Endocrine Disruption in Amphibians

58 Pages·2008·1.72 MB·English

Digital Comprehensive Summaries of Uppsala Dissertations
from the Faculty of Science and Technology 545
Endocrine Disruption in
Amphibians
Developmental Effects of Ethynylestradiol and
Clotrimazole on the Reproductive System
IRINA GYLLENHAMMAR
ACTA
UNIVERSITATIS
UPSALIENSIS ISSN1651-6214
UPPSALA ISBN978-91-554-7260-3
2008 urn:nbn:se:uu:diva-9209
(cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:4)(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)(cid:11)(cid:6)(cid:5)(cid:4)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:5)(cid:12)(cid:8)(cid:7)(cid:13)(cid:11)(cid:11)(cid:4)(cid:8)(cid:14)(cid:8)(cid:13)(cid:10)(cid:3)(cid:15)(cid:5)(cid:6)(cid:4)(cid:3)(cid:7)(cid:16)(cid:7)(cid:9)(cid:17)(cid:5)(cid:11)(cid:18)(cid:17)(cid:14)(cid:3)(cid:19)(cid:14)(cid:16)(cid:5)(cid:20)(cid:8)(cid:21)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:12)(cid:3)(cid:10)(cid:22)(cid:3)(cid:10)(cid:12)(cid:8)(cid:23)(cid:14)(cid:4)(cid:8)(cid:14)(cid:5)(cid:10)(cid:24)
(cid:25)(cid:15)(cid:9)(cid:14)(cid:18)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)(cid:4)(cid:17)(cid:3)(cid:9)(cid:14)(cid:9)(cid:26)(cid:3)(cid:4)(cid:27)(cid:19)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:6)(cid:18)(cid:21)(cid:28)(cid:25)(cid:29)(cid:30)(cid:31)(cid:24) (cid:9)(cid:6)(cid:17)(cid:16)(cid:15)!(cid:26)(cid:5)(cid:10)"#$(cid:24)(cid:13)(cid:11)(cid:11)(cid:4)(cid:8)(cid:14)(cid:8)(cid:24)%(cid:6)(cid:3)(cid:12)(cid:8)(cid:16)(cid:24)&(cid:5)(cid:11)(cid:7)(cid:5)(cid:21)(cid:17)(cid:5)(cid:6)’((cid:24)’))#
(cid:8)(cid:7))*+",-(cid:9)(cid:6)(cid:7)(cid:23)(cid:5)(cid:12)(cid:5)(cid:26)(cid:6)(cid:5)(cid:5)(cid:9)-(cid:2)(cid:9)(cid:19)(cid:7)(cid:9)(cid:6)(cid:9)-.(cid:23)(cid:3)(cid:14)(cid:9)(cid:4)(cid:9)(cid:11)(cid:23)(cid:16)/0(cid:23)(cid:5)(cid:5)(cid:20)(cid:8)(cid:21)(cid:3)(cid:10)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)1(cid:3)(cid:14)(cid:14)(cid:17)(cid:5)(cid:19)(cid:9)(cid:10)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)(cid:5)(cid:12)(cid:3)(cid:10)
&1(cid:5)(cid:12)(cid:3)(cid:4)(cid:23)/
(cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:8)(cid:5)
2(cid:16)(cid:14)(cid:14)(cid:5)(cid:10)(cid:23)(cid:8)(cid:21)(cid:21)(cid:8)(cid:6)(cid:24)3/’))#/(cid:25)(cid:10)(cid:12)(cid:9)(cid:19)(cid:6)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:6)(cid:18)(cid:11)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)(cid:3)(cid:10)$(cid:21)(cid:11)(cid:23)(cid:3)(cid:17)(cid:3)(cid:8)(cid:10)(cid:4)/(cid:2)(cid:5)(cid:15)(cid:5)(cid:14)(cid:9)(cid:11)(cid:21)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:8)(cid:14)(cid:25)--(cid:5)(cid:19)(cid:7)(cid:4)(cid:9)-
(cid:25)(cid:7)(cid:23)(cid:16)(cid:10)(cid:16)(cid:14)(cid:5)(cid:4)(cid:7)(cid:6)(cid:8)(cid:12)(cid:3)(cid:9)(cid:14)(cid:8)(cid:10)(cid:12)(cid:30)(cid:14)(cid:9)(cid:7)(cid:6)(cid:3)(cid:21)(cid:8)4(cid:9)(cid:14)(cid:5)(cid:9)(cid:10)(cid:7)(cid:23)(cid:5)5(cid:5)(cid:11)(cid:6)(cid:9)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)(cid:3)(cid:15)(cid:5)&(cid:16)(cid:4)(cid:7)(cid:5)(cid:21)/$(cid:19)(cid:7)(cid:8)(cid:13)(cid:10)(cid:3)(cid:15)(cid:5)(cid:6)(cid:4)(cid:3)(cid:7)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:4)
(cid:13)(cid:11)(cid:4)(cid:8)(cid:14)(cid:3)(cid:5)(cid:10)(cid:4)(cid:3)(cid:4)/(cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:3)(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:8)(cid:9)(cid:10)(cid:11)(cid:12)(cid:13)(cid:14)(cid:13)(cid:15)(cid:16)(cid:3)(cid:17)(cid:13)(cid:18)(cid:19)(cid:10)(cid:10)(cid:6)(cid:12)(cid:3)(cid:13)(cid:16)(cid:9)(cid:20)(cid:21)(cid:11)(cid:11)(cid:16)(cid:6)(cid:7)(cid:6)(cid:2)(cid:3)(cid:16)(cid:16)(cid:13)(cid:12)(cid:5)(cid:6)(cid:5)(cid:3)(cid:9)(cid:15)(cid:16)(cid:20)(cid:12)(cid:9)(cid:10)(cid:5)(cid:14)(cid:13)(cid:22)(cid:6)(cid:23)(cid:19)(cid:7)(cid:5)(cid:24)(cid:9)(cid:20)
(cid:18)(cid:23)(cid:3)(cid:13)(cid:15)(cid:23)(cid:13)(cid:6)(cid:15)(cid:25)(cid:26)(cid:13)(cid:23)(cid:14)(cid:15)(cid:9)(cid:7)(cid:9)(cid:4)(cid:24),6,/,7(cid:11)(cid:11)/(cid:13)(cid:11)(cid:11)(cid:4)(cid:8)(cid:14)(cid:8)/3&(cid:29) *7#8*"8,,687’()89/
$(cid:21)(cid:11)(cid:23)(cid:3)(cid:17)(cid:3)(cid:8)(cid:10) (cid:11)(cid:9)(cid:11)(cid:18)(cid:14)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)(cid:4) (cid:8)(cid:6)(cid:5) (cid:12)(cid:5)(cid:19)(cid:14)(cid:3)(cid:10)(cid:3)(cid:10)(cid:26) 1(cid:9)(cid:6)(cid:14)(cid:12)81(cid:3)(cid:12)(cid:5) (cid:8)(cid:10)(cid:12) (cid:9)(cid:10)(cid:5) (cid:9)- (cid:7)(cid:23)(cid:5) (cid:4)(cid:18)(cid:26)(cid:26)(cid:5)(cid:4)(cid:7)(cid:5)(cid:12) (cid:6)(cid:5)(cid:8)(cid:4)(cid:9)(cid:10)(cid:4) (cid:3)(cid:4)
(cid:5)(cid:10)(cid:15)(cid:3)(cid:6)(cid:9)(cid:10)(cid:21)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:8)(cid:14) (cid:11)(cid:9)(cid:14)(cid:14)(cid:18)(cid:7)(cid:8)(cid:10)(cid:7)(cid:4)/ &(cid:7)(cid:18)(cid:12)(cid:3)(cid:5)(cid:4) (cid:9)- (cid:14)(cid:9)(cid:10)(cid:26)8(cid:7)(cid:5)(cid:6)(cid:21) (cid:5)--(cid:5)(cid:19)(cid:7)(cid:4) (cid:9)(cid:10) (cid:7)(cid:23)(cid:5) (cid:6)(cid:5)(cid:11)(cid:6)(cid:9)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)(cid:3)(cid:15)(cid:5) (cid:4)(cid:16)(cid:4)(cid:7)(cid:5)(cid:21) (cid:3)(cid:10) -(cid:6)(cid:9)(cid:26)(cid:4)
-(cid:9)(cid:14)(cid:14)(cid:9)1(cid:3)(cid:10)(cid:26) (cid:14)(cid:8)(cid:6)(cid:15)(cid:8)(cid:14) (cid:5)(cid:20)(cid:11)(cid:9)(cid:4)(cid:18)(cid:6)(cid:5) (cid:7)(cid:9) (cid:5)(cid:10)(cid:15)(cid:3)(cid:6)(cid:9)(cid:10)(cid:21)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:8)(cid:14) (cid:11)(cid:9)(cid:14)(cid:14)(cid:18)(cid:7)(cid:8)(cid:10)(cid:7)(cid:4) (cid:8)(cid:6)(cid:5) (cid:4)(cid:19)(cid:8)(cid:6)(cid:19)(cid:5)/ 3(cid:7) (cid:3)(cid:4) (cid:7)(cid:23)(cid:5)(cid:6)(cid:5)-(cid:9)(cid:6)(cid:5) (cid:3)(cid:21)(cid:11)(cid:9)(cid:6)(cid:7)(cid:8)(cid:10)(cid:7) (cid:7)(cid:9)
(cid:12)(cid:5)(cid:15)(cid:5)(cid:14)(cid:9)(cid:11) (cid:21)(cid:5)(cid:7)(cid:23)(cid:9)(cid:12)(cid:4) (cid:7)(cid:9) (cid:4)(cid:7)(cid:18)(cid:12)(cid:16) (cid:12)(cid:5)(cid:15)(cid:5)(cid:14)(cid:9)(cid:11)(cid:21)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:8)(cid:14) (cid:6)(cid:5)(cid:11)(cid:6)(cid:9)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)(cid:3)(cid:15)(cid:5) (cid:7)(cid:9)(cid:20)(cid:3)(cid:19)(cid:3)(cid:7)(cid:16) (cid:3)(cid:10) (cid:8)(cid:21)(cid:11)(cid:23)(cid:3)(cid:17)(cid:3)(cid:8)(cid:10)(cid:4)/ 3(cid:10) (cid:7)(cid:23)(cid:3)(cid:4) (cid:7)(cid:23)(cid:5)(cid:4)(cid:3)(cid:4)
(cid:7)(cid:23)(cid:5)(cid:18)(cid:4)(cid:5)-(cid:18)(cid:14)(cid:10)(cid:5)(cid:4)(cid:4)(cid:9)-(cid:27)(cid:13)(cid:15)(cid:9)(cid:11)(cid:19)(cid:16)(cid:5)(cid:12)(cid:9)(cid:11)(cid:3)(cid:23)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:16)(cid:28)(cid:7)(cid:23)(cid:5):(cid:5)(cid:4)(cid:7)$-(cid:6)(cid:3)(cid:19)(cid:8)(cid:10)(cid:19)(cid:14)(cid:8)1(cid:5)(cid:12)-(cid:6)(cid:9)(cid:26)(cid:31)(cid:8)(cid:4)(cid:8)(cid:21)(cid:9)(cid:12)(cid:5)(cid:14)(cid:4)(cid:11)(cid:5)(cid:19)(cid:3)(cid:5)(cid:4)-(cid:9)(cid:6)(cid:8)
(cid:7)(cid:5)(cid:4)(cid:7) (cid:4)(cid:16)(cid:4)(cid:7)(cid:5)(cid:21) 1(cid:8)(cid:4) (cid:3)(cid:10)(cid:15)(cid:5)(cid:4)(cid:7)(cid:3)(cid:26)(cid:8)(cid:7)(cid:5)(cid:12)/ (cid:25)--(cid:5)(cid:19)(cid:7)(cid:4) (cid:9)(cid:10) (cid:7)(cid:23)(cid:5) (cid:6)(cid:5)(cid:11)(cid:6)(cid:9)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)(cid:3)(cid:15)(cid:5) (cid:4)(cid:16)(cid:4)(cid:7)(cid:5)(cid:21) (cid:8)-(cid:7)(cid:5)(cid:6) (cid:14)(cid:8)(cid:6)(cid:15)(cid:8)(cid:14) (cid:5)(cid:20)(cid:11)(cid:9)(cid:4)(cid:18)(cid:6)(cid:5) (cid:7)(cid:9) (cid:7)(cid:23)(cid:5)
(cid:11)(cid:23)(cid:8)(cid:6)(cid:21)(cid:8)(cid:19)(cid:5)(cid:18)(cid:7)(cid:3)(cid:19)(cid:8)(cid:14)(cid:4)(cid:5)(cid:7)(cid:23)(cid:16)(cid:10)(cid:16)(cid:14)(cid:5)(cid:4)(cid:7)(cid:6)(cid:8)(cid:12)(cid:3)(cid:9)(cid:14)(cid:28)(cid:25)(cid:25)(cid:31)(cid:8)(cid:10)(cid:12)(cid:19)(cid:14)(cid:9)(cid:7)(cid:6)(cid:3)(cid:21)(cid:8)4(cid:9)(cid:14)(cid:5)1(cid:5)(cid:6)(cid:5)(cid:5)(cid:15)(cid:8)(cid:14)(cid:18)(cid:8)(cid:7)(cid:5)(cid:12)/0(cid:23)(cid:5)(cid:4)(cid:18)(cid:4)(cid:19)(cid:5)(cid:11)(cid:7)(cid:3)(cid:17)(cid:3)(cid:14)(cid:3)(cid:7)(cid:16)(cid:7)(cid:9)
’
(cid:25)(cid:25) (cid:5)(cid:20)(cid:11)(cid:9)(cid:4)(cid:18)(cid:6)(cid:5) 1(cid:8)(cid:4) (cid:19)(cid:9)(cid:21)(cid:11)(cid:8)(cid:6)(cid:5)(cid:12) (cid:17)(cid:5)(cid:7)1(cid:5)(cid:5)(cid:10) (cid:7)(cid:23)(cid:5) (cid:21)(cid:9)(cid:12)(cid:5)(cid:14) (cid:4)(cid:11)(cid:5)(cid:19)(cid:3)(cid:5)(cid:4) (cid:8)(cid:10)(cid:12) (cid:8) 1(cid:3)(cid:14)(cid:12) (cid:4)(cid:11)(cid:5)(cid:19)(cid:3)(cid:5)(cid:4)(cid:24) (cid:7)(cid:23)(cid:5) (cid:25)(cid:18)(cid:6)(cid:9)(cid:11)(cid:5)(cid:8)(cid:10)
’
(cid:19)(cid:9)(cid:21)(cid:21)(cid:9)(cid:10)-(cid:6)(cid:9)(cid:26)(cid:28)(cid:28)(cid:6)(cid:15)(cid:6)(cid:5)(cid:13)(cid:10)(cid:11)(cid:9)(cid:12)(cid:6)(cid:12)(cid:3)(cid:6)(cid:31)/(cid:22)(cid:8)(cid:6)(cid:15)(cid:8)(cid:14)(cid:5)(cid:20)(cid:11)(cid:9)(cid:4)(cid:18)(cid:6)(cid:5)(cid:7)(cid:9)(cid:25)(cid:25) (cid:19)(cid:8)(cid:18)(cid:4)(cid:5)(cid:12)-(cid:5)(cid:21)(cid:8)(cid:14)(cid:5)8(cid:17)(cid:3)(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:12)(cid:4)(cid:5)(cid:20)(cid:6)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:4)(cid:3)(cid:10)
’
(cid:17)(cid:9)(cid:7)(cid:23) (cid:5)(cid:20)(cid:8)(cid:21)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:12) -(cid:6)(cid:9)(cid:26) (cid:4)(cid:11)(cid:5)(cid:19)(cid:3)(cid:5)(cid:4)(cid:24) (cid:3)(cid:10)(cid:12)(cid:3)(cid:19)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:10)(cid:26) (cid:21)(cid:8)(cid:14)(cid:5)8(cid:7)(cid:9)8-(cid:5)(cid:21)(cid:8)(cid:14)(cid:5) (cid:4)(cid:5)(cid:20)8(cid:6)(cid:5)(cid:15)(cid:5)(cid:6)(cid:4)(cid:8)(cid:14)/ 3(cid:10) (cid:8)(cid:12)(cid:18)(cid:14)(cid:7) (cid:27)(cid:13)(cid:15)(cid:9)(cid:11)(cid:19)(cid:16)
(cid:5)(cid:12)(cid:9)(cid:11)(cid:3)(cid:23)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:16)(cid:24)(cid:21)(cid:8)(cid:14)(cid:5)-(cid:6)(cid:9)(cid:26)(cid:4)(cid:7)(cid:23)(cid:8)(cid:7)1(cid:5)(cid:6)(cid:5)(cid:10)(cid:9)(cid:7)(cid:4)(cid:5)(cid:20)8(cid:6)(cid:5)(cid:15)(cid:5)(cid:6)(cid:4)(cid:5)(cid:12)(cid:23)(cid:8)(cid:12)(cid:6)(cid:5)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:5)(cid:12)-(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:14)(cid:3)(cid:7)(cid:16)(cid:8)(cid:10)(cid:12)(cid:12)(cid:5)(cid:19)(cid:6)(cid:5)(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:12)(cid:8)(cid:21)(cid:9)(cid:18)(cid:10)(cid:7)
(cid:9)-(cid:21)(cid:8)(cid:7)(cid:18)(cid:6)(cid:5)(cid:4)(cid:11)(cid:5)(cid:6)(cid:21)(cid:8)(cid:7)(cid:9)4(cid:9)(cid:8)(cid:3)(cid:10)(cid:7)(cid:23)(cid:5)(cid:4)(cid:5)(cid:21)(cid:3)(cid:10)(cid:3)-(cid:5)(cid:6)(cid:9)(cid:18)(cid:4)(cid:7)(cid:18)(cid:17)(cid:18)(cid:14)(cid:5)(cid:4)/0(cid:23)(cid:5)(cid:11)(cid:6)(cid:9)(cid:11)(cid:9)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)(cid:9)--(cid:6)(cid:9)(cid:26)(cid:4)1(cid:3)(cid:7)(cid:23)(cid:9)(cid:15)(cid:8)(cid:6)(cid:3)(cid:5)(cid:4)(cid:17)(cid:18)(cid:7)
(cid:14)(cid:8)(cid:19)(cid:27)(cid:3)(cid:10)(cid:26) (cid:9)(cid:15)(cid:3)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)(cid:4) (cid:3)(cid:10)(cid:19)(cid:6)(cid:5)(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:12) 1(cid:3)(cid:7)(cid:23) (cid:3)(cid:10)(cid:19)(cid:6)(cid:5)(cid:8)(cid:4)(cid:3)(cid:10)(cid:26) (cid:25)(cid:25)8(cid:19)(cid:9)(cid:10)(cid:19)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:6)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)(cid:4)/ $ -(cid:5)(cid:21)(cid:8)(cid:14)(cid:5) -(cid:6)(cid:9)(cid:26) 1(cid:3)(cid:7)(cid:23)(cid:9)(cid:18)(cid:7)
’
(cid:9)(cid:15)(cid:3)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)(cid:4)(cid:3)(cid:4)(cid:4)(cid:7)(cid:5)(cid:6)(cid:3)(cid:14)(cid:5)/0(cid:23)(cid:5)(cid:12)(cid:5)(cid:15)(cid:5)(cid:14)(cid:9)(cid:11)(cid:21)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:9)-(cid:9)(cid:15)(cid:8)(cid:6)(cid:3)(cid:5)(cid:4)(cid:3)(cid:10)(cid:4)(cid:5)(cid:20)8(cid:6)(cid:5)(cid:15)(cid:5)(cid:6)(cid:4)(cid:5)(cid:12)(cid:21)(cid:8)(cid:14)(cid:5)-(cid:6)(cid:9)(cid:26)(cid:4)1(cid:8)(cid:4)(cid:3)(cid:21)(cid:11)(cid:14)(cid:3)(cid:5)(cid:12)(cid:7)(cid:9)(cid:17)(cid:5)
(cid:4)(cid:3)(cid:21)(cid:3)(cid:14)(cid:8)(cid:6) (cid:7)(cid:9) (cid:19)(cid:9)(cid:10)(cid:7)(cid:6)(cid:9)(cid:14) -(cid:5)(cid:21)(cid:8)(cid:14)(cid:5)(cid:4)/ 0(cid:23)(cid:5) (cid:19)(cid:9)(cid:21)(cid:17)(cid:3)(cid:10)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10) (cid:9)- (cid:8) (cid:6)(cid:5)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:5)(cid:12) (cid:10)(cid:18)(cid:21)(cid:17)(cid:5)(cid:6) (cid:9)- (cid:21)(cid:8)(cid:14)(cid:5)(cid:4)(cid:24) (cid:12)(cid:18)(cid:5) (cid:7)(cid:9)
(cid:4)(cid:5)(cid:20)8(cid:6)(cid:5)(cid:15)(cid:5)(cid:6)(cid:4)(cid:8)(cid:14)(cid:24) (cid:8)(cid:10)(cid:12) (cid:3)(cid:21)(cid:11)(cid:8)(cid:3)(cid:6)(cid:5)(cid:12) -(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:14)(cid:3)(cid:7)(cid:16) (cid:19)(cid:9)(cid:18)(cid:14)(cid:12) (cid:23)(cid:8)(cid:15)(cid:5) (cid:4)(cid:5)(cid:15)(cid:5)(cid:6)(cid:5) (cid:5)--(cid:5)(cid:19)(cid:7)(cid:4) (cid:9)(cid:10) -(cid:6)(cid:9)(cid:26) (cid:11)(cid:9)(cid:11)(cid:18)(cid:14)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)(cid:4)/ (cid:22)(cid:8)(cid:6)(cid:15)(cid:8)(cid:14)
(cid:5)(cid:20)(cid:11)(cid:9)(cid:4)(cid:18)(cid:6)(cid:5) (cid:7)(cid:9) (cid:19)(cid:14)(cid:9)(cid:7)(cid:6)(cid:3)(cid:21)(cid:8)4(cid:9)(cid:14)(cid:5) (cid:21)(cid:9)(cid:12)(cid:18)(cid:14)(cid:8)(cid:7)(cid:5)(cid:12) (cid:8)(cid:6)(cid:9)(cid:21)(cid:8)(cid:7)(cid:8)(cid:4)(cid:5) (cid:8)(cid:19)(cid:7)(cid:3)(cid:15)(cid:3)(cid:7)(cid:16) (cid:3)(cid:10) (cid:26)(cid:9)(cid:10)(cid:8)(cid:12)(cid:4) (cid:8)(cid:10)(cid:12) (cid:17)(cid:6)(cid:8)(cid:3)(cid:10) (cid:3)(cid:10) (cid:27)(cid:13)(cid:15)(cid:9)(cid:11)(cid:19)(cid:16)
(cid:5)(cid:12)(cid:9)(cid:11)(cid:3)(cid:23)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:16)/(cid:29)(cid:6)(cid:8)(cid:3)(cid:10)(cid:8)(cid:6)(cid:9)(cid:21)(cid:8)(cid:7)(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:8)(cid:19)(cid:7)(cid:3)(cid:15)(cid:3)(cid:7)(cid:16)1(cid:8)(cid:4)(cid:12)(cid:5)(cid:19)(cid:6)(cid:5)(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:12)(cid:8)(cid:7)(cid:7)(cid:23)(cid:5)(cid:7)(cid:3)(cid:21)(cid:5)-(cid:9)(cid:6)(cid:26)(cid:9)(cid:10)(cid:8)(cid:12)(cid:8)(cid:14)(cid:12)(cid:3)--(cid:5)(cid:6)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:3)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)(cid:8)(cid:10)(cid:12)
(cid:26)(cid:9)(cid:10)(cid:8)(cid:12)(cid:8)(cid:14) (cid:8)(cid:6)(cid:9)(cid:21)(cid:8)(cid:7)(cid:8)(cid:4)(cid:5) (cid:8)(cid:19)(cid:7)(cid:3)(cid:15)(cid:3)(cid:7)(cid:16) 1(cid:8)(cid:4) (cid:3)(cid:10)(cid:19)(cid:6)(cid:5)(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:12) (cid:8)(cid:7) (cid:21)(cid:5)(cid:7)(cid:8)(cid:21)(cid:9)(cid:6)(cid:11)(cid:23)(cid:9)(cid:4)(cid:3)(cid:4)/ 0(cid:23)(cid:5) -(cid:3)(cid:10)(cid:12)(cid:3)(cid:10)(cid:26)(cid:4) (cid:3)(cid:10) (cid:7)(cid:23)(cid:3)(cid:4) (cid:7)(cid:23)(cid:5)(cid:4)(cid:3)(cid:4)
(cid:3)(cid:10)(cid:12)(cid:3)(cid:19)(cid:8)(cid:7)(cid:5) (cid:7)(cid:23)(cid:8)(cid:7) (cid:6)(cid:5)(cid:11)(cid:6)(cid:9)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10) (cid:3)(cid:10) 1(cid:3)(cid:14)(cid:12) -(cid:6)(cid:9)(cid:26)(cid:4) (cid:21)(cid:3)(cid:26)(cid:23)(cid:7) (cid:17)(cid:5) (cid:3)(cid:21)(cid:11)(cid:8)(cid:3)(cid:6)(cid:5)(cid:12) (cid:17)(cid:16) (cid:5)(cid:4)(cid:7)(cid:6)(cid:9)(cid:26)(cid:5)(cid:10)(cid:3)(cid:19) (cid:19)(cid:9)(cid:21)(cid:11)(cid:9)(cid:18)(cid:10)(cid:12)(cid:4) (cid:3)(cid:10) (cid:7)(cid:23)(cid:5)
(cid:5)(cid:10)(cid:15)(cid:3)(cid:6)(cid:9)(cid:10)(cid:21)(cid:5)(cid:10)(cid:7)/ 0(cid:23)(cid:5) (cid:6)(cid:5)(cid:4)(cid:18)(cid:14)(cid:7)(cid:4) (cid:19)(cid:9)(cid:21)(cid:17)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:12) 1(cid:3)(cid:7)(cid:23) (cid:7)(cid:23)(cid:5) (cid:4)(cid:23)(cid:9)(cid:6)(cid:7) (cid:26)(cid:5)(cid:10)(cid:5)(cid:6)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10) (cid:7)(cid:3)(cid:21)(cid:5) (cid:4)(cid:18)(cid:11)(cid:11)(cid:9)(cid:6)(cid:7)(cid:4) (cid:7)(cid:23)(cid:5) (cid:18)(cid:4)(cid:5) (cid:9)-
(cid:27)(cid:13)(cid:15)(cid:9)(cid:11)(cid:19)(cid:16) (cid:5)(cid:12)(cid:9)(cid:11)(cid:3)(cid:23)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:16) (cid:8)(cid:4) (cid:8) (cid:21)(cid:9)(cid:12)(cid:5)(cid:14) (cid:4)(cid:11)(cid:5)(cid:19)(cid:3)(cid:5)(cid:4) 1(cid:23)(cid:5)(cid:10) (cid:5)(cid:15)(cid:8)(cid:14)(cid:18)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:10)(cid:26) (cid:14)(cid:9)(cid:10)(cid:26) (cid:7)(cid:5)(cid:6)(cid:21) (cid:5)--(cid:5)(cid:19)(cid:7)(cid:4) (cid:9)- (cid:5)(cid:10)(cid:12)(cid:9)(cid:19)(cid:6)(cid:3)(cid:10)(cid:5)
(cid:12)(cid:3)(cid:4)(cid:6)(cid:18)(cid:11)(cid:7)(cid:9)(cid:6)(cid:4)(cid:9)(cid:10)(cid:7)(cid:23)(cid:5)(cid:6)(cid:5)(cid:11)(cid:6)(cid:9)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)(cid:3)(cid:15)(cid:5)(cid:4)(cid:16)(cid:4)(cid:7)(cid:5)(cid:21)(cid:3)(cid:10)(cid:8)(cid:21)(cid:11)(cid:23)(cid:3)(cid:17)(cid:3)(cid:8)(cid:10)(cid:4)/
(cid:29)(cid:13)(cid:24)(cid:30)(cid:9)(cid:12)(cid:25)(cid:16)(cid:31)0(cid:5)(cid:4)(cid:7)(cid:4)(cid:16)(cid:4)(cid:7)(cid:5)(cid:21)(cid:24);(cid:5)(cid:10)(cid:9)(cid:11)(cid:18)(cid:4)(cid:7)(cid:6)(cid:9)(cid:11)(cid:3)(cid:19)(cid:8)(cid:14)(cid:3)(cid:4)(cid:24)5(cid:8)(cid:10)(cid:8)(cid:7)(cid:5)(cid:21)(cid:11)(cid:9)(cid:6)(cid:8)(cid:6)(cid:3)(cid:8)(cid:24)(cid:4)(cid:5)(cid:20)(cid:6)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:24)(cid:4)(cid:5)(cid:20)(cid:12)(cid:3)--(cid:5)(cid:6)(cid:5)(cid:10)(cid:7)(cid:3)(cid:8)(cid:7)(cid:3)(cid:9)(cid:10)(cid:24)
-(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:14)(cid:3)(cid:7)(cid:16)(cid:24)(cid:8)(cid:6)(cid:9)(cid:21)(cid:8)(cid:7)(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:24)(cid:9)(cid:15)(cid:8)(cid:6)(cid:16)(cid:24)(cid:7)(cid:5)(cid:4)(cid:7)(cid:3)(cid:4)(cid:24)(cid:9)(cid:15)(cid:3)(cid:12)(cid:18)(cid:19)(cid:7)
(cid:12)(cid:3)(cid:15)(cid:6)!(cid:24)(cid:7)(cid:7)(cid:13)(cid:15)(cid:14)(cid:6)(cid:10)(cid:10)(cid:6)(cid:12)"(cid:2)(cid:13)(cid:11)(cid:6)(cid:12)(cid:5)(cid:10)(cid:13)(cid:15)(cid:5)(cid:9)(cid:20)#(cid:14)(cid:24)(cid:16)(cid:3)(cid:9)(cid:7)(cid:9)(cid:4)(cid:24)(cid:6)(cid:15)(cid:25)(cid:2)(cid:13)(cid:17)(cid:13)(cid:7)(cid:9)(cid:11)(cid:10)(cid:13)(cid:15)(cid:5)(cid:6)(cid:7)$(cid:3)(cid:9)(cid:7)(cid:9)(cid:4)(cid:24)"%(cid:15)(cid:17)(cid:3)(cid:12)(cid:9)(cid:15)(cid:10)(cid:13)(cid:15)(cid:5)(cid:6)(cid:7)
(cid:26)(cid:9)&(cid:3)(cid:23)(cid:9)(cid:7)(cid:9)(cid:4)(cid:24)"’(cid:9)(cid:12)((cid:24)(cid:17))*+,"(cid:21)(cid:11)(cid:11)(cid:16)(cid:6)(cid:7)(cid:6)(cid:21)(cid:15)(cid:3)(cid:17)(cid:13)(cid:12)(cid:16)(cid:3)(cid:5)(cid:24)"(cid:18)%-./012(cid:21)(cid:11)(cid:11)(cid:16)(cid:6)(cid:7)(cid:6)"(cid:18)(cid:30)(cid:13)(cid:25)(cid:13)(cid:15)
<3(cid:6)(cid:3)(cid:10)(cid:8)2(cid:16)(cid:14)(cid:14)(cid:5)(cid:10)(cid:23)(cid:8)(cid:21)(cid:21)(cid:8)(cid:6)’))#
3&& "(,"8(’"6
3&(cid:29) *7#8*"8,,687’()89
(cid:18)(cid:6)(cid:10)+(cid:10)(cid:17)(cid:10)+(cid:4)(cid:5)+(cid:18)(cid:18)+(cid:12)(cid:3)(cid:15)(cid:8)8*’)*(cid:28)(cid:23)(cid:7)(cid:7)(cid:11)+==(cid:18)(cid:6)(cid:10)/(cid:27)(cid:17)/(cid:4)(cid:5)=(cid:6)(cid:5)(cid:4)(cid:9)(cid:14)(cid:15)(cid:5)>(cid:18)(cid:6)(cid:10)?(cid:18)(cid:6)(cid:10)+(cid:10)(cid:17)(cid:10)+(cid:4)(cid:5)+(cid:18)(cid:18)+(cid:12)(cid:3)(cid:15)(cid:8)8*’)*(cid:31)
List of papers

The present thesis is based on the following papers, which will be referred to
by their Roman numerals:

I Pettersson I,* Arukwe A, Lundstedt-Enkel K, Mortensen AS,
and Berg C. (2006) Persistent Sex-Reversal and Oviducal
Agenesis in Adult Xenopus tropicalis Frogs following Larval
Exposure to the Environmental Pollutant Ethynylestradiol.
Aquatic Toxicology 79: 356-365.

II Pettersson I* and Berg C. (2007) Environmentally Relevant
Concentrations of Ethynylestradiol Cause Female-Biased Sex
Ratios in Xenopus tropicalis and Rana temporaria. Environ-
mental Toxicology and Chemistry 26: 1005-1009.

III Gyllenhammar I, Holm L, Eklund R, and Berg C. (2008)
Reduced Fertility in Xenopus tropicalis after Developmental
Exposure to Environmental Concentrations of Ethynylestra-
diol. Aquatic Toxicology (in press).

IV Berg C, Gyllenhammar I, and Kvarnryd M. (2008) Xenopus
tropicalis as a test system for developmental and reproductive
toxicity. Journal of Toxicology an Environmental Health (in
press).

V Gyllenhammar I, Eriksson H, Söderqvist A, Lindberg RH,
Fick J, and Berg C. Clotrimazole exposure modulates aroma-
tase activity in gonads and brain during gonadal differentia-
tion in Xenopus tropicalis frogs. Submitted manuscript.

Reprints were made with kind permission from Elsevier and SETAC Press.

* Irina Gyllenhammar, formerly Pettersson.

Contents
(cid:2)
Introduction.....................................................................................................9(cid:2)
Endocrine disruption..................................................................................9(cid:2)
Endocrine disruption in amphibians.........................................................10(cid:2)
Test species..............................................................................................11(cid:2)
Sex determination and differentiation in amphibians...............................11(cid:2)
Gonadal and oviducal differentiation in Xenopus....................................12(cid:2)
Gonadal differentiation in Rana temporaria............................................12(cid:2)
Aromatase.................................................................................................13(cid:2)
Estrogen receptors....................................................................................13(cid:2)
Ethynylestradiol (EE )..............................................................................14(cid:2)
2
Clotrimazole.............................................................................................15(cid:2)
Exposure period........................................................................................16(cid:2)
Objectives.....................................................................................................17(cid:2)
Specific aims............................................................................................17(cid:2)
Methods and experiments.............................................................................18(cid:2)
Test system...............................................................................................18(cid:2)
Exposure systems.....................................................................................19(cid:2)
Semi-static system...............................................................................19(cid:2)
Flow-through system...........................................................................19(cid:2)
Animals....................................................................................................19(cid:2)
Xenopus tropicalis...............................................................................19(cid:2)
Rana temporaria..................................................................................20(cid:2)
Time to metamorphosis............................................................................20(cid:2)
Fixation and histology..............................................................................20(cid:2)
Histological evaluation of sex organs in Xenopus tropicalis...................21(cid:2)
Histological evaluation of gonads in Rana temporaria............................22(cid:2)
Fertility studies.........................................................................................22(cid:2)
Breeding success..................................................................................22(cid:2)
Sperm count and motility.....................................................................22(cid:2)
Aromatase activity....................................................................................23(cid:2)
Quantitative (real time) - PCR..................................................................23(cid:2)
Chemical analysis.....................................................................................23(cid:2)
Statistics...................................................................................................23(cid:2)
Results and discussion..................................................................................25(cid:2)
Effects on sex organ differentiation.........................................................25(cid:2)
Sex ratios.............................................................................................25(cid:2)
Ovarian differentiation.........................................................................27(cid:2)
Testicular differentiation.....................................................................27(cid:2)
Oviducal differentiation.......................................................................31(cid:2)
Reduced fertility.......................................................................................32(cid:2)
Aromatase activity after clotrimazole exposure.......................................33(cid:2)
Aromatase activity after EE exposure.....................................................36(cid:2)
2
Organisational effects on ER(cid:2) mRNA levels...........................................37(cid:2)
Time to metamorphosis............................................................................38(cid:2)
Test system...............................................................................................39(cid:2)
Test species..........................................................................................39(cid:2)
Exposure..............................................................................................39(cid:2)
Endpoints.............................................................................................39(cid:2)
Summary and overall conclusion..................................................................41(cid:2)
Sammanfattning på svenska..........................................................................43(cid:2)
Acknowledgements.......................................................................................45(cid:2)
References.....................................................................................................47(cid:2)
Abbreviations
CYP Cytochrom P450
DDT Dichlorodiphenyltrichloroethane
DES Diethylstilbestrol
EDC Endocrine disrupting chemical
EE Ethynylestradiol
2
ER Estrogen receptor
GSI Gonadosomatic index
hCG Human chorionic gonadotropin
LOEC Lowest observed effect concentration
NF Niewkoop and Faber
OviSI Oviducalsomatic index
PBDE Polybrominated diphenyleter
PC Pars convoluta
PCB Polychlorinated biphenyl
PCR Polymerase chain reaction
PCDF Polychlorinated dibenzofuran

Introduction
During the last decades amphibian populations have dramatically declined
all around the world (Griffiths and Beebee 1992; Houlahan et al. 2000; Al-
ford et al. 2001). Today one third of the amphibian species are reported to be
threatened (Stuart et al. 2004). There are several possible reasons for this
decline and one of them is environmental pollutants (Alford and Richards
1999; Corn 2000; Gibbons et al. 2000; Gardner 2001; Kiesecker et al. 2001;
Beebee and Griffiths 2005). Amphibians have a very important role in the
functioning of ecosystems as both prey and predators.
Observations of high incidences of hermaphroditic male frogs with tes-
ticular oocytes and skewed sex ratio towards males in wild populations of
frogs in the U.S. have been suggested to result from exposure to environ-
mental pollutants (Reeder et al. 1998; Hayes et al. 2003). This raised the
question of whether disrupted sex differentiation is a large-scale problem
among amphibians and if this phenomenon is caused by contaminants. Stud-
ies of long-term effects of larval exposure to environmental pollutants on the
reproductive system in frogs are scarce. It is therefore important to develop
methods to study developmental reproductive toxicity in amphibians.
Endocrine disruption
Many environmental pollutants can interfere with development and function
of the endocrine system and have in some cases been linked to reproductive
disorders in both wildlife and humans (Helle et al. 1976; Guillette et al.
1994; Toppari et al. 1996; Jobling et al. 1998; Toft et al. 2003; Olesen et al.
2007). These compounds are called endocrine disrupting chemicals (EDCs),
defined as exogenous substances that causes adverse health effects in an
intact organism, or its progeny, consequent to changes in endocrine function.
Hormones play an important role during reproduction and development, and
during these processes the organism is most sensitive to EDCs. The main
recipient of EDCs is surface waters, making fish and frogs the main potential
targets among vertebrates. Exposure to EDCs can result in organisational or
activational effects. Organisational effects causes permanent changes and
can only be induced at critical periods during the development. Activational
effects are transient and can occur throughout life. Exposure to EDC in adult
animals might for example induce activational effects that disappear if the
9
exposure ends. However, if the exposure occurs during critical periods of
early development it can cause irreversible structural and functional effects,
e.g. on sex organ development and reproductive behaviour. There is a need
to develop test systems in order to evaluate consequences of EDC exposure
in wild animal species, and especially long-term effects after exposure dur-
ing the critical early life-stages.
Endocrine disruption in amphibians
It is known that larval exposure to estrogenic compounds disrupt gonadal
differentiation which results in female-biased sex ratios in amphibians
(Chang and Witschi 1956; Richards and Nace 1978; Kloas et al. 1999;
Mackenzie et al. 2003). In a whole lake experiment with wild Rana septen-
trionalis it was shown that 28.6 % of the first year tadpoles had testicular
oocytes after exposure to 17 pM EE (corresponding to 5 ng/L). In the refer-
2
ence lakes no intersex gonads where found (Park and Kidd 2005). It is also
known that larval exposure to androgens can cause male-biased sex ratios in
amphibians (Saidapur et al. 2001; Bögi et al. 2002). Metamorphosis, the
transformation of a tadpole into a frog, is stimulated by thyroid hormones. In
laboratory studies on tadpoles, exposure to mixtures of polychlorinated bi-
phenyls (PCB), and to a single polybrominated diphenylether flame retardant
(PBDE-99), caused effects that can be linked to thyroid disruption (Gutleb et
al. 2000; Lehigh Shirey et al. 2006; Carlsson et al. 2007). There are also
examples of EDCs that affect both the thyroid system and gonadal differen-
tiation. Environmentally relevant concentrations of ammonium perchlorate
(0.5 μM, 59 μg/L), a compound used as an oxidizer in rocket fuels by the
military and aerospace industry, has been shown to inhibit thyroid function
and cause a female biased sex ratio in Xenopus laevis (Goleman et al. 2002).
Exposure to the pesticide methoxychlor (0.3 μM, 100 μg/L) resulted in a
female biased sex ratio, in Xenopus tropicalis (Fort et al. 2004b) while lower
concentrations (0.03 μM) caused delayed development and enlarged thyroid
glands.
In wild frogs, findings of testicular oocytes and skewed sex ratios towards
males have been proposed to be linked to environmental pollution (Reeder et
al. 1998; Hayes et al. 2003; Reeder et al. 2005; McDaniel et al. 2008). In
cricket frogs (Acris crepitans) from Illinois, USA, male-biased sex ratios
were correlated to areas contaminated with the industrial chemicals PCB and
polychlorinated dibenzofuran (PCDF) (Reeder et al. 1998). A later study
with Cricket frogs from museum collections in Illinois, showed that the fre-
quency of testicular oocytes correlated with major trends in exposure to
PCBs and the pesticide p,p-dichlorodiphenyltrichloroethane (DDT) through-
out the century (Reeder et al. 2005). McDaniel et al. (2008) evaluated
Northern leopard frogs (Rana pipiens) in southwestern Ontario, USA, and
10