Table Of Content植 物 分 类 与 资 源 学 报 ꎬ３６ ( ):
２０１４ ４ ５０５~５１２
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ :
ＤＯＩ １０.７６７７/ｙｎｚｗｙｊ２０１４１３１８１
江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的包埋干燥法超低温保存
∗
洪森荣ꎬ 尹明华∗∗ꎬ 王艾平
上饶师范学院生命科学学院 江西上饶
( ꎬ ３３４００１)
摘要: 对江西铅山红芽芋 Ｃｏｌｏｃａｓｉａ ｅｓｃｕｌｅｎｔａ ｃｏｒｍｏｓｕｓ 胚性愈伤组织包埋干燥法超低温
( ｖａｒ. ｃｖ. Ｈｏｎｇｙａｙｕ)
保存进行了初步的研究 结果表明 江西铅山红芽芋胚性愈伤组织包埋干燥法超低温保存较佳的条件为
ꎮ : :
－１蔗糖预培养 脱水方式为空气干燥 或硅胶干燥 化冻温度为 冻后
０７５ｍｏｌＬ ３ｄꎻ ７ｈ １１ｈꎻ ３７℃ (２ｍｉｎ)ꎻ
培养条件为暗培养 再转到光周期中培养 此方法超低温保存后的平均成活率约为 超低温保存时
７ｄ ꎮ ４５％ꎮ
间以及是否去除包裹的褐藻酸钙对其成活率无显著性影响 形态学和细胞学检测表明红芽芋胚性愈伤组织
ꎮ
冻后再生苗与母本材料相比没有发生变异
ꎮ
关键词: 江西铅山红芽芋 胚性愈伤组织 包埋干燥法 超低温保存
ꎻ ꎻ ꎻ
中图分类号: 文献标识码: 文章编号:
Ｑ９４３１ꎬ Ｓ６３２３ Ａ ２０９５－０８４５(２０１４)０４－５０５－０８
Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｊｉａｎｇｘｉ Ｙａｎｓｈａｎ Ｒｅｄ Ｂｕｄ Ｔａｒｏ Ｃｏｌｏｃａｓｉａ
(
ｅｓｃｕｌｅｎｔａ ｖａｒ. ｃｏｒｍｏｓｕｓ ｃｖ. Ｈｏｎｇｙａｙｕ Ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ
)
Ｃａｌｌｉ ｂｙ Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ
∗∗
ＨＯＮＧ Ｓｅｎ￣Ｒｏｎｇꎬ ＹＩＮ Ｍｉｎｇ￣Ｈｕａ ꎬ ＷＡＮＧ Ａｉ￣Ｐｉｎｇ
ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ ＳｈａｎｇｒａｏＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
( ꎬ ꎬＳｈａｎｇｒａｏ３３４００１ꎬＣｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｃｏｌｏｃａｓｉａ ｅｓｃｕｌｅｎｔａ ｃｏｒｍｏｓｕｓ
: Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｊｉａｎｇｘｉ Ｙａｎｓｈａｎ ｒｅｄ ｂｕｄ ｔａｒｏ ( ｖａｒ. ｃｖ. Ｈｏｎｇｙａｙｕ) ｅｍ￣
ｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｉ ｂｙ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ. Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｐｒｅｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆ
－１
ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄ ｏｎ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ０７５ｍｏｌＬ ｓｕ￣
ｃｒｏｓｅ ｆｏｒ３ ｄａｙｓ. Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｂｙｓｔｅｒｉｌｅａｉｒｉｎａｌａｍｉｎａｒｆｌｏｗｈｏｏｄｆｏｒ７ｈｏｒｓｔｅｒ￣
ｉｌｅ ｄｒｙ ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ｆｏｒ１１ｈ. ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｔｈａｗｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ３７℃ (２ｍｉｎ). Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ
－１
ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｗａｓ ｆｉｒｓｔ ｉｎｔｈｅｄａｒｋｆｏｒ７ｄａｎｄｔｈｅｎｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｔｏｔｈｅｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄｏｆ１４ｈｄ . Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｓｕｒｖｉｖ￣
ａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｉ ａｆｔｅｒ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ａｂｏｕｔ ４５％. Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ ａｎｄ ｗｈｅｔｈｅｒ ｔｈｅ ｒｅｍｏｖａｌ ｏｆ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｃａｌｃｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ. Ｍｏｒ￣
ｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ａｎｄ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔａｂｌｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｃｏｌｏｃａｓｉａ ｅｓｃｕｌｅｎｔａ ｃｏｒｍｏｓｕｓ
: Ｒｅｄ ｂｕｄ ｔａｒｏ ( ｖａｒ. ｃｖ. Ｈｏｎｇｙａｙｕ)ꎻ Ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｕｓꎻ Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣
ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎꎻ Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ
芋具有较丰富的营养价值 在当今蔬菜消 ｃｏｒｍｏｓｕｓ 是江西省铅山县传统优
ꎬ ｃｖ. Ｈｏｎｇｙａｙｕ)
费市场中占有重要地位 是我国南方主要的蔬菜 势产品 种植历史悠久 近十余年来 这一优势
ꎬ ꎬ ꎮ ꎬ
种类 红芽芋 Ｃｏｌｏｃａｓｉａ ｅｓｃｕｌｅｎｔａ 产业发展迅速 已成为铅山县农民增收致富的主
ꎮ ( Ｌ. Ｓｃｈｏｔｔ ｖａｒ. ꎬ
基金项目 江西省科技厅 年农业科技支撑项目基金 年度江西省高等学校科技落地计划项目
∗ : ２０１２ (２０１２２ＢＢＦ６０１２６)ꎻ ２０１３
(ＫＪＬＤ１３０８８)
通讯作者
∗∗ : ＡｕｔｈｏｒｆｏｒｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｙｉｎｍｉｎｇｈｕａ０４＠１６３ｃｏｍ
收稿日期 接受发表
: ２０１３－０９－１０ꎬ ２０１３－１１－０１
作者简介 洪森荣 男 硕士 副教授 研究方向 植物组织培养
: (１９７４－) ꎬ ꎬ ꎬ : ꎮ Ｅ￣ｍａｉｌ:ｈｏｎｇｓｅｎｒｏｎｇ＠１６３ｃｏｍ
植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 卷
５０６ ３６
导产业 铅山县也成为江西省最大的红芽芋生产 存江西铅山红芽芋种质资源提供技术基础
ꎬ ꎮ
基地 年获国家无公害绿色食品证书
ꎬ ２００２ ꎬ ２００７
年 月被中国绿色食品委员会和农业部命名为 １ 材料和方法
３
红芽芋全国绿色食品标准化生产基地县 其产 １１ 材料
“ ”ꎬ
品不但热销上海 广东 浙江 湖北 山东等地 江西铅山红芽芋脱毒试管苗 由江西省江天农业科
、 、 、 、 ꎬ ꎬ
而且远销日本 韩国 新加坡等国 郑建平 技有限公司提供
、 、 ( ꎬ ꎮ
１２ 方法
李火金 红芽芋中碳水化合物含
２０１０ꎻ ꎬ ２０１２)ꎮ 胚性愈伤组织诱导 将江西铅山红芽芋脱毒试管
量较高 脂肪含量较低 蛋白质 维生素及矿物 １２１
ꎬ ꎬ 、 苗的小球茎横切成 厚 分别接种到诱导培养基
质元素含量丰富 营养价值高 具有良好的食用 １~２ｍｍ ꎬ
ꎬ ꎬ 上 诱导培养基为 －１ －１
价值和开发前景 姜绍通等 目前 传 ꎮ ＭＳ＋ＴＤＺ２ｍｇＬ ＋２ꎬ４￣Ｄ１ｍｇＬ ꎬ
( ꎬ ２０１２)ꎮ ꎬ 并添加 －１蔗糖和 －１琼脂 光照
统的江西铅山红芽芋种质资源保存仍采用大田种 ３０ｇＬ ７ｇＬ ꎬ ｐＨ５８~６０ꎮ
条件 黑暗 温度 每天观察愈伤组织诱
: ꎻ : (２５±１) ℃ꎮ
植的方法 不仅需要大量的人力 物力和财力
导情况 记录愈伤组织出现的时间 出愈数 愈伤组织
ꎬ 、 ꎬ ꎬ 、 、
而且还不可避免地受到各种自然灾害 如病虫 颜色和愈伤组织生长情况 后 选取浅黄色果冻状
( ꎮ ６０ｄ ꎬ
害 干旱 低温等 和人为失误 疏于管理 的胚性愈伤组织继代 次 每次 然后将其应用于
、 、 ) ( 、 ２ ꎬ ３０ｄꎬ
挂错标签等 的影响 最终可能造成特有种质的 包埋干燥法超低温保存实验
) ꎬ ꎮ
遗失或混杂 因此 探索江西铅山红芽芋种质资 胚性愈伤组织的包埋干燥法超低温保存程序 在
１２２
ꎮ ꎬ
下 将约 的红芽芋胚性愈伤组织块转入
源超低温保存的方法具有十分重要的意义 (２５±１)℃ ꎬ ０２ｇ
胚性愈伤组织是原生质体操作中最为ꎮ重要的 含２％褐藻酸钠和１ｍｏｌＬ－１蔗糖的ＭＳ培养基中ꎬ 然后
将包含胚性愈伤组织的混合物滴入含有 －１
原始材料 无论是原生质体培养再生植株还是经 ０１ ｍｏｌＬ
ꎬ 和 －１蔗糖的 液体培养基中 以充
原生质体融合获得体细胞杂种 都离不开胚性愈 ＣａＣｌ２ １ｍｏｌＬ ＭＳ ３０ｍｉｎꎬ
ꎬ 分形成直径约 的球形包埋珠 每个包埋珠含 个
４ｍｍ ꎮ １
伤组织的诱导和保存 曾博雅等 然而
胚性愈伤组织块 在无菌条件下 取出包埋珠 放入
( ꎬ ２００９)ꎮ ꎬ
ꎮ ꎬ ꎬ
胚性愈伤组织在长期继代培养过程中经常丢失潜 无菌三角瓶内 倒入 －１
１００ｍＬ ꎬ ＭＳ＋ＴＤＺ ２ｍｇＬ ＋ＮＡＡ １
在的形态发生能力 从而增加了遗传学上的不稳 －１ 无蔗糖 液体培养基进行洗涤 洗涤后将包埋
ꎬ ｍｇＬ ( ) ꎬ
定性 因此 胚性愈伤组织的长期保存是人们一 珠夹出用无菌滤纸片吸干后 将包埋珠转入
ꎮ ꎬ : (１) ＭＳ＋
直试图解决的问题 超低温保存是胚性愈伤组织 －１ －１ －１蔗糖的液体
ꎬ ＴＤＺ２ｍｇＬ ＋ＮＡＡ１ｍｇＬ ＋ ０~１ｍｏｌＬ
培养基中 预培养 或者将包埋珠转入
长期保存的一种常用方法 植物的胚性愈伤组织 ꎬ ３ｄꎻ (２) ＭＳ＋ＴＤＺ
ꎮ
如能成功地保存在液氮中 则可为生物工程研究 ２ｍｇＬ－１＋ＮＡＡ１ｍｇＬ－１＋ ０７５ｍｏｌＬ－１蔗糖的液体培养
ꎬ 基中 预培养 预培养条件均为 光照时间
提供全能性原生质体 也可为植物转基因技术提 ꎬ ０~７ｄꎮ : : １４ｈ
ꎬ －１ 光照强度 －２ －１ 温度
供良好受体材料 ｄ ꎻ : １２５~２５μｍｏｌｍ ｓ ꎻ : (２５±
ꎮ 预培养后 包埋珠表面迅速用灭菌滤纸干燥 放
包埋干燥法最早出现在法国学者 和 １) ℃ꎮ ꎬ ꎬ
Ｆａｂｒｅ Ｄｅ￣ 置在装有灭菌滤纸的培养皿 直径 中 在室温下
( ９ｃｍ) ꎬ
超低温保存马铃薯茎尖的研究中
采用超净工作台的层流空气脱水 或者在含有无
ｒｅｕｄｄｒｅ (１９９０) ꎮ ０~１０ｈꎻ
包埋干燥法具有样品易于操作 避免了二甲基亚 菌干燥硅胶的带硅胶塞的 密闭三角瓶中脱水
、 １００ｍＬ ０~
砜和程序降温仪的使用 王君晖等 目前 每干燥脱水 后 均取 个包埋珠进行称重
( ꎬ １９９９)ꎮ １５ｈꎮ １ ｈ ꎬ １５ :
该技术已应用于长春花 等 啤 包埋珠放在烘箱中 干燥 后测其含水量 以 小
(Ｂａｃｈｉｒｉ ꎬ １９９５)、 ８０℃ ２ｄ ꎬ (
酒花 等 葡萄 等 珠鲜重 干重 鲜重的百分数表示 取脱水包埋珠转移
－ )/ ꎮ
(Ｍａｒｔｉｎｅｚ ꎬ １９９９)、 (Ｗａｎｇ ꎬ
到 冻存管中 然后将冻存管迅速置于液氮中保存
苜蓿 等 大叶蝴蝶兰 ２ｍＬ ꎬ １ｄꎮ
２０００)、 (Ｓｈｉｂｌｉ ꎬ ２００１)、 从液氮中取出冷冻管 分别放入温度为
等 冬凌草 等 阿拉 ꎬ ２５ ℃、 ３０ ℃、
(Ａｍｉｒ ꎬ ２０１１)、 (Ａｉ ꎬ ２０１２)、 或 的水浴中化冻
伯艾蒿 等 苹果 等 ３７℃ ４２℃ ３ｍｉｎꎮ
(Ｓａｒａｂ ꎬ ２０１２)、 (Ｆｅｎｇ ꎬ 胚性愈伤组织恢复培养及成活率检测 将化冻后
等植物的超低温保存中 目前 国内外 １２３
２０１３) ꎮ ꎬ 去除或不去除褐藻酸钙的红芽芋胚性愈伤组织块转入分
尚未见有关包埋干燥法超低温保存红芽芋胚性愈
化培养基 －１ －１ －１
(ＭＳ＋ＴＤＺ２ｍｇＬ ＋ＮＡＡ１ｍｇＬ ＋３０ｇＬ
伤组织的报道ꎮ 本实验建立了红芽芋胚性愈伤组 蔗糖＋７ｇＬ－１琼脂) 中ꎬ 然后置于两种培养条件下进行
织的包埋干燥法超低温保存体系 为长期稳定保 恢复培养 一是将化冻后的红芽芋胚性愈伤组织块直接
ꎬ ꎮ
期 洪森荣等 江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的包埋干燥法超低温保存
４ : ５ ０７
置于光周期中培养 光照时间 －１ 光照强度 是层流空气脱水还是干燥硅胶脱水 两者的最高
[ : １４ ｈｄ ꎻ : ꎬ
－２ －１ 温度 另一种 成活率无显著性影响 但其脱水时间对红芽芋胚
１２５~２５μｍｏｌｍ ｓ ꎻ : (２５± １) ℃)]ꎻ ꎬ
是先将化冻后的红芽芋胚性愈伤组织块暗培养 温
性愈伤组织包埋干燥法超低温保存还是具有显著
７ｄ [
度 再转到光周期中培养 光照时间
: (２５± １) ℃]ꎬ [ : 影响 结果表明 当层流空气脱水时间超过
－１ 光照强度 －２ －１ 温度 ꎮ ꎬ ４ ｈ
１４ｈｄ ꎻ : １２５~２５μｍｏｌｍ ｓ ꎻ : ２５ 或干燥硅胶脱水时间超过 时 红芽芋胚性愈
后统计成活率及恢复生长的时间 红芽 ７ ｈ ꎬ
±１℃)]ꎮ ６０ｄ ꎮ 伤组织开始出现冻后成活 而且随着脱水时间的
芋胚性愈伤组织块的成活以其能分化出胚状体为标志 ꎬ
ꎮ 延长 冻后成活率均显著增加 当层流空气脱水
成活率 超低温保存后胚性愈伤组织分化出胚状体的块 ꎬ ꎻ
＝(
或干燥硅胶脱水 即含水量为
数 超低温保存后胚性愈伤组织的总块数
/ )×１００％ꎮ ７ｈ １１ ｈ ( ２１２％~
超低温保存后胚性愈伤组织再生苗的形态学和细 时 红芽芋胚性愈伤组织的冻后成活率
１２４ ２１５％) ꎬ
胞学检测 将超低温保存后的红芽芋胚性愈伤组织块以 达到 之后随着干燥时间的增
４４６％~４５２％ꎻ
及未进行超低温保存处理的红芽芋胚性愈伤组织块 加 冻后成活率下降 因此 红芽芋胚性愈伤组
ꎬ ꎮ ꎬ
约 同时接入分化培养基 织包埋干燥法超低温保存的适宜干燥时间为层流
(ＣＫꎬ ０２ｇ) (ＭＳ＋ＴＤＺ ２ｍｇ
Ｌ－１＋ＮＡＡ１ｍｇＬ－１＋３０ｇＬ－１蔗糖＋７ｇＬ－１琼脂)ꎬ ３０ｄ 空气脱水 或干燥硅胶脱水
７ｈ １１ｈꎮ
后将分化出的胚状体再次转入分化培养基
(ＭＳ＋ＴＤＺ ２ ２３ 化冻温度对红芽芋胚性愈伤组织包埋干燥
－１ －１ －１蔗糖 －１琼脂
ｍｇＬ ＋ＮＡＡ １ｍｇＬ ＋３０ｇＬ ＋７ｇＬ )ꎬ 法超低温保存的影响
形成完整植株后对以上两种再生苗进行形态学和细
６０ｄ 从表 可知 化冻温度对红芽芋胚性愈伤组
胞学检测 形态学检测指标有株高 芽数 根数 根长 ３ ꎬ
ꎮ 、 、 、 织包埋脱水法超低温保存具有显著影响 用
等 细胞学检测采用染色体数目测定与观察的方法 梁 ꎮ
ꎮ (
乾隆等 －１蔗糖预培养 后 在含有干燥硅
ꎬ２０１３)ꎮ ０７５ｍｏｌＬ ３ｄ ꎬ
统计方法 以上实验均重复 次 每次实验的 表１ 预培养液中蔗糖浓度对红芽芋胚性愈伤组织
１２５ ３ (
样本量均为 个 本实验所有数据表示为 ＳＤ 包埋脱水法超低温保存的影响
４５ )ꎬ Ｍｅａｎ± ꎬ
由于统计各处理的细胞活力和成活率时发现多数实验数
Ｔａｂｌｅ１ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｕｃｒｏｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｐｒｅｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ
据不在 范围内 为提高显著性检验的精确度
３０％~７０％ ꎬ ꎬ ｏｎｔｈｅｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ
对其进行反正弦转换 然后用 软件进行
ꎬ ＳＰＳＳ１９０ Ｏｎｅ￣ ｃａｌｌｕｓｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ
分析 再进行 法检验 Ｐ 为有统 蔗糖浓度 成活率
Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ ꎬ ＬＳＤ ꎬ <００５
计学差异显著性ꎮ Ｓｕｃｒｏｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ/ｍｏｌＬ－１ Ｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ/％
０ １２６±６３Ｃｄ
２ 结果与分析 ０２５ ２５８±８２Ｂｃ
０５ ２９４±６４Ｂｂｃ
２１ 预培养对红芽芋胚性愈伤组织包埋干燥法
０７５ ４６９±７５Ａａ
超低温保存的影响
１ ３２５±３２Ｂｂ
注 同一列中大 小写字母分别表示在 和 水平上的
从表 可知 预培养对红芽芋胚性愈伤 : 、 ００１ ００５
１~２ ꎬ 差异性 下同
组织包埋脱水法超低温保存具有显著影响 当用 ꎬ
ꎮ
Ｎｏｔｅ:Ｔｈｅｃａｐｉｔａｌａｎｄ ｓｍａｌｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｖｏｌｕｍｅ ｓｔａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ
－１蔗糖对红芽芋胚性愈伤组织预培养
０~１ｍｏｌＬ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｎ００１ａｎｄ００５ｌｅｖｅｌꎬｔｈｅｓａｍｅａｓｂｅｌｏｗ
或用 －１蔗糖对红芽芋胚性愈伤组
３ｄ ０７５ ｍｏｌＬ 表２ 预培养时间对红芽芋胚性愈伤组织包埋
织预培养 时 结果表明 红芽芋胚性愈伤
０~７ｄ ꎬ ꎬ 脱水法超低温保存的影响
组织包埋干燥法超低温保存的最适宜预培养条件
Ｔａｂｌｅ２ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｐｒｅｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅｏｎｔｈｅｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｒｅｄ￣
为 －１蔗糖预培养 蔗糖浓度过高
０７５ｍｏｌＬ ３ ｄꎬ ｂｕｄｅｄｔａｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ
过低或预培养时间过长 过短均不利于红芽芋胚
预培养时间 成活率
、
性愈伤组织的冻后成活
Ｐｒｅｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅ/ｄ Ｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ/％
ꎮ
２２ 干燥方式和时间对红芽芋胚性愈伤组织包 ０ １３８±３９Ｄｄ
埋干燥法超低温保存的影响 １ ３５４±５２Ｃｃ
３ ４８２±４２Ａａ
从图 和 可知 脱水方式对红芽芋胚性愈
１ ２ ꎬ ５ ４０９±４６Ｂｂ
伤组织包埋干燥法超低温保存无显著影响 无论
７ ３４８±８２Ｃｃ
ꎮ
植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 卷
５０８ ３６
图 干燥硅胶脱水时间对红芽芋胚性愈伤组织包埋珠含水量的影响大 小写字母分别
１ 、
表示在 和 水平上的差异性 下同
００１ ００５ ꎬ
Ｆｉｇ１ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎｄｒｙｓｉｌｉｃａ￣ｇｅｌｏｎｔｈｅｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔｏｆｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄｂｅａｄｓ
Ｔｈｅｃａｐｉｔａｌａｎｄｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｓｔａｎｄｆｏｒｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｎ００１ａｎｄ００５ｌｅｖｅｌꎬｔｈｅｓａｍｅａｓｂｅｌｏｗ
图 层流空气脱水时间对红芽芋胚性愈伤组织包埋珠含水量的影响
２
Ｆｉｇ２ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｔｉｍｅｉｎｌａｍｉｎａｒａｉｒｆｌｏｗｏｎｔｈｅｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔｏｆｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄｂｅａｄｓ
表３ 化冻温度对红芽芋胚性愈伤组织包埋 胚性愈伤组织进行化冻时 结果表明 江西铅山
ꎬ ꎬ
脱水法超低温保存的影响 红芽芋胚性愈伤组织包埋脱水法超低温保存的适
Ｔａｂｌｅ３ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈａｗｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｔｈｅｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｒｅｄ￣ 宜化冻温度为
３７℃ꎮ
ｂｕｄｅｄｔａｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ２４ 冻后培养条件对红芽芋胚性愈伤组织包埋
化冻温度 成活率
干燥法超低温保存的影响
Ｔｈａｗｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ/℃ Ｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ/％
从表 可知 冻后培养条件对红芽芋胚性愈
２５ ２０４±５３Ｃｃ ４ ꎬ
３０ ３２６±４２Ｂｂ 伤组织包埋脱水法超低温保存具有显著影响 包
ꎮ
３７ ４７４±６８Ａａ 埋珠用 －１蔗糖预培养 后 在含有
０７５ｍｏｌＬ ３ ｄ ꎬ
４２ ３５２±３９Ｂｂ
干燥硅胶的密闭容器中脱水 至含水量为
１１ ｈ
胶的密闭容器中脱水 至含水量为 时 时 投入液氮保存 后 将包埋珠取出
１１ ｈ ２１１％ ꎬ ２１１％ ꎬ １ｄ ꎬ ꎬ
投入液氮保存 后 将包埋珠取出 用温度为 用温度为 的水浴对红芽芋冻后胚性愈伤组
１ｄ ꎬ ꎬ ３７℃
或 的水浴对红芽芋冻后 织进行化冻 然后直接置于光周期中培养或先暗
２５℃、 ３０℃、 ３７℃ ４２℃ ꎬ
期 洪森荣等 江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的包埋干燥法超低温保存
４ : ５ ０９
培养 再转到光周期中培养时 结果表明 冻 存 后 将包埋珠取出 用温度为 的水浴
７ｄ ꎬ ꎬ １ｄ ꎬ ꎬ ３７℃
后 的暗培养有助于提高其冻后成活率 对红芽芋冻后胚性愈伤组织进行化冻 然后将去
７ｄ ꎮ ꎬ
表４ 冻后培养条件对红芽芋胚性愈伤组织包埋 除或保留褐藻酸钙的包埋珠先暗培养 再转到
７ ｄ
脱水法超低温保存的影响 光周期中培养 从表 可知 培养物抽提即去除
ꎮ ６ ꎬ
Ｔａｂｌｅ４ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｐｏｓｔｔｈａｗｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｎｔｈｅｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ 包裹的褐藻酸钙对红芽芋胚性愈伤组织包埋脱水
ｏｆｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ 法超低温保存的成活率无显著影响 但促进其冻
冻后培养条件 成活率 ꎬ
后再生速度
Ｐｏｓｔｔｈａｗｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ Ｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ/％ ꎮ
直接置于光周期下培养 表５ 超低温保存时间对红芽芋胚性愈伤组织包埋
３６８±５４Ｂｂ
Ｄｉｒｅｃｔｃｕｌｔｕｒｅｉｎｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄ 脱水法超低温保存的影响
先暗培养 再置于光周期下培养
７ｄ Ｔａｂｌｅ５ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎｔｈｅｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆ
Ｆｉｒｓｔｌｙｃｕｌｔｕｒｅｉｎｄａｒｋｆｏｒ７ｄｔｈｅｎｉｎ ４５９±４９Ａａ
ｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ
ｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄ 超低温保存时间 成活率
Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｔｉｍｅ/ｄ Ｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ/％
２５ 超低温保存时间对红芽芋胚性愈伤组织包
１ ４２６±６３Ａａ
埋干燥法超低温保存的影响
３０ ４９３±４９Ａａ
从表 可知 红芽芋胚性愈伤组织包埋珠用
６０ ４５８±４２Ａａ
５ ꎬ
－１蔗糖预培养 后 在含有干燥硅 ９０ ４８２±７２Ａａ
０７５ｍｏｌＬ ３ ｄ ꎬ
胶的密闭容器中脱水 至含水量为 时 １２０ ４２７±５４Ａａ
１１ ｈ ２１１％ ꎬ
１５０ ５１４±６１Ａａ
投入液氮保存 后 将包埋珠取出 用温
１~１８０ｄ ꎬ ꎬ １８０ ４３７±８２Ａａ
度为 的水浴对红芽芋冻后胚性愈伤组织进
３７℃
行化冻 然后先暗培养 再转到光周期中培养 ２７ 冻后胚性愈伤组织再生苗的形态学和细胞
ꎬ ７ ｄ
时 其冻后成活率虽有差异 但未达显著性水 学检测
ꎬ ꎬ
平 因此 超低温保存时间对红芽芋胚性愈伤组 从表 图 可知 红芽芋胚性愈伤组织
ꎮ ꎬ ７、 ３~７ ꎬ
织包埋干燥法超低温保存无显著影响 冻后再生苗与未冻后再生苗在形态指标上的差异
ꎮ
２６ 褐藻酸钙对红芽芋胚性愈伤组织包埋干燥 均未达显著性水平 Ｐ 而且 红芽芋胚
( >００５)ꎮ ꎬ
法超低温保存的影响 性愈伤组织冻后再生苗与未冻后再生苗的染色体
红芽芋胚性愈伤组织包埋珠用 －１ 数目经检测未发生变化 以上结果表明 江西铅
０７５ ｍｏｌＬ ꎮ ꎬ
蔗糖预培养 后 在含有干燥硅胶的密闭容器 山红芽芋胚性愈伤组织的包埋干燥法超低温保存
３ｄ ꎬ
中脱水 至含水量为 时 投入液氮保 可以保证其遗传稳定性
１１ｈ ２１１％ ꎬ ꎮ
表６ 褐藻酸钙对红芽芋胚性愈伤组织包埋脱水法超低温保存的影响 (４２ｄ)
Ｔａｂｌｅ６ ＥｆｆｅｃｔｏｆＣａ￣ａｌｇｉｎａｔｅｏｎｔｈｅｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ
平均新生芽长 平均新生芽数
褐藻酸钙 成活率
Ｃａ￣ａｌｇｉｎａｔｅ Ｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ/％
Ａｖｅｒａｇｅｎｅｗｂｕｄｌｅｎｇｔｈ Ａｖｅｒａｇｅｎｅｗｂｕｄｎｕｍｂｅｒ
去除
Ｒｅｍｏｖｅ ４６３±２９Ａａ １３±０２Ａａ ３４±０８Ａａ
保留
Ｒｅｔａｉｎ ４５２±５１Ａａ １６±０４Ｂｂ １８±０５Ｂｂ
表７ 超低温保存后红芽芋胚性愈伤组织再生苗的形态学检测
Ｔａｂｌｅ７ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔｓｏｆｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｐｏｓｔｔｈａｗ
正常的胚性愈伤组织再生苗 冻后胚性愈伤组织再生苗
形态指标
Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｄｅｘ Ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔ Ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｐｏｓｔｔｈａｗ
ｗｉｔｈｏｕｔｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔ
平均株高
Ａｖｅｒａｇｅｐｌａｎｔｌｅｔｈｅｉｇｈｔ/ｃｍ ８２±１８Ａａ ７６±２３Ａａ
平均新生芽数
Ａｖｅｒａｇｅｎｅｗｂｕｄｎｕｍｂｅｒ ４２±０９Ａａ ３８±１５Ａａ
平均新生根数
Ａｖｅｒａｇｅｎｅｗｒｏｏｔｎｕｍｂｅｒ ５６±１３Ａａ ６３±２２Ａａ
平均根长
Ａｖｅｒａｇｅｒｏｏｔｌｅｎｇｔｈ/ｃｍ ６８±２１Ａａ ７９±１４Ａａ
植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 卷
５１０ ３６
图 红芽芋胚性愈伤组织冻后萌发 图 红芽芋胚性愈伤组织冻后再生小苗 左为正常的胚性
３ ４ (
愈伤组织再生苗 右为冻后胚性愈伤组织再生苗
Ｆｉｇ３ Ｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｐｏｓｔｔｈａｗｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ꎬ )
ｃａｌｌｉｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ Ｆｉｇ４ Ｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｐｏｓｔｔｈａｗｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｉｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ(Ｌｅｆｔｗａｓｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔ
ｗｉｔｈｏｕｔｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎꎬｒｉｇｈｔｗａｓｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ
ｃａｌｌｕｓｐｏｓｔｔｈａｗｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔ)
图 红芽芋胚性愈伤组织冻后再生小苗增殖 左为正常的胚性愈伤组织再生苗 右为冻后胚性愈伤组织再生苗
５ ( ꎬ )
Ｆｉｇ５ Ｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｐｏｓｔｔｈａｗｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｉｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｐｌａｎｔｌｅｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ(Ｌｅｆｔｗａｓｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｐｌａｎｔｌｅｔｗｉｔｈｏｕｔｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎꎬｒｉｇｈｔｗａｓｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｐｏｓｔｔｈａｗｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔ)
图 红芽芋胚性愈伤组织冻后再生小苗继代生长 左为正常 图 红芽芋胚性愈伤组织冻后再生植株移栽成活 左为正常
６ ( ７ (
的胚性愈伤组织再生苗 右为冻后胚性愈伤组织再生苗 的胚性愈伤组织再生苗 右为冻后胚性愈伤组织再生苗
ꎬ ) ꎬ )
Ｆｉｇ６ Ｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｐｏｓｔｔｈａｗｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｉｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ Ｆｉｇ７ Ｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏｐｏｓｔｔｈａｗｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｉｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｇｒｏｗｔｈ(Ｌｅｆｔｗａｓｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓ ｐｌａｎｔｌｅｔｗｅｒｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄｓｕｒｖｉｖａｌ(Ｌｅｆｔｗａｓｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔｗｉｔｈｏｕｔｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎꎬｒｉｇｈｔｗａｓ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔｗｉｔｈｏｕｔｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎꎬｒｉｇｈｔｗａｓ
ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｐｏｓｔｔｈａｗｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔ) ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｐｏｓｔｔｈａｗｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｌｅｔ)
期 洪森荣等 江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的包埋干燥法超低温保存
４ : ５ １１
３ 讨论 水 含水量为 时 可获得约 的成活
４ｈꎬ １６％ ꎬ ８０％
包埋干燥法是将样品用褐藻酸钙包埋和脱水 率 等 冬凌草茎尖在干燥硅
(Ｍａｒｔｉｎｅｚ ꎬ １９９９)ꎮ
后 投入液氮中保存的方法 该方法容易掌握 胶上脱水 含水量为 时
ꎬ ꎮ ꎬ ５~７ ｈꎬ ２１１％~２４２％ ꎬ
可缓和脱水过程 简化脱水程序 而且一次能处 可获得约 的成活率 等 枳橙
ꎬ ꎬ ８５％ (Ａｉ ꎬ ２０１２)ꎮ
理较多的材料 曾博雅等 在植物种质 Ｐｏｎｃｉｒｕｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ Ｃｉｔｒｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ
( ꎬ ２００９)ꎮ [ (Ｌ.) Ｒａｆ. × (Ｌ.)
资源的超低温保存中 包埋干燥法对物种的依赖 茎尖在无菌空气流中脱水 含水量
ꎬ Ｏｓｂｅｃｋ.] ８ ｈꎬ
性较低 适用范围很广 因此 得到人们的青 为 时 可获得约 的成活率
ꎬ ꎬ ꎬ １７１％ ꎬ ４０％ (Ｗａｎｇ
睐 近年来 包埋干燥法在植物种质保存中应用 等 长春花悬浮细胞在无菌空气流中脱
ꎮ ꎬ ꎬ ２００２)ꎮ
广泛 且发展迅速 不仅有更多的植物种类和种 水 含水量为 －１ 时 可获得约
ꎬ ꎬ ４ ｈꎬ ０３４ ｇｇ ＤＷ ꎬ
质类型采用此法保存获得成功 而且在保存技术 的成活率 等 阿拉伯艾蒿
ꎬ ５０％ (Ｂａｃｈｉｒｉ ꎬ １９９５)ꎮ
上也有了新的突破 通常包埋干燥法超低温保存 茎尖在无菌空气流中脱水 含水量为
ꎮ ４ｈꎬ １２５６％
一般包括包埋 预培养 干燥脱水 化冻和再培 时 可获得约 的再生率 等
、 、 、 ꎬ ６％ (Ｓａｒａｂ ꎬ ２０１２)ꎮ
养等步骤 谷月等 苹果 Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ 茎尖在
( ꎬ ２００７)ꎮ “Ｇａｌａ” ( × Ｂｏｒｋｈ.)
预培养一般指用高浓度的蔗糖预培养 预培 无菌空气流中脱水 含水量为
ꎬ ５~７ ｈꎬ ２０％~２２％
养有利于保存细胞的生活力 提高材料的抗冻力 时 可获得 的成活率 等
ꎬ ꎬ ８０％ ~ ８２％ (Ｆｅｎｇ ꎬ
和抗脱水力 又不至于使材料受到太多的高渗损 木蓝腋芽分生组织在无菌空气流中脱水
ꎬ ２０１３)ꎮ
伤 谷月等 苹果 Ｍａｌｕｓ ｄｏｍ￣ 含水量为 时 可获得 的成活率
( ꎬ ２００７)ꎮ “Ｇａｌａ” ( × ４ｈꎬ １６％ ꎬ ５６７％
ｅｓｔｉｃａ 茎尖在 －１蔗糖中预培养 和 苜蓿细胞悬浮培养
Ｂｏｒｋｈ.) ０５ ｍｏｌＬ (Ｎａｉｒ Ｒｅｇｈｕｎａｔｈꎬ ２００９)ꎮ
冻后再生率为 等 啤酒 物在无菌空气流中脱水 含水量为
７ｄꎬ ７５％ (Ｆｅｎｇ ꎬ ２０１３)ꎮ ４ ｈꎬ ０３３ ｇ
花茎尖在 －１蔗糖中预培养 冻后 －１ 时 两种细胞系 和 的冻后成
０７５ ｍｏｌＬ ２ ｄꎬ ｇ ＤＷ ꎬ ５ ２６２ ５ ９２９
成活率约为 等 大叶蝴蝶 活率分别为 和 等
８０％ (Ｍａｒｔｉｎｅｚ ꎬ １９９９)ꎮ ２５１％ １４３％ (Ｓｈｉｂｌｉ ꎬ ２００１)ꎮ
兰类原球茎在 －１蔗糖中预培养 冻 本实验表明 红芽芋胚性愈伤组织包埋干燥法超
０７５ｍｏｌＬ ３ｄꎬ ꎬ
后成活率和再生率分别为 和 低温保存后的成活率依赖于材料脱水后的含水
４６６％ ３０％ (Ａｍｉｒ
等 苜蓿细胞悬浮培养物在 －１ 量 与脱水方式无关 只要含水量降至
ꎬ ２０１１)ꎮ ０７５ ｍｏｌＬ ꎬ ꎮ ２１２％~
蔗糖中预培养 两种细胞系 和 红芽芋胚性愈伤组织包埋干燥法超低温
４ ｄꎬ ５ ２６２ ５ ９２９ ２１３％ꎬ
的冻后成活率分别为 和 等 保存后的成活率均可达到 等
２２２％ ８１％ (Ｓｈｉｂｌｉ ꎬ ４５％ꎮ Ｗａｎｇ (２０００)
长春花悬浮细胞在 －１蔗糖中预培 在葡萄茎尖的包埋脱水法超低温保存中也发现
２００１)ꎮ １ｍｏｌＬ ꎬ
养 冻后成活率约为 等 葡萄茎尖在无菌空气流中脱水 含水量为
７ｄꎬ ５０％ (Ｂａｃｈｉｒｉ ꎬ １９９５)ꎮ ７ ｈ
阿拉伯艾蒿茎尖在 －１蔗糖中预培养 或在干燥硅胶上脱水 含水量为
１０ｍｏｌＬ ３ ｄ １６４％ ４５ｈ １６１％
后 经无菌空气流脱水 冻后成活率为 时 也均可获得 的成活率 这与
ꎬ ꎬ ４０％ ꎬ ５９３％~６０５％ ꎮ
等 本实验也表明 红芽芋胚性 本实验结果一致 但大叶蝴蝶兰类原球茎在干燥
(Ｓａｒａｂ ꎬ ２０１２)ꎮ ꎬ ꎮ
愈伤组织在 －１蔗糖中预培养 包 硅胶上的脱水效果好于无菌空气流中脱水 干燥
０７５ ｍｏｌＬ ３ ｄꎬ ꎬ
埋干燥法超低温保存后的成活率为 硅胶脱水 后 含水量为 可获得 的
４６％~４９％ꎮ ６ｈ ꎬ ３２％ꎬ ３０％
因此 在包埋干燥法超低温保存中 预培养液中 再生率 等
ꎬ ꎬ (Ａｍｉｒ ꎬ ２０１１)ꎮ
的最适蔗糖浓度一般为 －１ 预培养 化冻方式也会显著影响冻后材料的成活率
０５~１ ｍｏｌＬ ꎬ ꎮ
时间一般为 具体蔗糖浓度和预培养时间 研究表明 在 的水浴中快速化冻约
２~７ｄꎬ ꎬ ３７~４０℃ １~
依植物材料而异 可以避免慢速化冻过程中再次发生结冰
ꎮ ３ｍｉｎꎬ
脱水过程就是将保存材料的含水量降低到一 的冷冻伤害 等 葡萄茎尖包埋脱
(Ｗａｎｇ ꎬ ２０００)ꎮ
个最适范围 包埋珠的含水量是决定细胞成活 水法超低温保存后于 水浴快速化冻 其成活
ꎮ ４０℃ ꎬ
和再生的一个重要因子 等 一般能 率显著高于室温下化冻的效果 等
(Ａｉ ꎬ ２０１２)ꎮ (Ｗａｎｇ ꎬ ２０００)ꎮ
确保植物材料成活的适宜含水量在 本实验结果也表明 太高或太低的化冻温度均不
２０％~４０％ ꎬ
等 啤酒花茎尖在干燥硅胶上脱 利于红芽芋胚性愈伤组织包埋干燥法超低温保存
(Ａｍｉｒ ꎬ ２０１１)ꎮ
植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 卷
５１２ ３６
的冻后成活 只有在 的水浴中化冻 科学 ３３
ꎬ ３７ ℃ ３ ｍｉｎꎬ )ꎬ (１１):２６９—２７２
红芽芋胚性愈伤组织的冻后成活率可达 ＬｉａｎｇＱＬ(梁乾隆)ꎬ Ｗａｎｇ ＣＢ (王长宝)ꎬ Ｍａ ＸＧ (马祥光) ｅｔ
４７４％ꎮ
ａｌ Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ
在进行包埋干燥法超低温保存时 一般不要把包 .ꎬ２０１２.ＣｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｓｔｕｄｙｏｎＣｈｉｎｅｓｅ Ｌ.(Ａｐｉａｃｅ￣
ꎬ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ 植物科学学报 ３１
裹的褐藻酸钙去除 可直接将包埋珠进行再培养 ａｅ) [Ｊ]. ( )ꎬ (１):
ꎬ
１１—２２
和 本实验表明 是 李火金
(Ｓｅｎ￣Ｒｏｎｇ Ｍｉｎｇ￣Ｈｕａꎬ ２０１３)ꎮ ꎬ ＬｉＨＪ( )ꎬ２０１２. ＲａｐｉｄｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆＹａｎｓａｎｒｅｄ￣ｂｕｄｅｄｔａｒｏ
否去除包裹的褐藻酸钙对红芽芋胚性愈伤组织包 Ｃｈｉ￣
ｓｈｏｏｔ￣ｔｉｐｖｉｒｕｓ￣ｆｒｅｅｐｌａｎｔｌｅｔｓａｎｄｈｉｇｈｙｉｅｌｄｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ [Ｊ].
埋干燥法超低温保存的成活率无显著影响 但可 ｎａＶｅｇｅｔａｂｌｅｓ 中国蔬菜
( )ꎬ(３):４５—４６
ꎬ
促进其冻后芽长和芽数的增加 本实验结果与 ＭａｒｔｉｎｅｚＤꎬ Ｔａｍéｓ ＲＳꎬ Ｒｅｖｉｌｌａ ＭＡꎬ １９９９. Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ
ꎬ Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ
等 的实验结果一致 ｖｉｔｒｏ￣ｇｒｏｗｎｓｈｏｏｔ￣ｔｉｐｓｏｆｈｏｐ( Ｌ.) ｕｓｉｎｇｅｎｃａｐ￣
Ｗａｎｇ (２００２) ꎮ ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ １９
ｓｕｌａｔｉｏｎ/ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ [Ｊ]. ꎬ (１):５９—６３
实验结果表明 红芽芋胚性愈伤组织包埋干
: ＮａｉｒＤＳꎬＲｅｇｈｕｎａｔｈＢＲꎬ２００９. Ｃｒｙｏｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ
燥法超低温保存后的平均成活率约为 形 Ｉｎｄｉｇｏｆｅｒａｔｉｎｃｔｏｒｉａ
４５％ꎬ ａｘｉｌｌａｒｙｓｈｏｏｔｍｅｒｉｓｔｅｍｓｏｆ (Ｌ.) ｂｙｅｎｃａｐｓｕ￣
态学和细胞学检测表明红芽芋胚性愈伤组织冻后 Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐ￣
ｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ [Ｊ].
ｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ￣Ｐｌａｎｔ ４５
再生苗与母本材料相比没有发生变异 ꎬ (５):５６５—５７３
ꎮ ｅｔ ａｌ
ＳａｒａｂＡＳꎬＲｉｄａＡＳꎬＭａｈｍｏｕｄ ＡＫ .ꎬ２０１２. Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ
Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ｈｅｒｂａ￣ａｌｂａ
ｗｉｌｄＳｈｉｈ ( Ａｓｓｏ.) ｓｈｏｏｔ￣ｔｉｐｓ ｂｙ ｅｎｃａｐｓｕｌａ￣
〔参 考 文 献〕
Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ
ｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎａｎｄ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ [Ｊ]. ꎬ
ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ １０８
ꎬ (３):４３７—４４４
ＡｉＰＦꎬ Ｌｕ ＬＰꎬ Ｓｏｎｇ ＪＪꎬ ２０１２. Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ￣ｇｒｏｗｎ Ｓｅｎ￣ＲｏｎｇＨꎬＭｉｎｇ￣ＨｕａＹꎬ２０１３. Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌ
Ｒａｂｄｏｓｉａｒｕｂｅｓｃｅｎｓ ｉｎｖｉｔｒｏ Ｃｏ￣
ｓｈｏｏｔ￣ｔｉｐｓｏｆ ｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎａｎｄ ｆｏｒ ￣ｇｒｏｗｎｓｈｏｏｔｔｉｐｓｏｆＣｈｉｎｅｓｅｇｅｎｕｉｎｅｒｅｄｂｕｄｔａｒｏ(
Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｌｏｃａｓｉａ ｅｓｃｕｌｅｎｔａ ｃｏｒｍｏｓｕｓ
ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｒｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ [Ｊ]. ꎬ Ｌ.Ｓｃｈｏｔｔｖａｒ. ｃｖ.Ｈｏｎｇｙａｙｕ) ｂｙｅｎｃａｐ￣
ＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ １０８ ＳｃｉｅｎｔｉａＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ １６２
ꎬ (３):３８１—３８７ ｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ [Ｊ]. ꎬ :２２６—２３３
ｅｔ ａｌ ｅｔ ａｌ
ＡｍｉｒＡＫꎬＵｍａ ＲＳꎬ Ｐａｕｌ Ｌ .ꎬ ２０１１. Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｏ￣ ＳｈｉｂｌｉＲＡꎬ Ｈａａｇｅｎｓｏｎ ＤＭꎬ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＳＭ .ꎬ ２００１. Ｃｒｙｏｐｒ￣
Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｂｅｌｌｉｎａ Ｍｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａ
ｃｏｒｍ￣ｌｉｋｅ ｂｏｄｉｅｓ (ＰＬＢｓ) ｏｆ (Ｒｃｈｂ. ｆ.) ｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆａｌｆａｌｆａ( Ｌ.) ｃｅｌｌｓｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣
Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｔｉｓ￣ ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ ２０
Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｏｎｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ [Ｊ]. ꎬ ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ [Ｊ]. ꎬ (５):４４５—４５０
ｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ １０７ 王君晖 边红武 黄纯农
ꎬ (３):４７１—４８１ ＷａｎｇＪＨ( )ꎬ Ｂｉａｎ ＨＷ ( )ꎬ Ｈｕａｎｇ ＣＮ ( )ꎬ
ｅｔａｌ
ＢａｃｈｉｒｉＹꎬＧａｚｅａｕＣꎬＨａｎｓｚＪ .ꎬ１９９５. Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａ￣ １９９９. Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｍａｔｅｒｉ￣
Ｐｌａｎｔ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ
ｔｉｏｎｏｆｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｅｌｌｓｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ [Ｊ]. ａｌｓｂｙｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ [Ｊ].
Ｃｅｌｌ ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ ４３ ｏｆＢｏｔａｎｙ 植物学通报 １６
ꎬ ꎬ (３):２４１—２４８ ( )ꎬ (５):５８２—５８６
ｅｔ ａｌ
ＦａｂｒｅＪꎬ Ｄｅｒｅｕｄｄｒｅ Ｊꎬ １９９０. Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ: ａ ｎｅｗ ａｐ￣ ＷａｎｇＱＣꎬ Ｂａｔｕｍａｎ Öꎬ Ｌｉ Ｐꎬ .ꎬ ２００２. Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ
Ｓｏｌａｎｕｍ ＣｒｙｏＬｅｔ￣ Ｐｏｎｃｉｒｕｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ
ｐｒｏａｃｈｔｏ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｈｏｏｔ ｔｉｐｓ [Ｊ]. ｖｉｔｒｏ￣ｇｒｏｗｎｓｈｏｏｔｔｉｐｓ ｏｆ ‘Ｔｒｏｙｅｒ’ ｃｉｔｒａｎｇｅ [
ｔｅｒｓ １１ Ｃｉｔｒｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ
ꎬ (６):４１３—４２６ (Ｌ.) Ｒａｆ. × (Ｌ.) Ｏｓｂｅｃｋ.] ｂｙ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ￣
ｅｔａｌ ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ ２０
ＦｅｎｇＣＨꎬＣｕｉＺＨꎬＬｉＢＱ .ꎬ２０１３.Ｄｕｒａｔｉｏｎｏｆｓｕｃｒｏｓｅｐｒｅｃｕｌｔｕｒｅ ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ [Ｊ]. ꎬ (１０):９０１—９０６
ｅｔａｌ ｉｎｖｉｔｒｏ
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谷月 张恩栋 王起华 曾博雅 王智 张云峰 ｅｔａｌ
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Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ
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姜绍通 程元珍 郑志 ｅｔａｌ 郑建平
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ＸｉａｎＤａｉＨｏｒｔｉａｕｌｕｒｅ 现代园艺
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Ｃｏｌｏｃａｓｉａｅｓｕｌｅｎｌａ ＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ 食品
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