Kliinlab 5/2010

32 Pages·2010·2.51 MB·Finnish

5• 2010
Yllättävän nopea
Veriviljelyn patogeenit
90 minuutissa
PNA FISH
®
Yksinkertainen ja nopea menetelmä patogeenien
identifi oimiseksi suoraan veriviljelystä ilman
lisäkasvatuksia.
sepsis-patogeenien identifi ointi nopeutuu jopa vuorokausilla
(cid:76)
pieni investointi mahdollistaa mittavat kustannussäästöt
(cid:76)
ei kontaminaatioherkkää PCR-monistusta
(cid:76)
hands-on-time vain 10 minuuttia
(cid:76)
PNA FISH® -testeillä voidaan tunnistaa
valtaosa sepsis-patogeeneistä.
Testivalikoimassa mm:
- S. aureus / koagulaasinegatiiviset 90 min
stafylokokit
- E. faecalis / muut enterokokit
- E. coli / K. pneumoniae / P. aeruginosa
- C. albicans / C. parapsilosis /
C. tropicalis / C. glabrata / C. krusei
Triolab Oy • Lemminkäisenkatu 20 B • 20520 Turku • Puh: 0201 226 600 • Fax: [phone] • www.triolab.fi
Suomen Kliinisen Kemian Yhdistyksen jäsenlehti
Medlemstidning för Föreningen för Klinisk Kemi i Finland r.f
Journal of The Finnish Society of Clinical Chemistry
Numero 5/2010 27. vuosikerta
Sisältö
Pääkirjoitus
Kari Pulkki ..............................................................................................................................................79
T-Cell Xtend -reagenssin testaus pitkittyneessä
T-SPOT. TB-näytekuljetuksessa
Kristel Kookmaa, Ilkka Seppälä ja Tamara Tuuminen ...............................................................................80
Kuopion keskussairaalan laboratorio yliopistollisen sairaalan laboratorioksi
Ilkka Penttilä, Matti Laitinen, Kari Savolainen ja Sari Väisänen ................................................................85
Saksittua
Tomi Koski ..............................................................................................................................................92
KYS-Laboratoriokeskus Pohjois-Savon alueellisena palveluntuottajana
ja ISLABin käynnistäminen
Kari Punnonen ........................................................................................................................................93
Lyhyesti
Laatufi losofi oiden kavalkadi
Solveig Linko ..........................................................................................................................................96
Sihteerin palsta .....................................................................................................................................98
Kongressikalenteri ................................................................................................................................100
’’Anaheim – where imagination powers’’
Raportti AACC:n kokouksesta, Anaheim 25.-29.7.2010
Iiris Salonen ..........................................................................................................................................102
Kansi: Orion Diagnostica Oy
Lisätiedot: puh. 010 426 2709, www.oriondiagnostica.fi , e-mail: suomi@oriondiagnostica.fi
Tilaukset: p. 010 426 4040, tilaukset@oriondiagnostica.fi
(cid:56)(cid:45)(cid:41)(cid:40)(cid:99)(cid:56)(cid:47)(cid:104)(cid:16)
(cid:3)
(cid:81)(cid:77)(cid:88)(cid:109)(cid:3)(cid:81)(cid:69)(cid:79)(cid:87)(cid:69)(cid:69)(cid:3)(cid:77)(cid:80)(cid:81)(cid:69)(cid:79)(cid:89)(cid:84)(cid:80)(cid:69)(cid:82)(cid:3)(cid:88)(cid:69)(cid:77)(cid:3)
(cid:76)(cid:93)(cid:93)(cid:88)(cid:93)(cid:81)(cid:109)(cid:82)(cid:3)(cid:69)(cid:77)(cid:76)(cid:73)(cid:89)(cid:88)(cid:88)(cid:69)(cid:81)(cid:69)(cid:3)(cid:90)(cid:77)(cid:86)(cid:76)(cid:73)(cid:73)(cid:80)(cid:80)(cid:77)(cid:82)(cid:73)(cid:82)(cid:3)
(cid:84)(cid:83)(cid:88)(cid:77)(cid:80)(cid:69)(cid:87)(cid:88)(cid:89)(cid:80)(cid:83)(cid:87)(cid:35)
(cid:58)(cid:37)(cid:45)(cid:50)(cid:3)(cid:37)(cid:42)(cid:45)(cid:50)(cid:45)(cid:51)(cid:50)
(cid:17)(cid:69)(cid:82)(cid:69)(cid:80)(cid:93)(cid:87)(cid:69)(cid:69)(cid:88)(cid:88)(cid:83)(cid:86)(cid:77)(cid:87)(cid:87)(cid:69)(cid:3)(cid:83)(cid:82)(cid:3)(cid:88)(cid:73)(cid:79)(cid:82)(cid:83)(cid:80)(cid:83)(cid:75)(cid:77)(cid:69)(cid:69)(cid:16)(cid:3)
(cid:78)(cid:83)(cid:79)(cid:69)(cid:3)(cid:77)(cid:80)(cid:81)(cid:83)(cid:77)(cid:88)(cid:88)(cid:69)(cid:69)(cid:3)(cid:79)(cid:109)(cid:93)(cid:88)(cid:88)(cid:109)(cid:78)(cid:109)(cid:80)(cid:80)(cid:73)(cid:73)(cid:82)(cid:3)
(cid:81)(cid:69)(cid:76)(cid:72)(cid:83)(cid:80)(cid:80)(cid:77)(cid:87)(cid:73)(cid:88)(cid:3)(cid:82)(cid:109)(cid:93)(cid:88)(cid:88)(cid:73)(cid:73)(cid:87)(cid:73)(cid:73)(cid:82)(cid:3)
(cid:80)(cid:77)(cid:77)(cid:88)(cid:88)(cid:93)(cid:90)(cid:109)(cid:88)(cid:3)(cid:83)(cid:82)(cid:75)(cid:73)(cid:80)(cid:81)(cid:69)(cid:88)(cid:18)(cid:3)(cid:37)(cid:189)(cid:82)(cid:77)(cid:83)(cid:82)(cid:77)(cid:82)(cid:3)
(cid:69)(cid:82)(cid:88)(cid:69)(cid:81)(cid:69)(cid:3)(cid:88)(cid:77)(cid:73)(cid:88)(cid:83)(cid:3)(cid:88)(cid:69)(cid:79)(cid:69)(cid:69)(cid:3)
(cid:84)(cid:83)(cid:88)(cid:77)(cid:80)(cid:69)(cid:87)(cid:88)(cid:89)(cid:86)(cid:90)(cid:69)(cid:80)(cid:80)(cid:77)(cid:87)(cid:89)(cid:89)(cid:72)(cid:73)(cid:82)(cid:18)
(cid:37)(cid:42)(cid:45)(cid:50)(cid:45)(cid:51)(cid:50)(cid:45)(cid:45)(cid:50)(cid:3)
(cid:55)(cid:45)(cid:46)(cid:51)(cid:45)(cid:56)(cid:41)(cid:56)(cid:57)(cid:56)(cid:3)
(cid:45)(cid:50)(cid:58)(cid:41)(cid:55)(cid:56)(cid:51)(cid:45)(cid:50)(cid:50)(cid:45)(cid:56)(cid:3)
(cid:51)(cid:58)(cid:37)(cid:56)(cid:3)(cid:45)(cid:44)(cid:49)(cid:45)(cid:55)(cid:56)(cid:99)(cid:3)
(cid:58)(cid:37)(cid:54)(cid:56)(cid:41)(cid:50)(cid:5)(cid:3)
(cid:21)(cid:20)(cid:3)(cid:52)(cid:45)(cid:55)(cid:56)(cid:41)(cid:41)(cid:50)(cid:3)
(cid:37)(cid:54)(cid:58)(cid:51)(cid:45)(cid:50)(cid:41)(cid:50)(cid:3)(cid:37)(cid:55)(cid:45)(cid:37)
(cid:49)(cid:73)(cid:72)(cid:77)(cid:82)(cid:83)(cid:86)(cid:3)(cid:42)(cid:77)(cid:82)(cid:80)(cid:69)(cid:82)(cid:72)(cid:3)(cid:51)(cid:93)(cid:3)(cid:37)(cid:70)
(cid:54)(cid:69)(cid:78)(cid:69)(cid:88)(cid:83)(cid:86)(cid:84)(cid:69)(cid:82)(cid:88)(cid:77)(cid:73)(cid:3)(cid:24)(cid:21)(cid:3)(cid:39)(cid:16)(cid:3)(cid:20)(cid:21)(cid:26)(cid:24)(cid:20)(cid:3)(cid:58)(cid:37)(cid:50)(cid:56)(cid:37)(cid:37)
(cid:52)(cid:89)(cid:76)(cid:18)(cid:3)(cid:12)(cid:20)(cid:29)(cid:13)(cid:3)(cid:28)(cid:25)(cid:22)(cid:20)(cid:3)(cid:22)(cid:24)(cid:20)(cid:20)(cid:3)(cid:42)(cid:69)(cid:92)(cid:3)(cid:12)(cid:20)(cid:29)(cid:13)(cid:3)(cid:28)(cid:25)(cid:22)(cid:20)(cid:3)(cid:22)(cid:24)(cid:21)(cid:20)
(cid:73)(cid:81)(cid:69)(cid:77)(cid:80)(cid:30)(cid:3)(cid:71)(cid:83)(cid:82)(cid:88)(cid:69)(cid:71)(cid:88)(cid:36)(cid:81)(cid:73)(cid:72)(cid:77)(cid:82)(cid:83)(cid:86)(cid:189)(cid:82)(cid:80)(cid:69)(cid:82)(cid:72)(cid:18)(cid:189)
(cid:91)(cid:91)(cid:91)(cid:18)(cid:81)(cid:73)(cid:72)(cid:77)(cid:82)(cid:83)(cid:86)(cid:189)(cid:82)(cid:80)(cid:69)(cid:82)(cid:72)(cid:18)(cid:189)
P ä ä k i r j o i t u s
Itä-Suomen laboratorio,
sairaanhoitopiiri ja yliopisto?
Tässä erikoisnumerossa kerrotaan Ilkka Penttilän ja Kari Punnosen sekä heidän työtovereidensa
suururakasta eli Kuopion yliopistollisen sairaalan laboratorion kehittymisestä ISLAB:iksi. Me-
nestystarina keskussairaalan laboratoriosta yliopistollisen sairaalan laboratorioksi ja edelleen
laboratorioliikelaitokseksi on laboratoriolääkäreiden ja sairaalakemistien yhteistyön tulos.
Nel jän sairaanhoitopiirin laboratorioiden yhdistyminen on ollut mahdollista kaukokatseisuu-
den ja pitkäjänteisen työn ansiosta. Yhtenäiset menetelmät ja prosessit sekä laatu helpottavat
myös potilashoitoa ja erityisesti kroonisten sairauksien seurantaa ja hoitoa. Lähivuosina on
syn tymässä todennäköisesti myös Itä-Suomen sairaanhoitopiiri, josta yhtenäisten hoitoproses-
sien ja -käytäntöjen avulla myös potilas hyötynee. Tätä toimintaa myös ISLAB:in yhtenäiset
laboratorioprosessit ja yksi tietojärjestelmä tukevat. Kestää varmaan kuitenkin useita vuosia,
et tä tästä ”koneistosta” saadaan täysi toiminnallinen hyöty irti. Samaan aikaan Suomessa ol-
laan muuallakin miettimässä esimerkiksi päivystysten, synnytysten ja vaativien toimenpiteiden
keskittämistä. Suuri osa muutoksista on jo tehty. Lisäksi osaa toiminnasta ollaan hajauttamassa
ja pienempien sairaaloiden toiminta kytketään toimivaksi osaksi sairaanhoitopiirin tai ERVA-
alueen toimintaa.
Tämän vuoden alusta aloitti Kuopion ja Joensuun yliopistojen yhdistymisen seurauksena Itä-
Suomen yliopisto, jonka terveystieteiden tiedekunnan kliinisen lääketieteen yksikössä sijaitsee
kliinisen kemian oppiaine. Sen edeltäjässä, Kuopion yliopiston kliinisen kemian laitoksella aloit-
ti emeritusprofessori Ilkka Penttilä sekä kliinisen kemian erikoislääkärin että sairaalakemistin
tutkintoon johtavat koulutusohjelmat ja tällä hetkellä sairaalakemistin koulutusohjelma on
myös Helsingin yliopistossa. KYKS:n ja KYS:n kouluttamana valmistui vuodesta 1973 lähtien
yh teensä 60 sairaalakemistiä ja kliinisen kemian erikoislääkäriä. Viimeksi mainittujen lisäksi
laitos antoi useille muiden kliinisten alojen apulaislääkäreille osan heidän erikoistumisopinnois-
taan. Kuopion yliopistossa on kliinisellä kemialla ollut lääketieteen opetuksessa suuri osuus
ja yhteistä opetusta on ollut huomattavasti myös biotieteiden kanssa. Itä-Suomen yliopiston
Kuo pion kampuksella terveystieteiden tiedekunnalla ja sen neljällä laitoksella on merkittävä
rooli sekä alansa opetuksessa että tutkimuksessa.
Tämä Itä-Suomen laboratoriotoimintaa esittelevä erikoisnumero olkoon kimmokkeena mui-
den vastaavien suomalaisten laboratorioiden toiminnan esittelyyn.
KARI PULKKI
Professori
KLIIN (cid:129) LAB 5/2010 79
T-Cell Xtend -reagenssin
testaus pitkittyneessä
T-SPOT. TB-näytekuljetuksessa
Kristel Kookmaa, Ilkka Seppälä ja Tamara Tuuminen
Yhteenveto Immunotec). The aim of this study was to evaluate T-Cell
Xtend for prolonged sample storage and to compare
Latentin tuberkuloosin tutkimiseen käytettävää diag- the results to those obtained within 4 hours.
nostista in vitro ELISPOT-testiä varten otetun kokoveri- The tested reagent was added to lithium heparin
näytteen lyhyt säilyvyysaika on ollut esteenä määrityk- tubes 24 hours after the blood samples were preserved
sen laajemmalle käytölle, sillä näytteen käsittely tulee in a vertical position at room temperature. For the con-
aloittaa neljän tunnin sisällä näytteenotosta. T-Cell trols was used the same samples drawn in the same
Xtend -reagenssia (Oxford Immunotec) markkinoidaan tube and into the Cell Preparation Tube (CPT) (Becton,
keinona pidentää näytteen kuljetusaikaa. Tämän työn Dickinson and Company) which were analyzed imme-
tarkoituksena oli selvittää, miten näytteen 24 tunnin diately. The stability of lymphocytes was checked from
säilytys vaikuttaa ELISPOT-menetelmään perustuvan CTP tubes that were analyzed with a 24-hour delay. The
T-SPOT.TB-testin (Oxford Immunotec) tarkkuuteen. purity of the lymphocyte fraction after centrifugation
Säilytyksen vaikutusta testattiin CPT-putkessa (Cell from each of the tested tubes was also compared.
Preparate Tube) sekä litiumhepariiniputkessa (Bec- The addition of the T-Cell Xtend reagent after 24
ton, Dickinson and Company), johon oli lisätty T-Cell hour storage did not preserve the frequencies of reac-
Xtend -liuosta. Työssä arvioitiin T-Cell Xtend -liuoksen tive lymphocytes on the same level as the samples that
ja CPT-putken valmistajien antamat suositukset näyt- were processed immediately. The T-Cell Xtend reagent
teen säilyvyydestä. improved the separation of peripheral blood mononu-
Tulokset osoittivat, että verinäytteen säilytys 24 tun- clear cells from the whole blood but the observed im-
tia vaikutti T-SPOT.TB -määrityksen tarkkuuteen. T-Cell munological reactivities were lower compared to the
Xtend -liuoksen lisääminen ei selvästi parantanut vuo- samples processed immediately. We conclude that the
rokauden kuluttua näytteenotosta analysoitujen näyttei- delay in the processing of samples will result in subop-
den säilyvyyttä, vaan saadut spottimäärät olivat alhai- timal performance that cannot be compensated with
sempia kuin heti näytteenoton jälkeen analysoidusta the addition of the T-Cell Xtend. For the ELISPOT-based
näytteistä saadut spottimäärät. Vaikka T-Cell Xtend pa- assays the samples should be processed within a 4-hour
ransi mononukleaarisolujen eroteltavuutta kokoverestä, timeframe. However, if the delay is inevitable the bor-
solujen immunologinen reaktiivisuus oli alhaisempaa derline results should be interpreted with caution.
kuin heti analysoiduissa näytteissä. Näytteen säilytys
CPT-putkessa 24 tuntia aiheutti myös spottimäärien
Johdanto
laskua. Näytteen viivästynyt käsittely lisää riskiä, että
reaktiivisten solujen esiintymistiheys on alhaisempaa Tuberkuloosi on Mycobacterium tuberculosis -baktee-
kuin alle neljässä tunnissa käsitellyssä näytteessä. rin aiheuttama infektio. Suomi kuuluu tuberkuloosin
vä häisen ilmaantuvuuden maihin, uusia tartuntoja esiin-
English summary tyy alle 400 tapausta vuodessa (1). 90 %:ssa tapauks ista
tuberkuloosi jää tartunnan saaneella henkilöllä latenttiin
To diagnose latent tuberculosis infection (LTBI) new muotoon (1). Latentti tuberkuloosi voi kuitenkin akti-
immunodiagnostic tests based on release of interferon voitua kliiniseksi taudiksi, jos henkilön immuniteetti
gamma upon ex vivo stimulation with TB specifi c an- heikkenee esimerkiksi vanhuuden, jonkin sairauden tai
tigens (IGRA) have been recently introduced. One of sairauden hoidon myötä. Etenkin nivelreuman hoidossa
the IGRAs is an ELISPOT- based commercial T-SPOT. käytetyt aggressiiviset hoitokäytännöt ja uudet biologi-
TB assay (Oxford Immunotec). The availability of fresh set lääkkeet lisäävät latentin tuberkuloosin aktivoitu-
samples with viable lymphocytes is the major concern misriskiä. Tästä syystä, ennen hoitojen aloittamista on
to ensure accurate results. It is recommended that the varmistettava, ettei potilaalla ole latenttia tuberkuloosia,
samples should be analyzed within 4 hours from the joka voisi reaktivoitua hoitojen seurauksena (2).
venipuncture. To extend the storage of samples, a com- Latentin tuberkuloosi-infektion diagnostiikassa käy-
mercial reagent T-Cell Xtend was developed (Oxford tetään mm. ELISPOT-menetelmään perustuvaa T-SPOT.
80 KLIIN (cid:129) LAB 5/2010
TB-testiä (Oxford Immunotec) ja QuantiFERON®-TB antigeenistimulaatioon tuottamalla interferoni gamma
Gold -testiä (Cellestis). T-SPOT.TB-testiä voidaan käyt- (INF ) nimistä sytokiinia. T-SPOT.TB-määritystä varten
Y
tää, jos verinäyte pystytään toimittamaan analysoita- potilaan verestä eristetään mononukleaarisolut ja niitä
vaksi neljän tunnin sisällä näytteenotosta, muussa ta- stimuloidaan spesifi sillä antigeeneillä. Herkistyneiden
pauksessa käytetään QuantiFERON®-TB Gold -testiä. T-solujen frekvenssit lasketaan niiden erittämän INF :n
Y
T-SPOT.TB on QuantiFERON®-TB Goldia herkempi testi perusteella. Tuotettu INF toimii reaktiivisten solujen
Y
(3, 4), mutta siihen liittyvät preanalyyttiset vaatimukset ”sormenjälkenä” muodostamalla spotteja. Muodostu-
ovat tähän asti olleet esteenä sen laajemmalle käytölle. neiden spottien määrä on suoraan verrannollinen näyt-
Kumpikaan näistä määrityksistä ei erota latenttia tuber- teessä olevien herkistyneiden T-solujen määrään (9).
kuloosia aktiivisesta taudista, vaan tulokset osoittavat Vertailussa käytettiin näytemateriaalina potilas-
pelkästään henkilön altistuksen tuberkuloosibaktee- näyt teitä, jotka otettiin ainoastaan tätä työtä varten,
rille. Verinäyte on toimitettava T-SPOT.TB-tutkimusta jo ten työlle haettiin tutkimuslupa HUS-piirin Sisätau-
varten analysoivaan laboratorioon neljän tunnin sisällä tien eettiseltä toimikunnalta. Tutkimuslupa (Nro: 214/
näytteenotosta. Tämä hankaloittaa ja rajoittaa määri- 13/03/01/09) myönnettiin syksyllä 2009. Kaikilta po-
tyksen laajempaa käyttöä, sillä kauempana Suomessa tilailta pyydettiin kirjallinen suostumus tutkimukseen
sijaitsevilla laboratorioilla ei ole mahdollisuutta saada osallistumisesta.
näytettä toimitettua määräajassa.
Näytteen pitkittynyt säilytys aiheuttaa mononukle-
Työn toteutus
aarisolujen kontaminoitumisen granulosyyteillä, joiden
on todettu inhiboivan T-solujen toimintaa. T-solujen Työ tehtiin opinnäytetyönä HUSLABin mikrobiologian
toiminnan estyminen aiheuttaa laskua T-SPOT.TB-tu- vastuualueen immunologian osastolle keväällä 2010.
loksissa (5). Valmistajan mukaan mononukleaarisoluja, Testauksessa käytetyt potilasnäytteet kerättiin HUSin
jotka on eroteltu T-Cell Xtend -liuoksen avulla, voidaan Kirurgisen sairaalan reumapoliklinikalta. Työhön valit-
käyttää ELISPOT-menetelmässä 32 tunnin säilytyksen tiin kuusi täysi-ikäistä potilasta, joilla oli aikaisemmin
jälkeen. T-Cell Xtend -liuos sitoo näytteen granulosyytit todettu raja-arvoiset ELISPOT-vasteet. Matalavasteises sa
punasoluihin kaksoisspesifi syyttä omaavien vasta-ainei- ELISPOT-näytteessä on suurempi riski kuin korkeavas-
den avulla. Kun granulosyytit on sidottu kompleksei- teisessa näytteessä, että kuljetuksen aikana tapahtuva
hin, verinäyte sentrifugoidaan, jolloin saadaan puhdas pienikin responssin pudotus aiheuttaa väärän kliinisen
mononukleaarisolufraktio (6). Äskettäin julkaistussa tulkinnan.
tut kimuksessa 24 tunnin säilytys ei aiheuttanut spotti- Jokaiselta potilaalta otettiin verinäytteet kahteen
määrän laskua ELISPOT-tutkimuksessa, kun näytteeseen kahdeksan millilitran BD Vacutainer CPT -putkeen sekä
lisättiin T-Cell Xtend -liuosta (7). kahteen yhdeksän millilitran muoviseen litiumheparii-
Tarkoituksena oli selvittää, miten 24 tunnin säilytys- niputkeen (kuva 1). Näytteet kuljetettiin kahden tun-
aika vaikuttaa ELISPOT-testin tulokseen. Verinäytteen nin sisällä näytteenotosta analysoivaan laboratorioon.
säilyvyyttä testattiin litiumhepariiniputkessa, johon Kuljetus tapahtui pystyasennossa ja huoneenlämmös-
on lisätty T-Cell Xtend -liuosta (Oxford Immunotec). sä. Kaikki CPT-putket sentrifugoitiin viimeistään kaksi
Kont rollina toimi CPT-putkeen (Becton Dickinson) tuntia näytteenoton jälkeen. Jokaiselta potilaalta ana-
otet tu verinäyte, joka oli analysoitu heti ja 24 tunnin lysoitiin yksi litiumhepariiniputki ja yksi CPT-putki heti
ku luttua näytteenotosta. Mikäli valmistajien antamat näytteenoton jälkeen (alle neljä tuntia näytteenotosta).
säi lyvyysajat toimivat annettujen suositusten mukaises- Litiumhepariiniputkiin otettujen näytteiden mononu-
ti, voidaan T-SPOT.TB-määrityksen käyttö ulottaa myös kleaarisolut eristettiin Leucosep-putkissa Greiner Bio-
niihin tapauksiin, joissa näytteen toimituksessa menee Onen antamien ohjeiden mukaisesti. Solut pestiin käy-
yli neljä tuntia. tössä olevan pesuohjelman mukaisesti. Valkosolusaanto
ja lymfosyyttien puhtausaste mitattiin ADVIA 60 -ana-
Materiaalit ja menetelmät lysaattorilla (Bayer Corporation). Solumäärät laskettiin
niin, että jokaiseen analysoitavaan kuoppaan pipetoi-
Vertailussa käytettiin kahdeksan millilitran Vacutai- tiin 250 000 mononukleaarisolua. ELISPOT-määritys
ner® CPT™ -putkia (Becton Dickinson). Valmistajan suoritettiin valmistajan antamien ohjeiden mukaisesti
mukaan viimeistään kaksi tuntia näytteenoton jälkeen ja saadut spottimäärät laskettiin automaattisella AID
sentrifugoidut ja plasmaan sekoitetut mononukleaari- EliSpot reader system -lukijalaitteella (AID Autoimmun
solut säilyvät analysointikelpoisina 24 tuntia (8). Lisäksi Diagnostika GmbH).
testauksessa käytettiin Becton Dickinsonin yhdeksän Vuorokauden kuluttua (24 h) näytteenotosta analy-
millilitran litiumhepariiniputkia, joihin lisättiin T-Cell soitavia näytteitä säilytettiin pystyasennossa huoneen-
Xtend -liuosta juuri ennen solujen erottelua. Litium- lämmössä. 24 tuntia säilytettyyn litiumhepariiniputkeen
hepariiniputkiin otetuista kokoverinäytteistä eroteltiin lisättiin valmistajan ohjeiden mukaisesti T-Cell Xtend
mononukleaarisolut Leucosep® (Greiner Bio-One) -liuosta ja sen annettiin inkuboitua 20 minuuttia en-
- erotteluputkien avulla. nen sol ujen erottelua Leucosep-putkessa. Eritellyt
Työssä käytettiin Oxford Immunotec:in T-SPOT.TB- mo nonukleaarisolut pestiin käytössä olevan pesuoh-
kittiä. T-SPOT.TB on diagnostinen in vitro testi, jonka jelman mukaisesti. Solujen laskeminen ja näytteen
avulla voidaan selvittää, onko näytteessä herkistynei- ana lysointi suoritettiin loppuun samalla tavalla kuin
tä T-soluja, jotka reagoivat M. tuberculosis -bakteerin on edellä kuvattu.
KLIIN (cid:129) LAB 5/2010 81
Kuva 1. Testauksen kulkukaavio. Testausta varten kerättiin verinäytteet kuudelta potilaalta kahteen CPT-put-
keen (à 8ml) ja kahteen litiumhepariiniputkeen (à 9ml). Yksi CPT-putki ja litiumhepariiniputki analysoitiin heti
ja toinen CPT-putki ja litiumhepariiniputki 24 tuntia näytteenoton jälkeen. 24 tuntia säilytettyyn litiumhepa-
riiniputkeen lisättiin T-Cell Xtend -reagenssi juuri ennen näytteen käsittelyä.
Tulokset Xtend -liuos paransi selvästi lymfosyyttifraktion puh-
tausastetta, lymfosyyttien reaktiivisuus antigeenistimu-
Kaikista näytteistä saatiin frekvenssit reaktiivisista so- laatioon kuitenkin heikentyi. Spottimäärän lasku ei
luista, jotka tunnistivat kitin antigeeni A:n, antigeeni joh tunut suoraan granulosyyttikontaminaatiosta, sillä
B:n, PHA:n (fytohemagglutiniini) ja PPD:n (purifi ed T-Cell Xtend -liuos auttoi vähentämään granulosyyttien
protein derivative). Kustakin putkesta saatuja spotti- määrää mononukleaarisolufraktiossa.
määriä verrattiin heti analysoidusta CPT-putkesta saa-
tuihin spottimääriin. CPT (0 h) vs. litiumhepariini (T-Cell Xtend) (24 h)
Litiumhepariiniputkissa 24 tuntia säilytettyjen näyttei-
CPT (0 h) vs. CPT (24 h) den spottimäärät olivat 4/6:ssa tapauksista selvästi al-
Näytteen säilyttäminen vuorokauden ajan CPT-put- haisempia kuin heti analysoiduissa CPT-putkiin otetuis-
kessa aiheutti spottimäärän laskua 3/6:ssa potilaiden sa näytteissä. Lymfosyyttien prosentuaalinen määrä oli
näytteistä (kuva 2). Lymfosyyttifraktion puhtausaste ei 24 tuntia säilytetyissä litiumhepariiniputkissa kor keampi
laskenut yhdenkään potilaan näytteissä 24 tunnin säi- kuin CPT-putkissa, joten spottimäärän lasku joht ui mo-
lytyksen aikana (kuva 3). Tästä voidaan päätellä, että nonukleaarisolujen alentuneesta reaktiivisuu desta an-
24 tunnin säilytysaika heikensi näiden kolmen potilaan tigeenistimulaatioon.
lymfosyyttien reaktiivisuutta antigeenistimulaatioon.
Granulosyyttien on arveltu estävän T-solutoimintaa ja Pohdinta
näin alentavan spottien määrää. 24 tunnin säilytys ei
kuitenkaan aiheuttanut selvää granulosyyttien osuu- Työssä huomattiin, että pidentynyt näytteen kuljetus
den nousua CPT-putkissa eritellyissä mononukleaari- heikentää tuloksien luotettavuutta varsinkin, jos näyt-
solufraktioissa. teessä on niukasti reaktiivisia soluja. T-Cell Xtend -rea-
genssin lisäys ei tätä ongelmaa poistanut. Jotta T-Cell
Litiumhepariini (0 h) vs. litiumhepariini Xtend -reagenssista olisi merkittävää apua laboratorio-
(T-Cell Xtend) (24 h) diagnostiikassa, pitäisi mononukleaarisolujen reaktiivi-
Vuorokauden säilytyksen jälkeen analysoitujen näyt- suus antigeenistimulaatioon olla säilytetystä näyttees-
teiden spottimäärissä tapahtui 2/6 potilaalla laskua täkin selkeästi samantasoista kuin heti analysoidussa
verrattuna heti litiumhepariiniputkista analysoituihin CPT-putkessa.
näytteisiin. Molemmissa tapauksissa lymfosyyttien puh- Luotettavien tulosten saamiseksi laboratorioanaly-
tausaste oli heti analysoidussa näytteessä matalampi tiikan on oltava toimivaa ja tulosten pitää olla toistet-
kuin vuorokauden ajan säilytetyssä näytteessä. Tästä tavia. T-Cell Xtend -liuoksen käyttö lisäsi työvaiheita
voidaan päätellä, että vaikka 24 tuntia säilytetyn näyt- ja pidensi kohtalaisen pitkäkestoisen ja monivaiheisen
teen lymfosyyttien puhtausaste oli korkeampi, niiden analyysin kestoa. Näytteen käsittelyn lisäys saattaa
reaktiivisuus antigeenistimulaatioon oli säilytyksen ai- aiheuttaa mononukleaarisolujen määrän laskua sekä
kana heikentynyt. heikentää niiden elinkykyä ja reaktiivisuutta antigee-
Tuloksia vertailtaessa huomattiin, että vaikka T-Cell nistimulaatioon. Työssä käytetyn aineiston pienen koon
82 KLIIN (cid:129) LAB 5/2010
takia, tuloksista ei voitu tehdä tilastollisia arvioita. Työn saamastani materiaalista. Suuri kiitos myös potilaille,
tarkoituksena ei ollut yleistää saatuja tuloksia, vaan jotka osallistuivat testaukseen. Lisäksi kiitän professori
testata T-Cell Xtend -reagenssin toimivuus HUSLABin Marjatta Leirisalo-Repoa ja dosentti Heikki Repoa po-
immunologian osastolla. tilaiden rekrytoinnista sekä laboratoriohoitajaa Milja
Uusi T-Cell Xtend -reagenssi ei tuonut selvää paran- Korpista hänen avustaan työn toteutuksessa ja tulok-
nusta näytteen säilyvyyteen. Testauksen perusteella sien analysoinnissa.
CPT-putkien käyttöä voidaan suositella jatkossakin
en sisijaisena näyteputkena T-SPOT.TB-määrityksessä. Kirjallisuusviitteet
Näyte pyritään analysoimaan neljän tunnin sisällä näyt-
teenotosta. Mikäli aika ylittyy, on näytteeseen tehtävä 1. Sosiaali- ja terveysministeriö. Valtakunnallinen tu-
merkintä, ja pitkittynyt näytteen kuljetus on otettava berkuloosiohjelma 2006.
huomioon tulosten tulkinnassa. Jos näytteen kuljetuk- 2. Repo H, Salonen J, Leirisalo-Repo M. Nivelreuman
seen arvioidaan menevän yli neljä tuntia, QuantiFE- biologisten lääkkeiden varjopuolena infektiot lisään-
RON®-TB Gold -testin käyttö on suositeltavaa. tyvät. Lääkärilehti 2009; 64(8); 697-705.
3. Ajit Lalvani. Diagnosing Tuberculosis Infection in
Kiitokset the 21st Century: New Tools To Tackle an Old Enemy.
Chest 2007; 131(6): 1898-1906.
Kiitän HUSLABin immunologian osastoa työtä varten 4. Madhukar Pai, Alice Zwerling, Dick Menzies. T-cell
Kuva 2. Testauksessa analysoitujen kuuden potilaan antigeeni-A ja antigeeni-B spottimäärät per
miljoona lymfosyyttiä CPT-putkissa ja litiumhepariiniputkissa. Tummat palkit edustavat spottimääriä
heti analysoiduissa näytteissä ja vaaleat palkit spottimääriä 24 tuntia säilytetyissä näytteissä.
T-Cell Xtend -reagenssi lisättiin 24 tuntia litiumhepariiniputkissa säilytettyihin näytteisiin.
KLIIN (cid:129) LAB 5/2010 83
Kuva 3. Testauksessa analysoitujen kuuden potilaan lymfosyyttiprosentit mononukleaarisolufraktioista heti
analysoiduissa ja 24 tunnin säilytyksen jälkeen analysoiduissa näytteissä. Tummat palkit edustavat CPT-putkeen
otettuja näytteitä ja vaaleat palkit litiumhepariiniputkiin otettuja näytteitä. T-Cell Xtend -reagenssi lisättiin
24 tuntia litiumhepariiniputkissa säilytettyihin näytteisiin.
based Assays for the Diagnosis of Latent Tuberculosis 9. T-SPOT.TB Package Insert 2007: Oxford Immunotec
Infection: An Update. Annals of Internal Medicine Ltd. www.oxfordimmunotec.com.
2008; 149(3): 177-184.
5. McKenna KC, Beatty KM, Vicetti Miguel R, Bilo-
Kirjoittajat
nick RA. Delayed processing of blood increases the
frequency of activated CD11b+ CD15+ granulocytes KRISTEL KOOKMAA
which inhibit T-cell function. Journal of Immunological bioanalyytikko-opiskelija
Methods 2008; 341: 68-75. Metropolia Ammattikorkeakoulu
6. T-Cell Xtend Package Insert 2008: Oxford Immuno- kristel.kookmaa@hus.fi
tec Ltd. www.oxfordimmunotec.com.
7. Lenders LM, Meldau R, van Zyl-Smit RN, Woodburne ILKKA SEPPÄLÄ
V, Maredza A, Cashmore TJ, Semple PL, Badri M, Zumla kliinisen mikrobiologian erikoislääkäri, dos.
A, Dheda K. Comparison Of Same Day Versus Delayed HUSLAB immunologian osasto
Enumeration of Tb-Specifi c T-Cell Responses. Journal of
Infection 2010; DOI: 10.1016/j.jinf.2010.01.012. TAMARA TUUMINEN
8. Vacutainer® CPT™ tube Product Data Sheet 2009: kliinisen mikrobiologian erikoislääkäri, dos.
Becton, Dickinson and Company. Helsingin Yliopisto ja HUSLAB immunologian osasto
84 KLIIN (cid:129) LAB 5/2010