Kvantifikacija kloramfenikola u hrani za životinje Kvantifikacija kloramfenikola u hrani za životinje

80 Pages·2015·3.23 MB·Croatian

originalni znanstveni rad / original sCientiFiC PaPer
Kvantifikacija kloramfenikola u
hrani za životinje
Nina Bilandžić, M. Mitak, Božica Solomun Kolanović, Ivana Varenina,
Đurđica Božić i Manuela Zadravec
Uvod
kloramfenikol se kao antibiotik nalazi ostataka lijeka u posljednjih
širokog spektra djelovanja oralno (baza nekoliko godina u prehrambenim
ili palmitat) i parenteralno (baza ili proizvodima. tako su preko sustava
sukcinat) koristio u liječenju mastitisa, brzog uzbunjivanja za hranu i hranu za
pijelonefritisa, prostatitisa, meningitisa, životinje RASFF (engl. Rapid Alert System
salmoneloze, infekcija oka, infekcija for Food and Feed) prijavljene povišene
vanjskog uha te drugih infekcija koncentracije u mesu peradi i ostalih
prouzročenih anaerobnim bakterijama životinja, ribi i ribljim proizvodima,
(Dowling, 2006.). rakovima, medu i matičnoj mliječi,
Brojne su studije o oralnoj i mlijeku i mliječnim proizvodima te
parenteralnoj primjeni u ljudi potvrdile hrani za životinje (RASSAF, 2002.–2008.).
da je najznačajniji toksični učinak Stoga je potreban učinkovit nadzor i
kloramfenikola na funkciju koštane praćenje kloramfenikola u proizvodima
srži (WHO, 2004.). U životinja je pri životinjskog podrijetla, ali i u hrani za
primjeni velikih doza ili dugoročene životinje.
terapije utvrđena reverzibilna depresija Veliki broj nesukladnih rezultata
aktivnosti koštane srži u svim vrstama, kloramfenikola (više od 50%) zabilježen je
a ostali efekti u životinja su diarea, u proizvodima uvezenih iz Azije, odnosno
povraćanje, anoreksija i depresija kine, Vijetnama i Indije (RASSAF, 2002.–
(WHO, 2004.). S obzirom da je utvrđeno 2008.). tome mogu biti različiti uzroci kao
da ima citotoksični, genotoksični i što su ilegalno korištenje lijeka u stočarskoj
hematotoksični utjecaj na ljudsko zdravlje proizvodnji, ingestija kloramfenikola
zabranjen je za uporabu u životinja koji potječe iz okoline ili kontaminacija
namijenjenih za hranu u Europskoj sudjelovanjem radnika u proizvodnji, a
uniji (EC, 1994.) te u mnogim drugim koji je koristio kloramfenikol (Berendsen
zemljama, uključujući: SAD, kanadu, i sur., 2010.). Jedno od objašnjenja je i
Australiju, Japan i kinu. Unatoč zabrani, kontaminacija usljed prirodne pojave
kloramfenikol se i dalje nezakonito kloramfenikola u tlu jer ga biosintetiziraju
koristi pri uzgoju životinja zbog svoje mikroorganizmi iz tla Streptomyces
učinkovitost i niske cijene, što pokazuju venezuelae i nekoliko drugih Actynomycetea
Dr. sc. Nina BILANDŽIĆ, dipl. ing. biotehnol., znanstvena savjetnica, dr. sc. Mario MItAk dr. med. vet.,
znanstveni savjetnik, Božica SOLOMUN kOLANOVIĆ, dipl. ing. preh. biotehnol., Ivana VARENINA, dipl.
ing. biotehnol., Đurđica BOŽIĆ, dipl. ing. preh. biotehnol., dr. sc. Manuela ZADRAVEC, dr. med. vet., Odjel
za veterinarsko javno zdravstvo, Hrvatski veterinarski institut, Zagreb
VETERINARSKA STANICA 46 (4), 2015. 257
NINA BIlANdžIć, M. MITAK, BožICA SoloMuN KolANoVIć, IVANA VARENINA, ĐuRĐICA BožIć i MANuElA ZAdRAVEC
(EMEA, 1994.). Pretpostavljeno je da trava hrane za životinje farmi diljem Hrvatske.
i bilje mogu apsorbirati i akumulirati S obzirom na vrstu uzoraka hrane za
kloramfenikol te ako se koriste za ispašu ili životinje broj uzoraka je bio namijenjen
se dodaju hrani za životinje ili kao krmno za: 56 perad (konzumne nesilice, pilići,
bilje mogu posljedično kontaminirati purići), 50 goveda (muzne krave,
proizvode životinjskog podrijetla junad), 50 svinje (tovljenici, odojci).
(Berendsen i sur., 2010.). Nakon prikupljanja, uzorci su usitnjeni,
kontrola kloramfenikol u Europskoj pohranjeni u polietilenske vrećice,
se Uniji provodi primjenom kriterija označeni te čuvani na tamnom i suhom
granice najmanje zahtjevane učinkovitosti mjestu do analize.
izvedbe metode (MRPL, engl. minimum
required performance limit) od 0,3 µg/kg reagensi i standardi
koja predstavlja minimalnu koncentraciju
koncentracije kloramfenikola
kloramfenikola u uzorku koju metoda
određivane su primjenom ELISA
mora detektirati (EC, 2003.). to je ujedno
kita proizvođača EuroProxima B.V.
i referentna točka postupanja koja se
(Arnhem, Nizozemska). kit se sastoji
koristi u ocjeni ispravnosti svih vrsta
od: mikrotitarska ploča (96 jažica),
hrane. Za kvantifikaciju koncentracija
standardna otopina kloramfenikola 100
kloramfenikola danas se koriste
ppb (spremno za uporabu), otopine
orijentacijski imunoenzimski testovi
standarda kloramfenikola (2, 0,5, 0,2,
(ELISA) te plinska kromatografija s ECD
0,1, 0,05, 0,025 i 0 ng/mL), pufer za
detekcijom, GC-ECD (ECD, engl. Electro
razrijeđivanje (4x koncentriran), pufer
Capture Detector) (Cerkvenik-Flajs, 2006.),
za ispiranje (20x koncentriran), pufer za
odnosno za potvrdne analize metode
rekonstituciju konjugata i protutijela/
plinske i tekućinske kromatografije-
zero standard (spremno za uporabu),
tandemske spektrometrije masa (GC-MS/
otopin supstrat/kromogen (spremno
MS, LC-MS/MS) (Stolker i Brinkman,
za uporabu), stop otopine (spremno
2005., Peng i sur., 2006., Rønning i sur.,
za uporabu), konjugat (liofilizirani),
2006., Berendsen i sur., 2010., Douny i
protutijela (liofilizirano).
sur., 2013.).
Standard kloramfenikola nabavljen je
Ova je studija nastala na temelju
literaturnih podataka koji sugeriraju od proizvođača Sigma (St. Louis, SAD).
da se kloramfenikol može prirodno Metanol, kloroform i amonij acetat nabavljeni
nalaziti u biljkama i travi koje se koriste su od J. t. Baker (Deventer, Nizozemska).
za hranidbu, odnosno ispašu životinja Etil acetat je nabavljen od Carlo Erba
koje se koriste u proizvodnji namirnica (Milano, Italija). Izooktan je nabavljen
životinjskog podrijetla. Stoga je glavni cilj od kemike (Zagreb, Hrvatska). Dušik 5,0
ovog istraživanja bio provesti određivanje i 5,5 za uparavnje uzoraka nabavljen je od
kloramfenikola u različitim vrstama SOL spa (Monza, Italija). Ultra čista voda je
hrane za životinje. Za kvantifikaciju je pripremljena koristeći sustav Direct Q 5UV
primijenjena orijentacijska ELISA metoda (Merck Millipore, Darmstadt, Njemačka).
koja je validirana prema Odluci komisije Bazne otopine standarda pripremljene
2002/657/EC (EC, 2002.). su otapanjem analita u metanolu. Radne
otopine upotrebljavane za obogaćivanje
slijepih uzoraka dobivene su daljnjim
Materijali i metode
razrjeđivanjem, koristeći isto otapalo do
Prikupljanje uzoraka koncentracije od 1 µg/mL. Bazne i radne
tijekom 2013. i 2014. godine ukupno otopine standarda su pohranjene na +2 do
je prikupljeno ukupno 156 uzoraka +8 oC.
VETERINARSKA STANICA 46 (4), 257-263, 2015.
258
Kvantifikacija kloramfenikola u hrani za životinje / Quantification of Chloramphenicol Residues in Feed
instrumenti granica kvantifikacije LOQ izračunati
U pripremi uzorka korišteni su su nakon analiziranja 20 negativnih
sljedeći instrumenti: homogenizator uzoraka, odnosno tako da se srednjoj
Ultra-turrax® model t25IkA®, Vortex vrijednosti ponavljanih uzoraka
model VWR, VX-2500 (IkA® -WERkE pribroji 3 (LOD), odnosno 10 (LOQ)
GMBH & CO.kG, Njemačka), centrifuga standardnih devijacija uzoraka. Granična
ROtANtA 460 R (Hettich Zentrifugen, koncentracija CCα određena je kao
tuttlingen, Njemačka), uparivač dušikom zbroj srednje vrijednosti koncentracije
N-EVAP model 111 (Orgamonation slijepih uzoraka i standardne devijacije
Associates Inc., Berlin, Njemačka). odgovora slijepih uzoraka pomnožene
Vrijednosti apsorbance za ELISA metodu s 2. Sposobnost dokazivanja CCβ
mjerene su na mikročitaču tecan model (β=5%) je dobivena kao zbroj granične
Sunrise (tecan, Austria GmbH, Salzburg, koncentracije i odgovarajuće standardne
Austrija). devijacije pomnožene s 1,64. Iskorištenje
je određeno obogaćivanjem slijepih
Priprema uzorka uzoraka mlijeka na tri koncentracijska
Homogenizira se 5 g usitnjenog nivoa: 0,15, 0,3 i 0,45 mg/kg. također
uzorka s 20 mL destilirane vode te određena je i ponovljivost rezultata
se odpipetira 5 mL ove mješavine u izračunom koeficijenta varijacije rezultata
staklenu epruvetu. Doda se 10 mL etil CV%.
acetata i miješa 30 minuta te centrifugira
10 minuta pri 2000 x g. Pipetira se 5 statistička analiza
mL gornjeg sloja etil acetata u staklenu Statistička analiza je provedena
epruvetu i upari u blagoj struji dušika računalnim programom Statistica 6,1
pri 50 °C. Masni se ostatak otopi u 0,5 mL (StatSoft® Inc., tulsa, SAD). koncentracije
mješavine izooktan/kloroforma (2:3, v/v) kloramfenikola su izražene kao minimalna
i doda 0,5 mL pufera za razrijeđivanje i maksimalna koncentracija, srednja
uzoraka te miješa 1 minutu. Centrifugira vrijednost ± standardna devijacija (SD).
se 10 minuta pri 2000 x g. Za analizu se
koristi 50 µL gornjeg sloja.
rezultati i rasprava
Postupak elisa testa Prijašnja istraživanja potaknula su
test je proveden prema uputama tezu da postoji realna mogućnost da
proizvođača Euro-Proxima. Apsorbancija proizvodi životinjskog podrijetla mogu
je mjerena pri 450 nm, uporabom sadržavati ostatke kloramfenikola koji
spektrofotometra za ELISA mikrotitarske nisu podrijetlom od (ilegalne) uporabe
pločice. lijeka, nego su posljedica prirodnih
koncentracija iz biljaka (Berendsen i
validacija metode sur., 2010., 2011., Stolker i sur., 2012.).
Postupak validacije metode za RASFF sustavom je u 2002., 2003., 2004.
određivanje kloramfenikola u uzorcima i 2008. zabilježeno 20, 3, 4 i 6 hrane za
hrane za životinje proveden je sukladno životinje s povišenim koncentracijama
zahtjevima Odluke komisije 2002/657/ kloramfenikola (RASFF, 2002.-2008.). Pri
EC (EC, 2002.). Određeni su validacijski tome je najviša koncentracija od 33,5 ug/
pokazatelji: sposobnost dokazivanja kg utrđena u ribljoj smjesi podrijetlom s
CCβ, granica detekcije LOD, granica Islanda (RASFF. 2004.).
kvantifikacije LOQ, iskorištenje i U ovome su radu koncentracije
ponovljivost. Granica detekcije LOD i kloramfenikola u hrani za životinje
VETERINARSKA STANICA 46 (4), 257-263, 2015.
259
NINA BIlANdžIć, M. MITAK, BožICA SoloMuN KolANoVIć, IVANA VARENINA, ĐuRĐICA BožIć i MANuElA ZAdRAVEC
Tabela 1. Karakteristike metode prema provedenoj validaciji za određivanje kloramfenikola u hrani za
životinje.
CCb LOD LOQ Dodana koncentracija Iskorištenje Ponovljivost
(mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (µg/kg) (%) CV (%)
0,15 63,3 17,0
0,15 0,032 0,084 0,3 77,3 24,1
0,45 101,9 12,4
Ukupno 80,8 17,8
određivane ELISA metodom čiji se mogli kvantificirati vrijednosti su se
su parametri validacije prikazani u kretale u rasponu 0,035 - 0,1252 µg/kg, a
tabeli 1. U postupku validacije je srednja vrijednost je 0,0698 µg/kg.
utvrđeno da je metoda sposobna Prvotno istraživanje provedeno u
detektirati koncentracije od 0,032 µg/kg Nizozemskoj uključivalo je uzorke biljnog
kloramfenikola što je znatno manje od materijala prikupljenog u Mongoliji
zahtjevane učinkovitosti izvedbe metode tijekom 2007. godine, zatim uzorke iz
(MRPL) od 0,3 µg/kg. kloramfenikol se lokalnih trgovina u Nizozemskoj te uzorke
detektira pri koncentracijama od 0,3 µg/ biljke Artemisia frigida iz države Utah,
kg uz vrlo dobru ponovljivost. Najniža SAD (Berendsen i sur., 2010.). U biljnim
koncentracija koju je metoda sposobna uzorcima iz Mongolije kloramfenikol je
dokazati uz vjerojatnost pokazivanja određen do koncentracije od 450 µg/kg.
lažno negativnog rezultata od 5% (CCβ) U jednoj biljnoj smjesi iz lokalne trgovine
je 0,15 µg/kg. Određeno je ukupno u Nizozemskoj te uzorku A. frigida
iskorištenje za ELISA metodu od 80,8% kloramfenikol je kvantificiran na niskoj
te je unutar preporučenog raspona od razini. Rezultati ispitivanja pokazali su da
50% do 120%. testiranje ponovljivosti biljke različitih porodica mogu sadržavati
pokazalo je da ponavljanje analiza kloramfenikol, a određen je i u biljkama
uzoraka daje neznačajno rasipanje iz porodice Artemisia ili Thalictrum,
rezultata, odnosno koeficijent varijacije ali i u travi. Zatim je u 2009. godini
CV od 17,8% (manje od 25%). s Mongolijskih pašnjaka prikupljeno
U ovome istraživanju je tijekom 2013. ukupno 192 uzoraka lišća, korijena,
i 2014. godine prikupljeno i analizirano stabljika A. sieversiana i A. frigida i tla te je
ukupno 156 uzoraka hrane za životinje. analizom reprezentativnih 87 uzoraka u 13
U samo 12 uzoraka koncentracije uzoraka utvrđena mjerljiva koncentracija
kloramfenikola bile su iznad LOD kloramfenikola. U samo pet uzoraka od
vrijednosti metode od 0,032 µg/kg dok 13 koncentracije su bile između 1 i 5 µg/
su u 144 uzorka koncentracije bile ispod kg, dok su u svim drugima bile manje od
LOD (tabela 2). Za 12 uzoraka koji su 1 µg/kg. Nisu utvrđene specifične veze
Tabela 2. Koncentracije kloramfenikola u hrani za životinje.
Broj Srednja vrijednost ± Minimum Maksimum
uzoraka SD (µg/kg) (µg/kg) (µg/kg)
12 0,0698 ± 0,0339 0,0350 0,1252
144 < LOD
VETERINARSKA STANICA 46 (4), 257-263, 2015.
260
Kvantifikacija kloramfenikola u hrani za životinje / Quantification of Chloramphenicol Residues in Feed
između koncentracija u tlu i u biljkama, može pojaviti kao posljedica proizvodnje
odnosno koncentracije pronađene na bakterija u tlu, što ga ujedno svrstava u
određenom mjestu. Čini se da su uzorci grupu ksenobiotika, a to otvara vrata
koji sadrže kloramfenikol nasumično brojnim diskusijama i promjenama
raspoređeni. Pretpostavlja se da razlike propisa koji reguliraju međunarodnu
u koncentracijama biljnih uzoraka iz trgovinu i sigurnost potrošača.
Mongolije između 2007. (suha godina)
i 2009. (vrlo vlažna godina), mogu biti i
sažetak
posljedica razlike u klimatskim uvjetima
koji imaju jak utjecaj na biosintezu kloramfenikol je antibiotik širokog
kloramfenikola u mikroorganizmima u spektra te ima povijesni tijek u korištenju
tlu i njegove apsorpcije u biljke. u veterinarskoj praksi u većini životinja
Nakon ovog istraživanja u za proizvodnju hrane, u liječenju različitih
Nizozemskoj je usljedilo prvo praćenje infekcija prouzročenih aerobnim i anaerobnim
kloramfenikola u slami pri čemu je u 57% mikroorganizmima. Postoji zabrinutost zbog
(od n=21) uzoraka utvrđena koncentracija potencijalne genotoksičnosti kloramfenikola
uglavnom ispod 1 µg/kg, a maksimalna i njegovih metabolita na embrije i fetuse
koncentracija bila je 11 µg/kg (Stolker te kancerogenog utjecaja i uzrokovanja
i sur., 2012.). Opširnija studija (n=104) aplastične anemije u ljudi. Zbog potencijalnog
pokazala je 37 pozitivnih uzoraka (36%), zdravstvenog rizika koji predstavlja i u svojim
od kojih je sedam bilo iznad 0,3 µg/kg tragovima u hrani godine 1994. zabranjena
dok je jedan rezultat bio iznad 1 µg/kg, je primjena kloramfenikola u životinja za
odnosno iznosio je 6,8 µg/kg (Berendsen proizvodnju hrane u Europskoj uniji (EU).
i sur., 2011.). Uspostavljena je obvezna kontrola ostataka
Nedavna daljnja istraživanja istih kloramfenikola u hrani i postavljen je kriterij
autora potvrdila su da Streptomyces granice najmanje zahtjevane učinkovitosti
venezuelae može proizvoditi znatnu izvedbe metode (MRPL) od 0,3 µg/kg za
količinu kloramfenikola u nesterilnom metode koje se koriste za kvantifikaciju.
tlu (Berendsen i sur., 2013.). Istraživan je Ukupno 156 uzoraka hrane (56 za perad,
i prijenos kloramfenikola iz tla uporabom 50 za goveda, 50 za svinje) je prikupljeno u
pšenice i kukuruza na tri različita tla 2013. i 2014. godini i analizirano na ostatake
koja su zalijevana vodom koja sadrži kloramfenikola. ELISA metoda korištena za
kloramfenikol različitih koncentracija. kvantifikaciju kloramfenikola je validirana
Utvrđeno je da je kloramfenikol u skladu s kriterijima propisanim Odlukom
preuzet u biljke te da je razina u komisije 2002/657/EC te su utvrđeni sljedeći
kulturama u korealaciji s primijenjenim parametri: LOD (granica određivanja) 0,032
koncentracijama. Prema tome je µg/kg, LOQ (granica kvantifikacije) 0,084 µg/
zaključeno da se ostatci kloramfenikola kg, CCβ (sposobnost dokazivanja) 0,15 µg/
mogu pojaviti u usjevima kao rezultat kg, iskorištenje 80,8%, preciznost izražena kao
proizvodnje kloramfenikola bakterijama CV od 17,8%. Za 144 uzoraka hrane određene
u tlu što prouzroči dospijevanje u usjeve. su koncentracije ispod LOD vrijednosti. Za
Zaključno, u ovome istraživanju 12 kvantificiranih uzoraka koncentracije su u
nisu utvrđene značajne koncentracije rasponu od 0,035 do 0,1252 µg/kg, a srednja
kloramfenikola koje bi mogle upućivati vrijednost je 0,0698 µg/kg. Stoga su utvrđeni
da su u sastojcima hrane za životinje rezultati koncentracija kloramfenikola
prisutne količine kloramfenikola. ispod MRPL i može se zaključiti da ostatci
Međutim, istraživanja u Nizozemskoj kloramfenikola nisu utvrđeni u analiziranim
skreću pažnju na to da se kloramfenikol uzorcima hrane.
VETERINARSKA STANICA 46 (4), 257-263, 2015.
261
NINA BIlANdžIć, M. MITAK, BožICA SoloMuN KolANoVIć, IVANA VARENINA, ĐuRĐICA BožIć i MANuElA ZAdRAVEC
literatura EC as regards the setting of minimum required
performance limits (MRPLs) for certain residues
1. BERENDSEN, B., L. StOLkER, J. DE JONG, M. in food of animal origin. Off. J. Eur. Commun. L71,
NIELEN, E. tSERENDORJ, R. SODNOMDARJAA, 17-18.
A. CANNAVAN and C. ELLIOtt (2010): Evidence 10. EMEA (1994): Chloramphenicol summary report.
of natural occurrence of the banned antibiotic European Agency for the Evaluation of Medicinal
chloramphenicol in herbs and grass. Anal. Bioanal. Products (EMEA). http://www.emea.europa.eu/
Chem. 397, 1955–1963. pdfs/vet/mrls/chloramphenicol.pdg.
2. BERENDSEN, B. J. A., t. ZUIDEMA, J. D. JONG, 11. PENG, L., Q. YUEMING, C. HUIXIA, k.
A. A. M. StOLkER and M. W. F. NIELEN (2011): YING, t. YINGZHANG, W. DANING and X.
Discrimination of eight chloramphenicol isomers by MENGXIA (2006): Simultaneous determination of
liquid chromatography tandem massspectrometry chloramphenicol, thiamphenicol, and florfenicol
in order to investigate the natural occurrence of residues in animal tissues by gas chromatography/
chloramphenicol. Anal. Chim. Acta 700, 78−85. mass spectrometry. Chin. J. Chromatogr. 24, 14-18.
3. BERENDSEN, B., M. PIkkEMAAt, P. RÖMkENS, 12. RASFF (2003): Rapid alert system for food and feed
R. WEGH, M. VAN SISSEREN, L. StOLkER and M. (RASFF): Annual report 2003, Publications Office of
NIELEN (2013): Occurrence of Chloramphenicol in the European Union, Luxembourg, Belgium.
Crops through Natural Production by Bacteria in 13. RASFF (2004): Rapid alert system for food and feed
Soil. J. Agric. Food Chem. 61, 4004−4010. (RASFF): Annual report 2004, Publications Office of
4. CERkVENIk-FLAJS, V. (2006): Performance the European Union, Luxembourg, Belgium.
characteristics of an analytical procedure for 14. RASFF (2008): Rapid alert system for food and feed
determining chloramphenicol residues in muscle (RASFF): Annual report 2008, Publications Office of
tissue by gas chromatography–electron capture the European Union, Luxembourg, Belgium.
detection. Biomed. Chromatogr. 20, 985–992. 15. StOLkER, A. A. M. and U. A. th. BRINkMAN
5. DOUNY, C., J. WIDARt, E. DE PAUW, G. (2005): Analytical strategies for residue analysis of
MAGHUIN-ROGIStER and M.-L. SCIPPO veterinary drugs and growth-promoting agents in
(2013): Determination of Chloramphenicol in food-producing animals - a review. J. Chromatogr.
Honey, Shrimp, and Poultry Meat with Liquid A 1067, 15–53.
Chromatography–Mass Spectrometry: Validation 16. StOLkER, A. A. M., G. JEHOEL, M. BAAk VAN, R.
of the Method According to Commission Decision S. WEGH and B. J. A. BERENDSEN (2012): Natural
2002/657/EC. Food Anal. Methods 6, 1458–1465. occurrence of chloramphenicol in straw. Poster
6. DOWLING, P. M. (2006): Chloramphenicol, on EuroResidue VII conference, May 14−16, 2012;
thiamphenicol, and Florfenicol. In: Antimicrobial Egmond aan Zee: the Netherlands, 2012. http://
therapy in veterinary medicine. 4th Edition, www.euroresidue.nl/images/stories/posters2012/
Blackwell Publishing, pp. 241-247. Poster_205.pdf (pristupljeno 25.05.2015).
7. EC (1994): Commission Regulation (EC) No 2701/94 17. RØNNING, H. t., k. EINARSEN and t. N. ASP
amending Annexes I, II, III and IV to Council (2006): Determination of chloramphenicol residues
Regulation (EEC) no. 2377/90. Off . J. Eur. Commun. in meat, seafood, egg, honey, milk, plasma and
L287, 7. urine with liquid chromatography-tandem mass
8. EC (2002): Commission Decision 2002/657/EC of spectrometry, and the validation of the method
12 August 2002 implementing Council Directive based on 2002/657/EC. J. Chromatogr. A 1118, 226–
96/23/EC concerning the performance of analytical 233.
methods and the interpretation of results. Off. J. 18. WHO (2004): Food Additives series: 53,
Eur. Commun. L221, 8-28. toxicological evaluation of certain veterinary drug
9. EC (2003): Commission Decision 2003/181/EC residues in food, World Health Organization,
of 13 March 2003 amending Decision 2002/657/ Geneva, pp. 7-84.
VETERINARSKA STANICA 46 (4), 257-263, 2015.
262
Kvantifikacija kloramfenikola u hrani za životinje / Quantification of Chloramphenicol Residues in Feed
Quantification of Chloramphenicol residues in Feed
Nina BILANDŽIĆ, BSc, PhD, Scientific Advisor, Mario MItAk, DVM, PhD, Scientific
Advisor, Božica SOLOMUN kOLANOVIĆ, BSc, Ivana VARENINA, BSc, Đurđica BOŽIĆ, BSc,
Manuela ZADRAVEC, DVM, PhD, Department for Veterinary Public Health, Croatian Veterinary
Institute, Zagreb
Chloramphenicol is a broad-spectrum pigs) were collected in 2013 and 2014 and
antibiotic with historical veterinary uses analyzed for chloramphenicol residues. the
in most food-producing animals for the ELISA method used for chloramphenicol
treatment of a variety of infections caused by quantification was validated according to the
aerobic and anaerobic microorganisms. there criteria laid down by Commission Decision
is concern about the potential genotoxicity 2002/657/EC and the following parameters
of chloramphenicol and its metabolites were set: LOD (limit of detection) 0.032 µg/kg,
and of its embryo-and foetotoxicity, its LOQ (limit of quantification) 0.084 µg/kg, CCß
carcinogenic potential in humans and as a (detection capability) 0.15 µg/kg, recovery
cause of aplastic anaemia. Due to the potential 80.8%, precision expressed as CV of 17.8%.
health risk posed by its traces in food, the For 144 feed samples, levels were below the
use of chloramphenicol was banned in food- LOD value. For 12 quantified feed samples,
producing animals by the European Union concentrations ranged from 0.035 to 0.1252
(EU) in 1994. the EU established mandatory µg/kg and the mean value was 0.0698 µg/kg.
controls of chloramphenicol residues in therefore, the presented results were below
food and also has set a minimum required the MRPL for chloramphenicol and it may
performance limit (MRPL) of 0.3 µg/kg for be concluded that chloramphenicol residues
quantification methods. A total of 156 feed were not found in analyzed feed samples.
samples (56 for poultry, 50 for bovine, 50 for
VETERINARSKA STANICA 46 (4), 257-263, 2015.
263
Za uporabu u veterinarskoj medicini
JednIM
potezoM u suštInu
enrofloksacin
Injekcijska otopina, 100 mg/ml
antibakterijski lijek za sustavne infekcije
fluorokinolon, enrofloksacin za goveda i svinje
Unaprijeđeni tretman za MAXimalni učinak
MP.
Hrvaška, 3/2010, 2010-11702, NGZ/ SkKmkSSInvtaaaarudiddsernlietaaptjkaoan takkvoc:c clli:ciiid LinnjJojaaieeiijcčč:e,d: c kk MHčuaGooeinses on ii sstssmvjouokkeepi uul sdi h o ssdjoieitt tliB:vvosuš oootLnspiri ,,viij sdhppneeoe čeoo mtieiz e nzmmnnnlaflaujieoo e ii ktnggb rcMjiiruuenciojyććekafncennc: cokooGishjpcussvoiilttsi javEniiae seppnp jmaddoort oioiattcškxkk:a n oisrr1,liii p®j4jjhkeee pM a dpp.oo,uaall rjjtzineexge rl nnaa isojl.ooanei kjSd čeaunnverč jaaižugnenlla naaojjveazzbjva e:ooM ea 1 1mmdkm0M0ta ea0daa Ars nn(ami-tnjnsttietiipigabbn isr. ii.dM eaoo Mrn kggykolorcrrirmojaamoaeflmmvpakpoal oaaaulk e u, sk s ukkmuazrkrsarkcmaa ovaienz kazaunhao:uč j.zy4vajeoeo8a i dpo n dsonatiaashs et jktj eiuaeb.e ml e aiehbnkon rtrnirooenoirflnafflieojehoak,ko mkcspPsiajaaanac cs eEičtinunseij cum lili hisjrjeeeouekrln kliu ac iiizjzh zebrmib oaotoč uercrnalloata.iol.cdic i iiio /dKjsualje,ne btaAlsdjciievit)lii ln anko oapb jneaeenc uiurlomlzuflrsooo nkkpiusalejaeuuc.: ri EnoMn.p Eranonnexruniolmh®xe ioMli®mn aMiiaxae a p,xh r aHipmearmijememonjleojyuntpjijhceua ijlse,u e sPs uaeps ugate orsuavvrseieundliljsaaa,
Detaljnije informacije možete dobiti od proizvođača:
KRKA - FARMA d.o.o., Radnička cesta 48/II, p.p. 205, Zagreb 10002
www.krka-farma.hr
2010-11702_ENROXIL-MAX_ad-B5_HR.indd 1 18.3.2010 12:05:23
originalni znanstveni rad / original sCientiFiC PaPer
Promjene koncentracije
kolesterola i triglicerida u serumu
pasa tijekom umjerenog treninga
Biljana Knežević, Maja Belić i Zoran Vrbanac
Uvod
Poznato je da vježbanje uzrokuje glukoze, odnosno glikolizom kojom
predvidljive promjene u perifernoj nastaje visoko energetski spoj adenozin
krvi mnogih životinjskih vrsta. te trifosfat (AtP). Glukoza je u mišićima
promjene odražavaju u prvom redu skladištena u obliku glikogena koji se u
odgovarajuće fiziološke prilagodbe na slučaju potrebe za energijom razgrađuje na
zahtjeve koje postavlja samo vježbanje glukozu-6-fosfat procesom glikogenolize.
(kingston, 2004., Davis i sur., 2008.), ali i Enzim glukoza-6-fosfataza koja se nalazi
patofiziološka događanja koja proizlaze u jetri, bubrezima i crijevima defosforilira
od stresa prouzročenog vježbom glukoza-6-fosfat i time omogućuje
(Ricketts, 2004., Davis i sur., 2008.). izlazak glukoze iz stanice. Međutim,
Vježbanje također uzrokuje i fiziološke stanice mozga i mišića nemaju glukoza-
promjene u broju otkucaja srca, disanju 6-fosfatazu pa zbog toga glukoza u tim
i rektalnoj temperaturi. Broj otkucaja tkivima ne može izaći van iz stanice nego
srca se smatra indikatorom relativnog se koristi kao izvor energije isključivo za
kardiovaskularnog opterećenja i stoga je stanicu u kojoj se nalazi (kronfeld,1982.,
praćenje broja otkucaja srca vrlo korisno Wilmore i Costill, 1994.)
za nadziranje intenziteta treninga kao i za Osim glukoze, izvor energije su i
otkrivanje subkliničkih bolesti (Foreman slobodne masne kiseline (SMk). SMk
i sur., 1990., Munoz i sur., 1999., Rovira i mogu biti oksidirane u stanicama mnogih
sur., 2008.). tkiva, posebice jetre i mišića kako bi se
Vrsta napora koju pas izvršava na taj način osigurala dovoljna količina
tijekom vježbanja određena je energije. U slučaju kada je organizmu
intenzitetom i dužinom trajanja vježbi. potrebna energija, a potrošene su
Hormonske promjene koje se zbivaju zalihe glukoze, odnosno glikogena,
tijekom vježbanja utječu na metabolizam dolazi do mobilizacije masti iz masnog
i sposobnost prilagodbe organizma tkiva. trigliceridi iz masnog tkiva se
povećanim energetskim zahtjevima. hidroliziraju na masne kiseline i glicerol.
Energija potrebna za kontrakciju mišića SMk se u mitohondrijima oksidiraju
dobiva se u prvom redu razgradnjom procesom beta oksidacije do acetil-
Biljana kNEŽEVIĆ, dr. med. vet.; dr. sc. Maja BELIĆ, dr. med. vet., docentica, dr. sc. Zoran VRBANAC, dr.
med. vet., viši asistent, Veterinarski fakultet, Zagreb
VETERINARSKA STANICA 46 (4), 2015. 265
BIljANA KNEžEVIć, MAjA BElIć i ZoRAN VRBANAC
koenzima A (acetil-CoA) koji vezanjem najveće sinteze kolesterola u organizmu
s oksalacetatom ulazi u ciklus limunske je jetra. U izobilju ga ima u središnjem
kiseline kojim se stvara energija u obliku živčanom sustavu, gdje je njegova uloga
AtP-a. Iz acetil-CoA sintetizira se još i kao sastavne komponente membrana
kolesterol te ketonska tijela (kronfeld, osobito značajna. Prekursor je žučnih
1982.) kiselina koje se sintetiziraju u jetri i
Masne kiseline su sastavni dijelovi prijeko su potrebne za apsorpciju masti u
većine masti, koje u tijelu služe kao tankom crijevu. Prekursor je i steroidnih
rezerva energije. Molekula masne hormona nadbubrežne žlijezde (kortizola
kiseline sastoji se od polarne karboksilne i aldosterona) te spolnih hormona
skupine (-COOH) koja je topiva u vodi i (estrogena i androgena) (Brown i
nepolarnog lanca ugljikovodika koji je Goldstein, 1986., Grundy, 1990., Pavković,
topiv u uobičajenim organskim otapalima 2003.).
(Rastogi, 2007.). U plazmi se više od 90% Molekule triglicerida i gotovo sve
masnih kiselina nalazi u obliku estera molekule kolesterola cirkuliraju u
(primarno triglicerola, estera kolesterola plazmi u lipoproteinima. Lipoproteini
i fosfolipida) sadržanih u cirkulirajućim predstavljaju transportni oblik lipida
lipoproteinskim česticama, dok se ostalih u organizmu. Sastoje se od jezgre
10% masnih kiselina u plazmi nalazi hidrofobnih lipida (trigliceridi i esteri
neesterificirano, odnosno slobodno. kolesterola) koji su okruženi hidrofilnim
Neesterificirane masne kiseline (slobodne slojem fosfolipida, apolipoproteina i
masne kiseline) se transportiraju kolesterola (Stocham i Dolce, 2004.).
u cirkulaciji vezane za albumine Prema gustoći lipoproteini se klasificiraju
(Harvey i Ferrier, 2010.). Esterificirane u pet skupina: hilomikroni–lipoproteini
masne kiseline u obliku triglicerola su bogati trigliceridima iz hrane, lipoproteini
pohranjene u masnim stanicama i služe vrlo male gustoće (engl. very low density
kao važna rezerva energije za tijelo. lipoprotein–VLDL) koji sadrže uglavnom
Oslobađanje triglicerida iz masnih endogene trigliceride, lipoproteini
stanica je regulirano hormonima kako srednje gustoće (engl. intermediate density
bi se osigurala energija za tijelo između lipoprotein–IDL), lipoproteini niske
obroka (Barret, 2013.). Masti u aktivnijim gustoće (engl. low density lipoprotein–
dijelovima organizma imaju nižu točku LDL) i lipoproteini visoke gustoće (engl.
topljenja i sadrže više nezasićenih masnih high density lipoprotein–HDL) u kojima je
kiselina u svom sastavu te se mogu glavni lipid kolesterol (Williams i sur.,
lakše oksidirati i stalno upotrebljavati za 1993., Pavković, 2003.).
razliku od onih koji su pohranjeni kao LDL prenosi kolesterol iz jetre do
masno tkivo u drugim, manje aktivnim ostalih stanica u organizmu. Višak se
tkivima (Rastogi, 2007.). kolesterola može taložiti na stjenkama
kolesterol je karakteristični steroidni arterija i tamo zajedno s još nekim
alkohol životinjskih tkiva i obavlja niz tvarima iz krvi stvarati plak koji s
esencijalnih funkcija u tkivu (Harvey i vremenom može prouzročiti začepljenje
Ferrier, 2010.). Nalazi se u sastavu većine krvnih žila. Zbog toga se LDL-kolesterol
staničnih membrana kao čimbenik koji je naziva i “lošim kolesterolom”. HDL ima
važan za njihovu stabilnost. Istodobno, ulogu povratnog prijenosa kolesterola
kolesterol omogućuje prijenos tvari iz tkiva u jetru. Na taj način smanjuju
u stanicu i iz nje (transmembranski vjerojatnost nagomilavanja kolesterola
transport). Iako se kolesterol stvara na stjenkama krvnih žila i vjerojatnost
u raznim organima i tkivima, mjesto razvoja kardiovaskularnih bolesti. Iz
VETERINARSKA STANICA 46 (4), 265-272, 2015.
266