Implicación de los genes de la familia RAV en el desarrollo floral Andrea Aguilar Jaramillo

183 Pages·2016·6.83 MB·Spanish

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Universidad Autónoma de Barcelona
Facultad de Biociencias
Departamento de Biología Animal, Biología Vegetal y Ecología

TESIS DOCTORAL
Implicación de los genes de la familia RAV en el
desarrollo floral
Memoria presentada por Andrea Elizabeth Aguilar Jaramillo para optar al grado
de Doctor en Biología y Biotecnología Vegetal por la Universidad Autónoma de
Barcelona

Trabajo realizado en el Programa de desarrollo y transducción de señales del
Centre de Recerca en Agrigenòmica (CRAG), Campus UAB Bellaterra, bajo la
dirección de las Doctoras Soraya Pelaz Herrero y Paula Suárez López

Directoras Tutor

Dra. Soraya Pelaz Herrero Dra. Paula Suárez López Dr. Juan Barceló Coll

Doctoranda
Andrea Aguilar Jaramillo
BARCELONA, 2016

ÍNDICE GENERAL

ÍNDICE GENERAL i                                       
ABREVIATURAS Y SIGLAS 3                                  
ABSTRACT                                                                                                                                       7                             
RESUMEN                              9 
INTRODUCCIÓN GENERAL                                                                                                        11
1. Arabidopsis thaliana, UN MODELO DE ESTUDIO DEL DESARROLLO
VEGETAL 11

2. TRANSICIONES ENTRE LAS ETAPAS DEL DESARROLLO DE UNA
PLANTA 11

2.1 La transición de la fase juvenil a la adulta 12
2.2 La floración está controlada por diferentes rutas genéticas 13
2.2.1 Ruta dependiente de la edad de la planta 14
2.2.2 Ruta genética que responde al incremento de la longitud del día o
fotoperiodo 15
2.2.3 Ruta genética que responde a cambios en la temperatura ambiental 17
2.2.4 Relación entre las rutas de señalización molecular 18
3. LA FAMILIA RAV DE FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN 19

3.1 Genes TEMPRANILLO: TEM1 y TEM2 19

4. TRICOMAS 21

4.1 Importancia de los tricomas y beneficios comerciales 21

4.2 Complejo de proteínas encargado de la formación de los tricomas 22

4.3 Las hormonas en la iniciación de los tricomas 22
BIBLIOGRAFÍA INTRODUCIÓN 25
OBJETIVOS GENERALES 31
CAPÍTULO I: Regulation of Developmental Timing by TEMPRANILLO through
miR156 and SPL genes
ii
CAPÍTULO II: SHORT VEGETATIVE PHASE Up-Regulates TEMPRANILLO2
Floral Repressor at Low Ambient Temperatures.
CAPÍTULO III: TEMPRANILLO reveals the mesophyll as crucial for epidermal
trichome formation
CONCLUSIONES GENERALES 35
OTRAS PUBLICACIONES

iii
ABREVIATURAS Y SIGLAS
°C Grados centígrados
AP1 APETALA1
AP2 APETALA 2
CAL CAULIFLOWER
cDNA Ácido desoxirribonucleico complementario
ChIP Inmunoprecipitación de cromatina
ChIP-qPCR Inmunoprecipitación de cromatina seguida de PCR cuantitativa en
tiempo real
CK Citoquininas
CO CONSTANS
Col – 0 Arabidopsis thaliana ecotipo silvestre Columbia-0.
DNA Ácido desoxirribonucleico
dNTP desoxinucleótido trifosfato
DS desviación estándar
EGL3 ENHACER OF GLABRA3
EtBr bromuro de etidio
EtOH Etanol
FD FLOWERING LOCUS D
FLC FLOWERING LOCUS C
FLM FLOWERING LOCUS M
FT FLOWERING LOCUS T
g Gramos
GA Giberelina
GA Giberelina 3
3
GA3OX Giberelina 3-beta-dioxygenasa
GFP Proteína fluorescente verde
4
GIS GLABROUS INFLORESCENCE STEMS
GIS2 GLABROUS INFLORESCENCE STEMS2
GL1 GLABROUS1
GL2 GLABROUS2
GL3 GLABRA3
GUS Beta –glucuronidasa
Kb Kilobases
LD Día largo (long day, 16 horas de luz)
LFY LEAFY
M Molar
mg Miligramos
min Minutos
miRNA MicroRNA
ml Militro
mM Milimolar
mRNA Ácido ribonucleico mensajero
MS Medio de cultivo Murashige-Skoog
NHC Número de hojas caulinares
NHR Número de hojas de roseta
nm Nanómetro
nt Nucleótidos
NTH Número total de hojas
pb par de bases
PCR reacción en cadena de la polimerasa
RB Réplica biológica
RNA Ácido Ribonucleico
RNAi RNA de interferencia
5
rpm revoluciones por minuto
RT-PCR Transcripción Reversa-seguida de PCR
RT-qPCR Transcripción reversa seguida de PCR cuantitativa en tiempo real
SAM Meristemo apical del tallo
SD día corto (short day, 8 horas de luz)
SMZ SCHLAFMÜTZE
SNZ SCHNARCHZAPFEN
SOC1 SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CO1
SPL SQUAMOSA PROMOTER BINDING PROTEIN-LIKE
SVP SHORT VEGETATIVE PHASE
T- DNA DNA de transferencia
Taq Thermus aquaticus
TEM TEMPRANILLO
Tm Temperatura de fusión
TOE TARGET OF EAT
TSF TWIN SISTER OF FT
TTG1 TRANSPARENT TESTA GLABRA1
μg Microgramo
μl Microlitro
UBQ10 UBIQUITINA 10
UTR Región no traducida
vol/vol volumen/volumen
w/v Peso / Volumen
WT Tipo Silvestre (wild type)
ZFP8 ZINC FINGER PROTEIN8
ZT Zeitgeber time
6
7
ABSTRACT
Flowering is probably the most important process in plant development since the
perpetuation of the species depends on it. In Arabidopsis thaliana, floral induction is
controlled by several genetic pathways that respond to environmental and endogenous
stimuli. In our laboratory we have identified the TEMPRANILLO (TEM) genes as
flowering repressors under both inductive long-day (LD, 16 hours of light) and non-
inductive short-day (SD, 8 hours of light) conditions. The TEM proteins belong to a
family of transcription factors called RAV, characterized by the presence of two DNA
binding domains, the APETALA2 (AP2) and B3 domains. In Arabidopsis this family is
composed of 6 genes. Under LD the photoperiod pathway induces flowering mainly
through activation of FLOWERING LOCUS T (FT), while under SD flowering depends
mainly on the accumulation of gibberellins (GAs). TEM1 and TEM2 delay flowering
under both conditions by directly repressing the expression of the FT, GA 3-OXIDASE 1
(GA3OX1) and GA3OX2 genes, the latter two genes being responsible for the
biosynthesis of bioactive GA . Therefore, TEM1 and TEM2 control flowering time
4
through at least two of the genetic pathways that control floral induction: the
photoperiod (Castillejo & Pelaz, 2008) and the GA pathway (Osnato et al, 2012).
In this PhD thesis we aimed to deepen the role of TEM genes in other genetic
pathways controlling flowering and other developmental processes in Arabidopsis
thaliana.
There is a genetic pathway that responds to the age of the plant and prevents
flowering at the juvenile phase. First there is a transition from the juvenile to the adult
vegetative stage and then floral induction occurs. The microRNAs miR156 and miR172
are involved in the regulation of these phase transitions of plant development (Huijser &
Schmid, 2011). MiR156 maintains the juvenile phase and delays the floral transition
(Wu & Poeting, 2006; Wu et al, 2009), while miR156-target SQUAMOSA PROMOTER
BINDING PROTEIN-LIKE (SPL) genes and miR172 promote the transition to
adulthood and floral induction. Our results show that TEM genes are involved in
regulating various stages of the age-dependent pathway as they positively regulate
miR156 and negatively regulate several SPL genes and miR172, thus delaying
flowering. Therefore, TEM genes play a key role in responding to the age of the plant
(Chapter 1, Aguilar-Jaramillo et al., manuscript in preparation).
8