A dense linkage map of the silkworm ( Bombyx mori )based on AFLP markers

2008·0.77 MB·

by  Lie, Zhang

昆 虫 学 报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$，!"#$%&’’(，)（* +）：&,-.&)/ 0112’,),3-&4-
%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%
家蚕高密度 连锁图谱的构建
!"#$
张 烈*，&，钱 敏&，代方银&，赵爱春&，鲁 成&，!
（*M西华师范大学生命科学学院，珍稀动植物研究所，四川南充 -+/’’4；
&M西南大学生物技术学院，农业部蚕学重点实验室，重庆 ,’’/*-）
摘要：为了进行家蚕 -’(./0(’1+数量性状的NOP定位研究，以白色茧系品种5*’（’ "）和近交系大造（Q)’）（#）杂
交得到R*，用R（*#）与双隐性标记的5*’（’ "）回交，得到回交一代（65*），用改进的7RPQ分子标记方法，经4-组选
择性扩增引物扩增，获得分离比为*S（* 2$’M’)）的*/,,个7RPQ位点。用!"H!"=">?# NOTU*（4 V?#G:B=’M&4）连锁
图谱构建软件，构建了具有(*,个标记，+-个连锁群的家蚕高密度7RPQ分子标记连锁图谱。该连锁图谱覆盖的家
蚕基因组长度为*+’’) $!，连锁群长度变化范围为*’4M’W*)/+M/ $!，连锁群的平均长度为+-*M&) $!，其标记间
平均图距*)M4( $!，最小图距&M+$!，最大图距,/M/$!，标记间大于+’$!的>"H共有+4个。该连锁图平均每个连
锁群&+个标记，最多一个连锁群有4&个标记，最少(个标记。该连锁图谱确定了与经典实验遗传图谱第*)连锁
群和X染色体连锁群相对应的两个连锁群。
关键词：家蚕；分子标记；7RPQ；连锁图谱
中图分类号：N4-- 文献标识码：7 文章编号：’,),3-&4（- &’’(）’+3’&,-3*&
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E%? >#BDHG J"G &+C OJB >#BDHG BF E%? $B=GE#D$E?I 9"H $B##?GHB=I J:E% E%? *)E% "=I X $%#B9BGB9? BF
E#"I:E:B="; ;:=b">? 9"HC
8&9 405%(：-’(./0 (’1+；9B;?$D;"# 9"#b?#；7RPQ；;:=b">? 9"H
遗传连锁图谱的构建是遗传学和育种研究的重 图谱由于标记数量的有限，不能满足构建高密度遗
要内容之一，构建高密度的遗传连锁图谱有助于加 传连锁图谱的需要。&’世纪(’年代诞生的分子标
快动、植物育种工作进程，特别是有助于动、植物数 记技术，使构建高密度的分子标记遗传连锁图谱成
量性状的改良研究。仅用形态标记构建的遗传连锁 为可能，因此，利用各种分子标记技术构建分子标记
基金项目：“4/+”计划项目（&’’)56*&*’’’）；四川省教育厅项目（&’’)7*’)）；西华师范大学科研启动基金项目（’)6’,’）
作者简介：张烈，男，*4-,年生，四川巴中人，博士，研究方向为家蚕分子遗传与育种研究，839":;：<%"=>;:?’*@A"%BBC$B9C$=
!通讯作者 7DE%B#FB#$B##?GHB=I?=$?，839":;：;D$%?=>@GJDC?IDC$=
收稿日期 K?$?:L?I：&’’/3’)3*)；接受日期 7$$?HE?I：&’’(3’*3&(
P期 张 烈等：家蚕高密度@AB0连锁图谱的构建 5/?
遗传连锁图谱是遗传学和育种研究的重要途径之 蚕的GHB定位研究。继!"#$%&’()后，构建了家蚕的
一。在一些动、植物如家蚕 !"#$%& #"’（( !"#$%&’() DAB0（,)’ )* +,3，-..4）、D@0E（01"&2""+ )* +,3，-..4；
*+$ ,)’，-../；01"&2""+ )* +,3，-..4；李斌等，5666； 李斌等，5666）、,,D（:’*" )* +,3，5664）和 @AB0（朱玉
万春玲等，566-；赵爱春等，566/）、波尔山羊（李祥 芳等，566-；H*+ )* +,3，566-；赵爱春等，566/）标记
龙等，566/）、中国明对虾 -)..)’"/).+)01 23(.).1(（1 王 连锁图谱。这些家蚕分子连锁图谱的构建，为进一
伟继等，5667）、玉米 4)+ #+%1（89+("#’#* )* +,3， 步开展家蚕高密度分子连锁图谱的构建和利用研究
-..-；郝转芳等，5664）、水稻 5’%6+ 1+*(7+（:*;<’## )* 奠定了基础。这些已构建的各种家蚕分子标记遗传
+,3，-..7；熊立仲等，-..=）、大豆 8,%2(.) #+&（>9’& 图谱仅仅是一个框架图谱，都具有标记数较少，覆盖
)* +,3，-..?）、马铃薯 9",+.0# *0$)’"10#（纪颖彪和屈 家蚕基因组较小等特点，因此这些图谱还不能满足
冬玉，-..?）构建了标记密度不等的各种分子标记的 家蚕分子辅助育种研究的要求。本研究采用实用品
连锁图谱。这些分子标记连锁图谱的构建为基因的 种I （白色茧）与广泛用于家蚕分子标记构图研究
-66
定位、克隆以及数量性状的遗传研究奠定了基础，对 的基础品种大造（绿色茧）为材料进行杂交、回交，应
其进一步的研究和利用有利于提高动、植物育种工 用改进的 @AB0 分子标记方法以及 :*J :*+*K91
作效率和加快育种工作的进展。 GHL2-（. C91%’"+635.）（:*+#M )* +,3，566-）软件进行
@AB0分子标记技术是由 C"%等（-..4）在 DAB0 连锁分析，构建家蚕高密度 @AB0 分子标记遗传连
技术和D@0E技术的基础上发展起来的一种高效分 锁图谱，为进一步进行家蚕数量性状的 GHB分析和
子标记。@AB0 分子标记技术既具有 D@0E 分子标 分子标记辅助家蚕育种研究奠定基础。
记技术的方便性又具有 DAB0分子标记技术的稳定
与可靠性（王斌和翁曼丽，-..7），特别是在对生物遗 ! 材料和方法
传背景不甚了解的情况下，利用 @AB0 分子标记技
术对基因组各部分可能存在的 EF@序列变异进行 !"! 材料
扫描，从而发现不同个体间的多态性。@AB0分子标 作图群体：采用生态型差异较大的高交代实用
记技术克服了 D@0E 分子标记技术的不稳定性和 白色茧系品种 I （!）和西南大学家蚕基因库培育
-66
DAB0分子标记技术受探针来源的限制，因此，@AB0 的近交系大造（046）（ ）杂交得到 A ，用 A（ ）与
" - - "
分子标记可用于生物遗传研究分析的许多方面，如
双隐性标记的 I （!）回交，得到回交代（8I ）。按
-66 -
遗传连锁图谱的构建，目的基因的定位、品种鉴别、
家蚕常规饲育方法在 54N左右，给予良桑饲养，待
分类和系统发育研究等多个方面。
结茧化蛹后，随机取回交代（8I ）的//个个体，其中
-
家蚕 !3 #"’( 是重要的经济昆虫，作为生产已
绿色茧 55 个（雌、雄各 -- 个），白色茧 55 个（雌、雄
有五千多年的历史，作为遗传学研究材料，家蚕具有
各--个）以及回交代的亲本同胞后代各 -6 个用于
其他动物所不可替代的易于繁殖、饲养，繁殖后代数
基因组EF@提取。
量较多等优点。对家蚕的遗传学及其应用研究也积
!"# 主要试剂和酶
累了较为丰富的经验，并保存了大量的品种资源，利
:1*!和 ;+<!限制性内切酶，H EF@ 连接酶，
/
用部分品种资源已构建了含有//6多个形态标记的
$FH0%，尿素，HO:OE，G/-P5 测序银染试剂盒，由
家蚕遗传连锁图谱（代方银等，5664）。形态标记的
01"&9K* 公司生产；H*Q EF@ 聚合酶，甲叉双丙烯酰
数量有限及其多态性不丰富，对进一步开展由多基
胺，丙烯酰胺，由上海生物工程有限公司（,9K"+）分
因控制的数量性状遗传以及基因的定位等研究显得
装；结合硅烷、剥离硅烷等。
十分乏力，因此利用分子标记技术构建家蚕分子标
人工接头和引物：人工接头包括两部分，一部
记遗传连锁图谱显得十分重要。如果构建了家蚕高
分为核心序列（IRDO），另一部分为酶特定序列
密度的分子标记遗传连锁图谱就可以进一步开展家
（OFS），能与用 :1*!、;+<!酶解的基因组 EF@ 片
蚕分子辅助育种研究。!"#$%&’()（-..-）首先提出了
段粘端互补。人工接头由上海生物工程有限公司
国际家蚕分子育种计划，构建了仅76个 DAB0标记
（,9K"+）合成。其结构如下：
的家蚕分子标记连锁图谱框架，并倡导进行有关家
1R= 昆虫学报 *+#%,)#-.-/-0(+%1()(+% ’.卷
!"#$ $%& !"#$ $%&
’()*+!*,*+!**!!*,! +,*!+ )-( ’()*+!*+,*+*,!!,*+ *)-(
-()*!+!,*!!**!+* ,)’( -(),+!,!+**+!, !*! )’(
!"#!人工接头 $%&!人工接头
根据人工接头序列设计相应的选择性引物。引 （$%&）和选择性碱基（$%,）。
物由-部分组成：核心序列（!"#$）、酶特定序列
!"#$ $%& $%,
!"#!预扩增引物：’()*+!**!!*,! +,*!+* +)-(
$%&!预扩增引物：’()*+,*+*,!!,*+ *!*+ +)-(
!"# $%&’模板制备、酶切片段扩增和凝胶分析 每次降低23QU共.-个循环；<RU变性-2 ;，’GU退
取蛹体的 ./-0./1（大小约重 23’ 4）提取基因 火-2 ;，Q1U延伸. :7L，1-个循环；Q1U延伸Q :7L。
组5%+。基因组 5%+ 模板的制备参照 678879:; 等 用.31W琼脂糖凝胶检测选择性扩增结果。预、选
（.<<2）和夏庆友等（.<<=）的方法。基因组 5%+ 的 择性扩增均在 ,DKDA:J8TLD +:C87BAJL !型 5%+合成
完整性经琼脂糖凝胶电泳检测（图 .），并用 >?") 仪上进行。选择性扩增产物先用琼脂糖凝胶电泳检
#+5 @:9AB ;CDE,F -222分光光度计测定其浓度，然后 测，防止扩增漏样，再用GW变性聚丙烯酰胺凝胶对
用 ,$ 稀释，保证基因组 5%+ 的纯度（+ /+ ）在 选择性扩增产物进行分离。分离加样前先加入G V
1G2 1=2 $
.3=左右。 反应终止液，经<-U变性- :7L后，立即将其放入冰
水中，待分离电泳液温度达到’2U时快速将分离样
品加入到加样孔，分离电泳中电泳液温度保持恒温
’2U。选择性扩增产物分离后，用银染法（参照
XAJ:D49 !9BI YR.-1 银染试剂盒使用说明书）显色检
测变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果。
图. 家蚕基因组5%+电泳图
H74I . $8DEBAJCKJAD;7;C9BBDALJM;78NOJA:4DLJ:7E5%+
F：5%+分子量标准"/’()P#:9ANDA；.0=分别为样品（Q *A!）、
（< *A!）、.（’ *A"）、.（G *A"）、1（G 6"）、1Q（6"）、RG（6!）和RQ
（6 ）的基因组 5%+ ,KD 89LD; . BJ = ;KJODP 4DLJ:7E 5%+ JM
!
;78NOJA:（Q *A!），（< *A!），.’（*A"），.G（*A"），1G（6"），1Q
（6"），R（G 6!）9LPR（Q 6!），AD;CDEB7SD8TI 图1 家蚕基因组5%+预扩增
取完整基因组5%+ .22 L4加入’单位 !"#!限 H74I 1 $8DEBAJCKJAD;7;C9BBDALJMCAD9:C87M7E9B7JL
制性内切酶-QU温育1 K，再加入’单位 $%&!限制 JM;78NOJA:4DLJ:7E5%+
性内切酶 G’U温育 1 K对基因组进行酶切，将其酶 .：没有预扩增引物5D8DB7JLJMCAD9:C87M7E9B7JLCA7:DA;；1：没有模板
切产物在Q’U下保持.’ :7L，使内切酶灭活后，酶切 的预扩增结果5D8DB7JLJMBD:C89BD5%+；-：5%+分子量标准5%+
产物储于RU备用。取 ’ V酶切消化产物用 ,R 连 V9PPDA:9ANDA；R0.Q：部分预扩增结果XAD9:C87M7E9B7JL;JM;78NOJA:
$
7LP7S7PZ98;，AD;CDEB7SD8TI
接酶将双链接头连接到经酶切后的 5%+片段上，再
用具有一个选择性碱基的引物对连接产物进行预扩 !"( 数据统计分析
增。预扩增程序为：<RU变性- :7L；循环为<RU变 !"("! +HVX标记数据的统计与分析：+HVX分子标
性-2 ;，’GU退火 . :7L，Q1U延伸 . :7L，12 循环； 记数据获得方法参照 &9[D9Z和 \J（; .<<1）建立的方
Q1U延伸Q :7L。用.31W琼脂糖凝胶检测预扩增结 法，并参考#+X5标记数据分析方法（VZEK，.<<2；常
果（图1）。以此预扩增产物稀释 ./=2 后为模板，再 青和周开亚，.<<=）将一个 +HVX分子标记视为等位
用带-个选择性碱基的引物组进行选择性扩增。选 基因进行多态性分析。每一对引物分别对所有个体
择性扩增程序为：第一次循环为 <RU变性 -2 ;， 基因组的扩增，特定位置扩增出带的作为 . 个分子
G’U退火-2 ;，Q1U延伸.:7L，随后的循环退火温度 标记，并代表.对等位位点，扩增出带的个体为杂合
@期 张 烈等：家蚕高密度"),-连锁图谱的构建 .CE
型记为“!”，未扩增出带的个体为纯合型记为“"”， ) 代分离比应为*+*，对个体间的"),-标记分离进
*
对于部分模糊不清等原因造成判读较难的带型用 行 . 检验，在/0显著水平下，将符合 *+* 分离比
!
“#”代替，以此作为数据记录的标准，将全部带型数 的标记用于遗传连锁图谱的构建。
据录入$%&’(表中。根据孟德尔遗传分离规律回交
表! 选择性扩增引物序列
"#$%&! ’&()*+#,-%./.(#0.)*-1.,&12&34&*(&2
!"#!引物序列 9:;含量（0） $%&!引物序列 9:;含量（0）
-123’14!"#! 5’67’8&’ 9:;&<8=’8= -123’14$%&! 5’67’8&’ 9:;&<8=’8=
-*：/>49";99;;9?;"?9;"9""?4@> //AB ?*：/>49"?9"9?;;?9"9;9"""?4@> CDAC
-.：/>49";99;;9?;"?9;"9""94@> B*A* ?.：/>49"?9"9?;;?9"9;9""";4@> /.AB
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-*.：/>49";99;;9?;"?9;"9"9?4@> B@A. ?*.：/>49"?9"9?;;?9"9;9""?94@> /.AB
根据形态标记将家蚕雌性个体（家蚕的雌性基 ,28OLH’ 91<7M5等命令进行连锁图谱构建。
因型为杂合型 UV）赋予杂合型有带“!”标记，则雄
性个体（家蚕的雄性基因型为纯合型 VV）赋予纯合 7 结果与分析
型无带“"”标记；根据茧色形态标记将绿色茧（9
&
基因对白色茧为显性，应包含纯合子 9 W9 和杂合 75! 扩增结果
& &
子9 W: 两种基因型）赋予有带型“!”标记，则白色 75!5! 引物的扩增效果：从 *. 个 !"#!和 *. 个
&
茧（只包含隐性纯合子基因型:W:）赋予无带型“"” $%&!组合的*CC对双引物中筛选了EB对扩增效果
较好的引物组合进行选择性扩增，经EB组选择性双
标记。
引物对所有个体进行选择性扩增，扩增效果见图 @
!5657 连锁图谱的构建：对符合*+*遗传分离比的
和图C，共获得了F /..个扩增位点。每组引物平均
"),-标记采用RLM RL8LH’1 X?YZ*E（[’152<8GA.E）软
扩增位点FE个，最多 *B* 个，最少 @* 个；不同组双
件（RL8(\ ’# %(I，.GG*）进行连锁分析。连锁分析参
引物间的扩增位点数量相差较大，引物组以-C组合
数设置如下：!]GAGG*，使用其遗传连锁分析方式，
的扩增带较多，平均扩增带*GB个，-*.组合扩增带
选择 ^L&O&1<55 遗传模式，作图函数为 R<1HL8，RLO’
图@ 部分选择性扩增结果
)2HI @ J’&<8KL3M(2N2&L=2<8<N52(OP<1328K2Q2K7L(5
R：ST"分子量标准ST",LKK’13L1O’1I
#%= 昆虫学报 !"#$%&#’(’)’*+"$,+&+"$ %<卷
图! "#$%选择性扩增产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图
&’() ! *+,-./0120/,3’314..,/5063,-057481+’6’-4.’0506"#$% 1/’8,/057,54.9/’5(10+:4-/:+48’7,(,+
;：<==>1?@A分子量标准<==>1?@AB477,/84/C,/；<：绿茧亲本大造!样品;4+,06?4D40；#：白茧亲本E<=="样品&,84+,06E<==；
F：&<!样品;4+,06&<；!G<!：HE<绿茧!;4+,’57’I’794+306(/,,5-0-005HE<；<%G#%：HE<绿茧" &,84+,’57’I’794+306(/,,5-0-005
HE<；#JGFJ：HE<白茧"&,84+,’57’I’794+306K2’.,-0-005HE<；FLG!L：HE<白茧!的个体样品;4+,’57’I’794+306K2’.,-0-005HE<)
较少，平均J<个。 该连锁图中平均每个连锁群#F个标记，最大连锁群
!"#"! 扩增位点的多态性：在扩增位点中，非分离 P#个标记，最少 M 个标记；该连锁图谱总图距 <F
位点即所有个体都能扩增出的同一位点 F F<M 个， ==% -;，平均图距 <%OPM -;，两标记间图距最小 #OF
分离位点即部分个体能够扩增出的位点 % #=! 个， -;，最大 !LOL -;，两标记间图距大于 F= -; 的 (41
占总扩增出位点的 J<N，其多态性与 $45 等（#==<） 共有FP个（图%）。与已构建的其他家蚕 A&B"框架
报道的J=OLN相一致。 图相比（万春玲等，#==<；朱玉芳等，#==<），该连锁图
对分离位点在 P%N置信度下经 # 检验符合 谱具有标记数较多、平均图距较小等特点，便于进一
!
<Q<分离比位点< L!!个，偏分离位点F !J=个，占分 步进行 S$B 定位以及目标基因的定位克隆研究。
离位点JJO%N，这与万春玲等（#==<）用 A&B" 标记 拟定的绿茧标记 B"$XU/与 B"L$LX<F和 B"<<$%X<位
得到的 < <LL 个扩增带，偏分离位点 J!OFN，以及 点紧密相连，其图距分别为 JOM -;和 <%OP -;。该
R00//’13等（<PPL）用A&B"标记的偏分离位点J!OFN 连锁群对应于经典实验遗传连锁图的第<%连锁群。
相近。偏分离位点的发生在分子标记中是普遍存在
的，其发生原因可能有：一是生物配子的生活力和 $ 讨论
竞争力的遗传因素、染色体的转位；二是作图群体
数量大小、酶切基因组 ?@A不彻底、基因组 ?@A本 $"# 家蚕%&’(分子标记遗传连锁图谱比较
身存在大量的断裂片段等原因造成的带型缺失或模 遗传连锁图谱的构建是为了基因的定位克隆及
糊不清。 S$B定位研究，因此连锁图谱上的标记是越多越好，
!"! 连锁图谱构建 标记间的图距是越小越好。本研究所构建的家蚕
用 ;41 ;454(,/ S$T><P（R,/3’05=O#P）连锁图谱 A&B"分子标记遗传连锁图谱与其他已构建的家蚕
构建软件中”;4C, B’5C4(, U/0913”命令，在 "V=O==< A&B"标记遗传连锁图谱相比较（表#），具有标记数
条件下将 < L!! 个 A&B"分子标记分离位点和 < 个 较多、标记间图距较小、覆盖家蚕基因组较大等特
绿茧标记U-位点以及雌性决定作用 W染色体标记 点，因此有利于进一步进行家蚕基因的定位克隆以
位点，共 < L!J 个位点分为 <FF 个连锁群，其中 F#L 及家蚕数量性状的 S$B 定位研究。已构建的所有
个分离位点未进入连锁群。连锁位点率 M<OFN，高 家蚕A&B"分子标记遗传连锁图谱中即使有的图谱
于其他的J!O!FN（朱玉芳等，#==<）。用标记数不少 构建的连锁群比家蚕的 #P 个（#L 个常染色体，< 个
于<=个的连锁群，以及仅有 M 个标记的 W染色体 W染色体和<个Y染色体）实验遗传连锁群多，但都
连锁群，共计 M<! 个标记，构建了 FJ 个连锁群的家 未能够完全与家蚕的#P个实验遗传连锁群相对应，
蚕A&B"分子标记连锁图谱，作图位点率 !JOJN。 用于家蚕全基因组以及其数量性状遗传研究，还有
;期 张 烈等：家蚕高密度"#$%连锁图谱的构建 :!9
图! 家蚕"#$%分子标记连锁图谱
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图! 家蚕"#$%分子标记连锁图谱（续）
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图! 家蚕"#$%分子标记连锁图谱（续）
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图! 家蚕"#$%分子标记遗传连锁图谱（续）
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%期 张 烈等：家蚕高密度!"#$连锁图谱的构建 G@@
待于进一步完善。本研究构建的家蚕 !"#$分子标 蚕!"#$连锁图谱，逐渐完善 !"#$分子标记图谱与
记连锁图谱包含%&个连锁群，可进一步开展基因的 实验遗传图谱的对应，以便应用于指导家蚕育种
定位克隆和 ’(# 定位研究。结合其他已构建的家 研究。
表! 家蚕"#$%分子标记连锁图谱的比较
&’()*! +,-.’/01,2,3"#$%-,)*45)’/)026’7*-’.10210)68,/-
个体数 总图距 标记数 连锁群 平均图距 大于%>点数 大于@>位点数 最大图距
研究者 作图群体
5678,329 (2.1; 71< 5678,3 5678,3- !+,310,71< 5678,32901<- 5678,32901<- (?,;130,-.
)*+,-./01.23 4,*,31./2*
/*:/+/:61;- :/-.1*=, 29;2=/ 290326< :/-.1*=, 723,.?1*%> 723,.?1*@> 71<:/-.1*=,
万春玲
A!5 B# CBD EF %GH@I@ D@J G& GFID@ @%KG @%KG @GIH
朱玉芳
LMNO" CBD EF GJJHIJ D&% GH GGIGD G%KG G%KG @EIJ
谭远德
(!5 OP CBD EF &@DG %@& %> GDI>F @&K> @&K> EFI@
赵爱春
LM!Q!B CBD EE %&F&IF G@& %% DEI%& GGKE GGKE DDJIJ
本研究
(?/--.6:R CBD EE D%>>@ HDE %& D@IJH %JK> %JK> EFIF
已有研究表明家蚕的 A染色体具有强雌性决 小也是影响构图效果的重要因素之一，关于构建分
定作用，但其作用机制尚不清楚。该 !"#$ 分子标 子连锁图谱的最小有效群体，尚无统一标准。已经
记遗传连锁图谱，结合形态标记除确定了与家蚕经 构建的 !"#$ 分子标记连锁图谱中，也有采用小样
典实验遗传连锁图谱的第D@连锁群的对应关系外， 本作图群体的报道，如 U,/7等（DJJF）曾采用 EG 个
还确定了家蚕的雌性决定A染色体连锁群，A雌性 个体的作图群体构建了大豆的高密度 !"#$连锁图
决定连锁标记#$ ( SA与 #$DD(&S%和 #$D(DGS%F位 谱。因此，根据实验条件本研究采用了EE个个体作
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点紧密相连，其图距分别为 GI% =T和 DGIG =T。在 为构图群体。作图群体对构图效果的影响是群体越
此之前尚无有关A染色体连锁群标记的报道，A染 大，可检测的最大图距越大，可分辨的最小图距就越
色体连锁群的标记将有助于家蚕性别调控机制研 小。对于EE个个体的回交群体，可以检测的最大图
究。同时该 !"#$ 分子标记遗传连锁图谱显示，A 距约%% =T，可以分辨的最小图距约J =T（徐云碧和
染色体连锁群上 !"#$ 分子标记数较少，仅有 H 个 朱立煌，DJJE）。以此构图标准判断，本研究所构建
标记，明显较其他染色体上的 !"#$标记位点数少， 的家蚕高密度!"#$分子标记图谱较其他已构建的
这一结果有利于进一步对A染色体连锁群的研究。 家蚕!"#$ 分子标记图谱更好，更具有实用性。与
9:; 作图材料 VVW、W!$P分子标记构图相比较，用 !"#$分子标记
构图材料的选择是影响构图效果的重要因素之 构建的家蚕遗传连锁图谱比 VVW、W!$P分子标记构
一，构图材料的亲本间差异越大，分子标记的多态性 建的家蚕遗传连锁图谱在标记间的平均图距上更
就越丰富。因此本研究采用形态特征和生态型差异 大，这一方面可能与不同分子标记类型有关，不同分
较大的两个亲本杂交及其回交一代为作图群体，用 子标记类型在染色体上的分布密度不同；二是可能
这样的亲本杂交可获得更多的多态性标记，构建高 与作图群体大小有关，如 VVW分子标记图谱的构建
密度的分子标记连锁图谱，每组引物平均获得多态 用DHJ 个个体，其平均图距 &I&% =T（T/12 !" #$X，
性标记@E个。其二是现有的连锁遗传图谱构建软 G>>@）；W!$P分子标记图谱的构建用 D&& 个个体，
件均未考虑配子形成中不发生交换对使用 " 群体 其平均图距%I@EYEI>G =T（O1-6Z2=?/，DJJH）。
G
作图所产生的影响（谭远德等，G>>>），因此，本研究 参 考 文 献（<*3*/*24*1）
采用回交一代为构图群体可以避免由于家蚕雌完全
C,*.2;/;1V，46/..2* B，C26+,. 5，V1/;;1*: !，5RZ1[, V，"3,R--/*,. 4，
连锁所带来的"G 群体作图所不能检测其亲本中互
DJJDX ):,*./9/=1./2*291*W"#$713Z,3-./0?.;R;/*Z,:.2.?,M.;0,*,/*
斥相位点连锁关系的缺陷。
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在分子标记遗传图谱的构建中，作图群体的大 B?1*0 ’，L?26 UO，DJJHX $?R;20,*R 3,=2*-.36=./2* /* .?, -.6:R 29