性遗传的CW$随机扩增多态性研究O 昆虫学
系，再利用 $%&’(银染技术对该家系进行抗性连锁 报，8（8 #）：#@P!"］
作图，用获得的##!个$%&’多态性有效位点构建了 23+5T*，&I<2X，&I%&，*45TE，#//"F Y5I=I4. ;+VK;= K5 =3+J+=3KN LK;
!)个连锁群，即小菜蛾连锁图谱。*+,-+. 等（#///） G<,,+GGIK5 ;+V;KN<,=IK5 45N ;4IGI5R ,4HH4R+ JK=3 I5 .4;R+ G,4.+O
9&8:;+&54.86&%"&.(%768’/6’，（8）：@!P@1F［陈之浩，刘传秀，李凤
曾对小菜蛾抗苏云金杆菌基因家系进行的 $%&’扩
良、韩招久，#//"F小菜蛾继代繁殖大量饲养方法研究初报O 贵
增分析，用获得的 !"0个 $%&’标记组建成 1# 个连
州农业科学，（8）：@!P@1］
锁群，而且#个连锁群对应#条染色体，分析其实验 %+5RX，23+5*U，&<&*，?KU，&<U2，XI+Z*，T345RXX，!""#F $
结果说明小菜蛾有1#条染色体。234和 *45（#///） G=<NAK5=3+;+GIG=45,+KLNI4JK5NH4,-JK=3=K4H4J+,=I5I5S<45RNK5R
曾用小菜蛾脂肪体细胞建立了细胞系 ’6(%7，核型 ’;KMI5,+O 0+&./(%+17+&";<;8/(54.86&%"&.(%=/8>’.,8"*，!（! !）：1@P
分析显示该虫的染色体数有变化，而且其变化范围 1)F［冯夏，陈焕瑜，吕利华，莫严，卢悦昌，谢齐贺，张小雄，
!""#F 广东小菜蛾对阿维菌素的抗性研究O 华南农业大学学报，
较大，为!89#)" 条。本研究中获得 !) 个连锁群，
!（! !）：1@P1)］
与其他研究者的结论相近，但本研究尚不能建立
*+,-+.CS，S4345&E，:4H4G35I-[>，#//@F B45NKJ4JV.ILI+NVK.AJK;V3I,
$%&’标记连锁群与染色体的对应关系。:;4<= 和 CW$ NILL+;+5,+G H+=\++5 G=;4I5G KL NI4JK5NH4,- JK=3（&+VINKV=+;4：
2.4;-+（#//0）报道鳞翅目昆虫的染色体数差异较 ’.<=+..IN4+）G<G,+V=IH.+ K; ;+GIG=45= =K !(68%%&, ";&.8/48’/,8,O 5//O
大，甚至同一个种内其变化也很大，这与进化过程中 2/"+3+%O 7+6O 53’.O，)（) 8）：@1#P@10O
*+,-+.CS，S4345 &E，&I< U[，#///F S+5+=I, J4VVI5R KL ;+GIG=45,+ =K
染色体的融合和断裂有关。另外，本研究供 $%&’
!(68%%&,";&.8/48’/,8,=K6I5GI5NI4JK5NH4,-JK=3<GI5RHIV34GI,.I5-4R+
扩增的作图家系虫数较少，这将导致有效的 $%&’ 454.AGIGO $.+6O ?("%O 56(@O 768O =75，/Q：)101P)100O
标记少，连锁图谱距离精度偏低。 YGJ4I.%，];IR3=CE，#//#F 2;KGG(;+GIG=45,+H+=\++54,A.<;+4I5G+,=R;K\=3
本研究结果表明，与抗性基因连锁的1个 $%&’ ;+R<.4=K;G I5 4 G=;4I5 KL $%&"’%%( )*%+,"’%%(（&O）（&+VINKV=+;4：
标记（>#?8(#@、>#?#(8和 >#?8(!）均位于第 @ 连锁 UVK5KJ+<=IN4+）L;KJ?4.4AGI4O $’,"86O 768O，1（1 8）：1@QP10"O
Y^H4.?，];IR3= CE，#//0F >M4.<4=IK5 KL ;+GIG=45,+，,;KGG(;+GIG=45,+ 45N
群，而且确定了它们与抗性基因的遗传距离，其中
GA5+;RIGJ KL 4H4J+,=I5 45N =+L.<H+5_<;K5 I5 4 J<.=I(;+GIG=45= LI+.N
>#?8(#@是与抗性基因连锁最紧密的 $%&’ 标记。
VKV<.4=IK5KL $%&"’%%()*%+,"’%%(（&+VINKV=+;4：’.<=+..IN4+）O !&%%’"8/+1
*+,-+.等（#///）在标记小菜蛾抗苏云金杆菌基因 2/"+3+%+486(%#’,’(.6;，)0：8)#P8)1O
时，将该抗性基因定位在第0连锁群，即第0染色体 &I:]，S4KX]，T3+5R[T，#///F S+5+=I,454.AGIG45N,;KGG(;+GIG=45,+KL
上，而且标记定位出与 2;A#$, 对应的抗性基因 $%&"’%%()*%+,"’%%( =K 4M+;J+,=I5O $%(/" $.+"’6"8+/，!@（Q）：#!P#8F
［李腾武，高希武，郑炳宗，#///F 小菜蛾对阿维菌素的抗性遗传
（!"#(#）。本实验结果将为小菜蛾对阿维菌素的抗
分析及交互抗性研究O 植物保护，!（@ Q）：#!P#8］
性基因的精确定位提供理论基础。但是由于利用回
&ITU，23+5 T*，23+5R &S，&I %&，*45 TE，!""!F S+5+=I, 454.AGIG KL
交群体获得的连锁图谱完整性差，而且 B$’C、$%&’ NIJ+3AVK;+GIG=45,+ 45N N+.=4J+=3;I5 ;+GIG=45,+ I5 NI4JK5NH4,- JK=3
等分子标记技术无法区分基因型 $$和 $4，因此要 （$%&"’%%( )*%+,"’%%(）HA;+V;+G+5=4=IK54.NILL+;+5,+ 454.AGIGO 7+&";A’,"
想获取与连锁群直接相关的标记，还需对与抗性有 <;8/(0+&./(%+154.86&%"&.(%768’/6’，#（@ 8）：@/PQ#F［李忠英，陈
之浩，程罗根，李凤良，韩招久，!""!F 小菜蛾对杀虫双和溴氰
关的标记进行克隆和测序，并制成探针进行原位杂
菊酯抗性遗传的B$’C分析O 西南农业学报，#（@ 8）：@/PQ#］
交研究。
&I<B*，?+5R E&，!""1F ?4VC;4\：$ JI,;KGKL= +6,+. J4,;K LK; N;4\I5R
R+5+=I,.I5-4R+J4VGH4G+NK5RIM+5R+5+=I,.I5-4R+N4=4O B’.’@8"(,，!@
致谢 感谢广东农科院植物保护研究所何自福博士 （1）：1#0P1!#F［刘仁虎，孟金陵，!""1F ?4VC;4\在>6,+.中绘
和水稻所罗文永博士在实验操作和数据分析方面提 制遗传连锁图的宏O 遗传，!（@ 1）：1#0P1!#］
D4JH;KK-E，%;I=G,3>%，?45I4=IG:，#/)/F ?K.+,<.4;2.K5+：$&4HK;4=K;A
供的帮助。
?45<4.O 2K.NDV;I5R*4;HK;WU：2K.NDV;I5R*4;HK;&4HK;4=K;AO 8Q1
参 考 文 献（!"#"$"%&"’） P8QQO
:45RT*，!"""F :3+ GI=<4=IK5 45N +6V+,=4=IK5 KL I5G+,= ;+GIG=45,+ I5 K<;
234DE，*45 DD，#///F >G=4H.IG3J+5= KL 4 5KM+. ,+.. .I5+ L;KJ $%&"’%%( ,K<5=;AO 2/"+3+%+486(% -/+A%’@4’，10（!）：/0 P #"1F［唐振华，
)*%+,"’%%(L4= HKNI+GO -+.’(/ 0+&./(% +1 2/"+3+%+4*，!/（!）：#!#P !"""F 我国昆虫抗药性研究的现状及展望O 昆虫知识，10（!）：
#!QO /0P#"1］
EDV 昆虫学报 0.*&89*454/4#%.&:%9%.& PV卷
!"#$%&，’(#")*’+，,--./ 0#"12%13**42($%5267189"2:2;2:*<$;52656%9* 法> 遗传，A（E U）：UUPCUUB］
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EEV.CEE,E/ 的构建> 昆虫学报，E（E E）：EDUCE-A］
W$XJ，!#2YM，Y#6=OZ，AVVA/ +;5:3(*#6@"#35@:*%92@;$;*@<2";5(4*"
;%#5656=#6@=*( 3"*;*"4#%526> ’("()%*&+，AE（U）：UUPCUUB/［许绍
斌，陶玉芬，杨昭庆，AVVA/ 简单快速的ST+银染和胶保存方 （责任编辑：黄玲巧）