Efeitos dos frutos da Solanum lycocarpum St Hil em ratas prenhes e sua prole durante a gestação

197 Pages·2006·18.72 MB·Portuguese

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
Programa de Pós-Graduação em Toxicologia e Análises Toxicológicas

Efeitos dos frutos da Solanum lycocarpum St Hil em ratas
prenhes e sua prole durante a gestação e início da
lactação: alterações na esfera reprodutiva e na atividade
dos sistemas monoaminérgicos centrais

Aline Schwarz

Tese para obtenção do grau de

DOUTOR

Orientadora: Profa. Dra. Helenice

de Souza Spinosa

São Paulo
2005
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
Programa de Pós-Graduação em Toxicologia e Análises Toxicológicas

Efeitos dos frutos da Solanum lycocarpum St Hil em ratas
prenhes e sua prole durante a gestação e início da
lactação: alterações na esfera reprodutiva e na atividade
dos sistemas monoaminérgicos centrais

Aline Schwarz

Tese para obtenção do grau de
DOUTOR
Orientadora: Profa. Dra. Helenice

de Souza Spinosa

São Paulo
2005
Aline Schwarz

Efeitos dos frutos da Solanum lycocarpum St Hil em ratas prenhes e
sua prole durante a gestação e início da lactação: alterações na esfera
reprodutiva e na atividade dos sistemas monoaminérgicos centrais

Comissão Julgadora
da
Tese para obtenção do grau de Doutor

Profa. Dra. Helenice de Souza Spinosa
orientador/presidente

Viviane Mayumi Maruo
1o. examinador

Ana Cristina Tasaka
2o. examinador

Ernani Pinto Junior
3o. examinador

Regina Lucia Moraes Moreaux
4o. examinador

São Paulo, 11 de novembro de 2005.
Dedico esta tese aos meus queridos pais,
amado filho e irmãos. Sem vocês não
seria o que sou hoje, nem tão pouco
chegaria até aqui. Amo vocês!
"Tenha sempre presente que a pele se enruga, o cabelo embranquece, os dias
convertem-se em anos... Mas o que é importante não muda; a tua força e
convicção não têm idade. Atrás de cada linha de chegada, há uma de partida.
Atrás de cada conquista, vem um novo desafio. Enquanto estiveres vivo,
sente-te vivo. Se sentes saudades do que fazias, volta a fazê-lo. Continua,
quando todos esperam que desistas. Não deixes que enferruje o ferro que
existe em ti. Faz com que em vez de pena, te tenham respeito. Quando não
conseguires correr através dos anos, trota. Quando não conseguires trotar,
caminha. Quando não conseguires caminhar, use uma bengala. Mas nunca te
detenhas!"

Madre Teresa de Calcutá
Agradecimentos

Agradeço, primeiramente, a Deus e à Nossa Senhora por me concederem saúde, forças,
determinação, vontade e perseverança.

Agradeço aos animais aqui empregados que tiveram suas vidas sacrificadas, pois sem eles
nenhum procedimento poderia ter sido desenvolvido. São de fato a alma do trabalho!

Agradeço ao meu querido Nelson que sempre me apoiou, acreditou e me proporcionou
momentos de alegria e tranquilidade. Amo você!

Agradeço à Profa. Helenice de Souza Spinosa que me acolheu, confiou e acima de tudo
sempre acreditou em mim. Obrigada Professora! O que me tornei hoje devo à senhora!

Agradeço à Profa. Silvia Berlanga pela atenção, apoio e interesse por meu bem estar
pessoal e por minha vida profissional. Muito obrigada pela valiosa e importantíssima ajuda!
Agradeço de coração!

Agradeço à Dra. Mitsue Haraguchi pela atenção em etapas importantes do projeto.

Agradeço ao Professor Ernani Pinto pela preciosa colaboração. Valeu!

Agradeço aos professores Regina Lúcia Moraes Moreau, Alexandre Barbuto, Wilma
Kempinas, Maria Lúcia Z. Dagli , Jorge C. Florio e Maria M. Bernardi pelo valioso auxílio
quando necessário. Muito obrigada!

Agradeço à Profa. Dra. Elfriede Marianne Bacchi do Departamento de Farmacognosia da
FCF-USP por disponibilizar a estufa para a secagem dos frutos. Muito obrigada!

Agradeço ao Paulo Cesar e à Ester do CEPTOX (USP-Pirassununga) pela valiosa ajuda e
amizade. Muitíssimo obrigada!

Agradeço aos meus queridos amigos da Toxicologia: Maurício, Dani, Paula, Simone,
Emerson, Luciane, Thiago, Virgínia, Alexandre. Obrigada a todos vocês!

Agradeço aos meus queridos amigos da Veterinária: Milena, Érika, Márcia, Camila, Julia,
Andréia, Caio, Guto, Domenica, Monica, Breno, Marcos. Valeu pelo apoio!

Agradeço aos queridos amigos do ICB: Paula, Alexandra, Clara, Andrea, Marisa, Marcio.
Conhecer vocês foi tudo de bom!

Agradeço à querida Célia pela valiosa orientação. Muito obrigada!

Agradeço à Magali, Pricila e Ricardo do laboratório do VPT. Obrigada pela atenção!

Agradeço à Cláudia e aos funcionários do biotério do VPT. Obrigada pelo carinho e
imprescindível ajuda!

À todos os demais que participaram e colaboraram de alguma maneira nesta etapa que aqui
finaliza. Muito obrigada!
Sumário
Lista de Figuras............................................................................................................................ 01
Lista de Tabelas............................................................................................................................ 04
Resumo.............................................................................................................................................. 07
Abstract............................................................................................................................................ 08
1. Introdução.................................................................................................................................. 09
2. Objetivos .................................................................................................................................... 31
3. Material e métodos................................................................................................................. 32
3.1 Animais......................................................................................................................... 32
3.2 Planta............................................................................................................................. 32
3.3 Equipamentos, vidrarias, aparelhos e outros............................................ 33
3.4 Drogas e reagentes.................................................................................................... 35
3.5 Kits analíticos............................................................................................................. 37
4. Procedimentos.......................................................................................................................... 39
4.1 Extração dos alcalóides dos frutos verdes dessecados e moídos da
S. lycocarpum..................................................................................................................... 39
4.2 Identificação dos alcalóides solamargina e solasonina nos frutos
verdes dessecados e moídos da S. lycocarpum.................................................... 42
4.3 Preparo da ração com 10% de S. lycocarpum.................................................. 44
4.4 Diagnóstico de prenhez.......................................................................................... 45
4.5 Avaliação da toxicidade materna...................................................................... 46
4.6 Desempenho reprodutivo e avaliação perinatal.......................................... 46
4.7 Acompanhamento do ciclo estral....................................................................... 47
4.8 Análise do peso úmido e estudo histopatológico de órgãos acessórios
dos aparelhos reprodutivos masculino e feminino e outros órgãos
diversos..................................................................................................................................... 48
4.9 Ovariectomia de fêmeas....................................................................................... 48
4.10 Avaliação do comportamento sexual............................................................ 49
4.10.1 Orientação sexual de machos................................................................. 49
4.10.2 Comportamento sexual de fêmeas....................................................... 51
4.10.3 Comportamento sexual de machos....................................................... 52
4.11 Estudo da fertilidade das proles........................................................................ 54
4.11.1 Em fêmeas.......................................................................................................... 55
4.11.2 Em machos.......................................................................................................... 56
4.12 Avaliação dos níveis de metabólitos de hormônios sexuais em
fezes de ratos e dos níveis séricos de hormônios tireoideanos na
prole adulta............................................................................................................................... 56
4.12.1 Colheita e armazenamento do material fecal........................................ 56
4.12.2 Colheita e armazenamento do soro............................................................ 57
4.12.3 Processamento das amostras fecais.......................................................... 57
4.12.4 Dosagens hormonais....................................................................................... 59
4.12.5 Validação de kits para as dosagens fecais............................................ 61
4.12.6 Níveis dos metabólitos dos hormônios sexuais em diferentes
períodos da gestação....................................................................................................... 61
4.12.7 Transformação das concentrações fecais determinadas por
RIE.......................................................................................................................................... 61
4.13 Dosagem dos níveis cerebrais de DA, HVA, DOPAC,, MHPG,
VMA, 5-HT e 5-HIAA........................................................................................................ 62
4.13.1 Procedimentos para obtenção de amostras de
homogenatos cerebrais...................................................................................................... 62
4.13.2 Condições cromatográficas........................................................................... 63
4.13.3 Preparo das soluções padrões de monoaminas...................................... 64
5. Delineamento experimental................................................................................................ 65
5.1 Avaliação da toxicidade materna...................................................................... 65
5.2 Desempenho reprodutivo e avaliação perinatal.......................................... 66
5.3 Análise do peso úmido e estudo histopatológico de órgãos..................... 66
5.4 Avaliação do comportamento sexual............................................................... 67
5.5 Estudo da fertilidade das proles...................................................................... 68
5.6 Dosagem dos metabólitos de hormônios sexuais nas fezes de
ratos........................................................................................................................................... 69
5.7 Dosagem dos níveis de neuromaminas cerebrais e seus
metabólitos nas regiões hipotalâmica e estriatal do SNC de ratos............ 70
5.8 Análise estatística................................................................................................ 70
6. Resultados.................................................................................................................................. 72
6.1 Extração e identificação de alcalóides dos frutos verdes dessecados
e moídos da S.lycocarpum.............................................................................................. 72
6.2 Avaliação da toxicidade materna....................................................................... 80
6.3 Desempenho reprodutivo e avaliação perinatal........................................ 88
6.4 Avaliação do ciclo estral....................................................................................... 96
6.5 Análise do peso úmido e estudo histológico de diferentes órgãos
retirados................................................................................................................................... 97