therapie cellulaire par cellules souches mesenchymateuses humaines apres ischemie cerebrale

180 Pages·2017·15.63 MB·French

by  Olivier Detante

THERAPIE CELLULAIRE PAR CELLULES
SOUCHES MESENCHYMATEUSES HUMAINES
APRES ISCHEMIE CEREBRALE
Olivier Detante
To cite this version:
OlivierDetante. THERAPIECELLULAIREPARCELLULESSOUCHESMESENCHYMATEUSES
HUMAINES APRES ISCHEMIE CEREBRALE. Neurosciences. Université de Grenoble, 2010.
Français. ￿NNT: ￿. ￿tel-00905941￿
HAL Id: tel-00905941
https://theses.hal.science/tel-00905941
Submitted on 19 Nov 2013
HAL is a multi-disciplinary open access L’archive ouverte pluridisciplinaire HAL, est
archive for the deposit and dissemination of sci- destinée au dépôt et à la diffusion de documents
entific research documents, whether they are pub- scientifiques de niveau recherche, publiés ou non,
lished or not. The documents may come from émanant des établissements d’enseignement et de
teaching and research institutions in France or recherche français ou étrangers, des laboratoires
abroad, or from public or private research centers. publics ou privés.
(cid:23)(cid:10)(cid:9)(cid:24)(cid:3)(cid:5)(cid:7)(cid:9)(cid:18)(cid:25)(cid:1)(cid:19)(cid:3)(cid:1)(cid:26)(cid:5)(cid:3)(cid:10)(cid:6)(cid:12)(cid:13)(cid:3)
(cid:1)(cid:1) (cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:7)(cid:9)(cid:1)(cid:9)(cid:8)(cid:8)(cid:1)%!&!(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
THESE POUR LE

(cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:3)(cid:6)(cid:7)(cid:5)(cid:1)(cid:8)(cid:9)(cid:1)(cid:4)(cid:10)(cid:11)(cid:12)(cid:11)(cid:8)(cid:1)(cid:8)(cid:5)(cid:1)(cid:13)(cid:4)(cid:11)(cid:8)(cid:9)(cid:4)(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:2)(cid:14)(cid:1)(cid:15)(cid:11)(cid:15)(cid:7)(cid:9)(cid:5)(cid:1)
Spécialité :(cid:1)(cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:8)(cid:9)(cid:3)(cid:10)(cid:8)(cid:3)(cid:7)(cid:1)(cid:11)(cid:1)(cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:6)(cid:12)(cid:9)(cid:6)(cid:13)(cid:6)(cid:14)(cid:9)(cid:3)(cid:1)(cid:1)

Par

(cid:12)(cid:16)(cid:1)(cid:3)(cid:17)(cid:18)(cid:19)(cid:18)(cid:20)(cid:21)(cid:1)(cid:2)(cid:8)(cid:5)(cid:7)(cid:9)(cid:5)(cid:8)(cid:1)

(cid:22)(cid:21)(cid:23)(cid:24)(cid:20)(cid:25)(cid:26)(cid:23)(cid:20)(cid:1)(cid:20)(cid:26)(cid:1)(cid:24)(cid:27)(cid:28)(cid:26)(cid:20)(cid:25)(cid:28)(cid:20)(cid:1)(cid:29)(cid:28)(cid:30)(cid:17)(cid:18)(cid:31)(cid:28)(cid:20) (cid:20)(cid:25)(cid:26)(cid:1)(cid:17)(cid:20)(cid:1)!"#!$#%!&!(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:5)(cid:10)(cid:8)(cid:6)(cid:7)(cid:22)(cid:11)(cid:8)(cid:1)(cid:4)(cid:8)’’(cid:14)’(cid:7)(cid:11)(cid:6)(cid:8)(cid:1)(cid:1)
(cid:22)(cid:7)(cid:6)(cid:1)(cid:4)(cid:8)’’(cid:14)’(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:4)(cid:10)(cid:8)(cid:13)(cid:1)
(cid:12)(cid:8)(cid:13)(cid:8)(cid:9)(cid:4)(cid:10)((cid:12)(cid:7)(cid:5)(cid:8)(cid:14)(cid:13)(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:10)(cid:14)(cid:12)(cid:7)(cid:11)(cid:9)(cid:8)(cid:13)(cid:1)
(cid:7)(cid:22)(cid:6)(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:11)(cid:13)(cid:4)(cid:10)(cid:8)(cid:12)(cid:11)(cid:8)(cid:1)(cid:4)(cid:8)(cid:6)(cid:8))(cid:6)(cid:7)’(cid:8)(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:4)(cid:27)*+(cid:18)(cid:21)(cid:18),(cid:23)(cid:20)(cid:1)(cid:29)-(cid:21)(cid:1)(cid:12) (cid:20)(cid:1)(cid:4).-(cid:25)(cid:26)-(cid:17)(cid:1)(cid:6)(cid:23) /(cid:1)(cid:20)(cid:26)(cid:1)(cid:12)(cid:16)(cid:1)(cid:12)-(cid:21)0(cid:1)(cid:10)(cid:27) (cid:20)(cid:17)(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:1)
(cid:15)(cid:6)(cid:16)(cid:17)(cid:6)(cid:7)(cid:9)(cid:18)(cid:9)(cid:6)(cid:10)(cid:1)(cid:19)(cid:4)(cid:1)(cid:20)(cid:4)(cid:5)(cid:21)(cid:1)(cid:22)(cid:1)

Président : M. Rémy SADOUL
Rapporteurs : M. Norbert NIGHOGHOSSIAN
(cid:1) (cid:1) (cid:1) Mme Brigitte ONTENIENTE
Examinateurs : Mme Nathalie KUBIS
Mme Chantal REMY
M. Marc HOMMEL
1
2
(cid:27)(cid:3)(cid:16)(cid:3)(cid:5)(cid:8)(cid:9)(cid:3)(cid:16)(cid:3)(cid:10)(cid:18)(cid:7)(cid:1)
(cid:1)
A mes directeurs de thèse :

(cid:28) Mme (cid:4).-(cid:25)(cid:26)-(cid:17)(cid:1) (cid:6)(cid:23) / qui, au jour le jour, a suivi et soutenu ce travail. De la
constance, la rigueur scientifique, la grande amitié et la gentillesse, je ne sais que retenir et
que souligner de ces dernières années en laboratoire… peut(cid:28)être l’absolue nécessité des
« groupes contrôles » !!! Merci pour tout.

(cid:28) Le Pr (cid:12)-(cid:21)0(cid:1)(cid:10)(cid:27) (cid:20)(cid:17) qui a activement soutenu ce projet innovant, en acceptant de
me céder du temps de mon activité médicale (cid:28) fait exceptionnel (cid:28) au profit de
l’expérimentation animale. Merci pour la qualité de l’enseignement de la neurologie
vasculaire lors de mon internat et de mon assistanat. Merci surtout pour la franchise et
l’amitié au cours de ces dernières années tumultueuses.

Merci au Pr (cid:9)(cid:27)(cid:21)(cid:30)(cid:20)(cid:21)(cid:26)(cid:1)(cid:9)(cid:18),.(cid:27),.(cid:27)(cid:24)(cid:24)(cid:18)-(cid:25), à Mme )(cid:21)(cid:18),(cid:18)(cid:26)(cid:26)(cid:20)(cid:1)(cid:3)(cid:25)(cid:26)(cid:20)(cid:25)(cid:18)(cid:20)(cid:25)(cid:26)(cid:20)1(cid:1)à M. (cid:6)(cid:23) /(cid:1)(cid:13)-+(cid:27)(cid:28)(cid:17) et
Mme (cid:9)-(cid:26).-(cid:17)(cid:18)(cid:20)(cid:1)2(cid:28)(cid:30)(cid:18)(cid:24)(cid:1)d’avoir accepté de participer au jury de cette thèse.

Merci au Dr (cid:7)(cid:24)(cid:24)(cid:18)-(cid:1)3-(cid:18)(cid:17)(cid:17)-(cid:21)+ pour son dynamisme et son enthousiasme communicatifs dans ce
projet et en recherche clinique en général. Merci de m’avoir permis de mener à bien ce projet
expérimental malgré la charge de travail clinique en UNV.

Merci à (cid:8) -(cid:25)(cid:28)(cid:20)(cid:17)(cid:1))-(cid:21)(cid:30)(cid:18)(cid:20)(cid:21)(cid:1)pour l’enseignement de l’IRM, des ondes électromagnétiques et
des mystères de l’espace k. Merci pour le soutien toujours efficace et constructif. Merci
encore pour les discussions scientifiques et personnelles que nous avons régulièrement.
Comme le monde n’est pas que de sciences, merci aussi pour les premiers skis de Jeanne !

Merci à (cid:8) -(cid:25)(cid:28)(cid:20)(cid:17)(cid:17)(cid:20)(cid:1)4(cid:21)(cid:18)(cid:17)(cid:17)(cid:27)(cid:25)(cid:1)de m’avoir encadré et conseillé, de manière toujours amicale,
en expérimentation animale et surtout dans le dur apprentissage du modèle animal d’ischémie
cérébrale.

Merci à )(cid:20)(cid:21)(cid:25)-+(cid:20)(cid:26)(cid:26)(cid:20)(cid:1) (cid:9)-(cid:20),(cid:20)(cid:17)(cid:20) qui a rejoint notre équipe pour trouver des liens entre la
cognition des hommes et celle des rongeurs… Merci pour nos rapports amicaux tant à
l’hôpital qu’en laboratoire autour d’un labyrinthe.

Merci à (cid:12)-(cid:21)(cid:18)(cid:20)*3(cid:20)-(cid:25)(cid:25)(cid:20)(cid:1)(cid:6)(cid:18)0.-(cid:21)+ sans qui j’essaierais encore aujourd’hui de cultiver seul
quelques cellules plus ou moins souches. Merci pour le soutien sans faille à ce projet
translationnel de thérapie cellulaire. Dans les méandres des procédures de la biothérapie,
merci d’avoir su allier l’efficacité à la sympathie.(cid:1)

Merci au Dr 2-(cid:26)(cid:18)-(cid:1)4-(cid:21)- (cid:30)(cid:27)(cid:18)(cid:24)(cid:1)pour tout le travail clinique effectué lors de mes absences
hospitalières. Merci encore aujourd’hui pour le soutien amical très appréciable à la neurologie
vasculaire clinique et expérimentale.

Merci à 5(cid:17)(cid:27)(cid:21)(cid:20)(cid:25)0(cid:20)(cid:1)(cid:2)(cid:20)(cid:1)5(cid:21)-(cid:18)(cid:29)(cid:27)(cid:25)(cid:26)(cid:1)pour l’expérience partagée en culture cellulaire et en thérapie
cellulaire car ce n’est pas à la portée du premier venu de « créer » in vitro des cellules
insulino(cid:28)sécrétrices ou des neurones. Merci pour la réactivité et l’efficacité à chaque nouveau
protocole.(cid:1)(cid:1)
3
Merci à (cid:13)- (cid:28)(cid:20)(cid:17)(cid:1)(cid:15)-(cid:17)-(cid:30)(cid:17)(cid:20)(cid:1)pour ses conseils en biologie cellulaire et en microscopie. Merci
pour tous les bons moments passés ensemble en histologie, en IRM… ou au tennis !

Merci à (cid:10)(cid:20)(cid:21)(cid:19)(cid:23)(cid:1)(cid:12)-(cid:26).(cid:18)(cid:20)(cid:28) et (cid:15)(cid:18)(cid:25)0(cid:20)(cid:25)(cid:26)(cid:20)(cid:1)(cid:2)(cid:18)0-(cid:17)(cid:27),(cid:20)(cid:21)(cid:27)(cid:1)pour les heures d’expérimentations animales
partagées avec le sourire.

Merci à (cid:4).(cid:21)(cid:18)(cid:24)(cid:26)(cid:27)(cid:29).(cid:1)(cid:13)(cid:20),(cid:20)(cid:30)-(cid:21)(cid:26). de m’avoir accueilli dans son laboratoire.

Merci à (cid:4)(cid:17)-(cid:28)+(cid:20)(cid:1) 5(cid:20)(cid:28)(cid:20)(cid:21)(cid:24)(cid:26)(cid:20)(cid:18)(cid:25) de suivre avec intérêt et de soutenir ce projet d’ischémie
expérimentale au sein du Grenoble Institut des Neurosciences.

Je tiens à remercier les techniciennes de l’Unité Mixte de Thérapie Cellulaire et Tissulaire,
pour leur accueil et leur implication en recherche, notamment 6(cid:1)3-0(cid:27)(cid:26)(cid:26)(cid:20)(cid:1)7(cid:1)(cid:12)(cid:20)(cid:27) à qui je
souhaite (cid:28) profitant de cette occasion (cid:28) une excellente retraite loin des salles de culture,
(cid:4)(cid:27)(cid:21)(cid:18)(cid:25)(cid:25)(cid:20)(cid:1)’(cid:28)0-(cid:24) et (cid:15)-(cid:17)(cid:23)(cid:21)(cid:18)(cid:20)(cid:1)2(cid:27)(cid:25)(cid:18)8*(cid:12)-(cid:26).(cid:20)(cid:19)(cid:20)(cid:26).

Merci à toute l’équipe du laboratoire du Pr 5-,(cid:21)(cid:20)(cid:26) pour l’accueil agréable et la collaboration à
ce travail notamment ’-(cid:28)(cid:21)(cid:20)(cid:25)(cid:26)(cid:1)(cid:6)(cid:18)(cid:27)(cid:28), 3(cid:28)(cid:17)(cid:18)(cid:20)(cid:25)(cid:1)(cid:2)(cid:18) -(cid:24)(cid:26)(cid:21)(cid:27) -(cid:26)(cid:26)(cid:20)(cid:27), (cid:4)-(cid:26).(cid:20)(cid:21)(cid:18)(cid:25)(cid:20)(cid:1)4.(cid:20)99(cid:18)(cid:1)et (cid:12)-(cid:21)(cid:18)(cid:20)*
(cid:2)(cid:27) (cid:18)(cid:25)(cid:18)(cid:31)(cid:28)(cid:20)(cid:1)(cid:2)(cid:20)(cid:24)(cid:21)(cid:28)(cid:20)(cid:26).

Un grand merci pour l’enthousiasme et le travail des étudiants que j’ai eu plaisir à encadrer au
cours de ces années : (cid:2)(cid:20)(cid:17)(cid:29).(cid:18)(cid:25)(cid:20)(cid:1)(cid:2)(cid:27)(cid:21)0.(cid:20)(cid:25)(cid:20), (cid:6)(cid:27) -(cid:18)(cid:25)(cid:1)(cid:2)-(cid:17) -(cid:25)(cid:25), (cid:15)(cid:18)(cid:21),(cid:18)(cid:25)(cid:18)(cid:20)(cid:1)(cid:12)-/-(cid:25), et (cid:7)(cid:25)-:08(cid:1)(cid:1)
(cid:12)(cid:27)(cid:18)(cid:24)-(cid:25). Beaucoup de leurs résultats expérimentaux sont repris dans cette thèse.

Merci aux Drs(cid:1);(cid:18)(cid:17)<(cid:21)(cid:18)(cid:20)+(cid:1)(cid:15)-+(cid:27)(cid:26)(cid:1)et (cid:3)(cid:17)(cid:18)(cid:19)(cid:18)(cid:20)(cid:21)(cid:1)(cid:4)-(cid:24)(cid:20)9(cid:1)pour le soutien actif de l’UNV de Grenoble
dans des moments difficiles. (cid:1)

Merci aux Prs (cid:22)(cid:18)(cid:20)(cid:21)(cid:21)(cid:20)(cid:1)(cid:22)(cid:27)(cid:17)(cid:17)-81 (cid:22)-(cid:28)(cid:17)(cid:1)2(cid:21)-08(cid:1)et(cid:1)(cid:12)-(cid:28)(cid:21)(cid:18)0(cid:20)(cid:1)4(cid:18)(cid:21)(cid:27)(cid:28)+(cid:1)de m’avoir encouragé à suivre
la voie hospitalo(cid:28)universitaire en neurologie.(cid:1)

Je remercie, pour les discussions constructives et amicales, mes amis de neurologie
vasculaire notamment )(cid:20)(cid:21)(cid:26)(cid:21)-(cid:25)+(cid:1)’-(cid:29)(cid:20)(cid:21),(cid:28)(cid:20), (cid:4).-(cid:21)(cid:17)(cid:27)(cid:26)(cid:26)(cid:20)(cid:1)(cid:6)(cid:27)(cid:24)(cid:24)(cid:27) et (cid:2)-(cid:19)(cid:18)+(cid:1)(cid:4)-(cid:17)(cid:19)(cid:20)(cid:26).

Merci à tous les amis qui ont « supporté » ce travail notamment 3(cid:28)(cid:17)(cid:18)(cid:20)(cid:25)(cid:1) )(cid:21)(cid:28)(cid:25), (cid:6)(cid:20)(cid:25)-(cid:25)(cid:1)
(cid:5)(cid:21)(cid:27)(cid:19)(cid:20)(cid:21)(cid:27), ’(cid:28)+(cid:27)(cid:19)(cid:18)0(cid:1)(cid:8)0-(cid:21)(cid:25)(cid:27)(cid:26)(cid:1)et « les » (cid:3)(cid:17)(cid:18)(cid:19)(cid:18)(cid:20)(cid:21)=(cid:24)>(cid:1)(cid:4)(cid:27),(cid:25)(cid:20), )(cid:23)(cid:26).(cid:27)(cid:28)?, et (cid:4)-(cid:21)(cid:17)(cid:20).

Je remercie ma sœur (cid:4).(cid:21)(cid:18)(cid:24)(cid:26)(cid:18)(cid:25)(cid:20)(cid:1)(cid:2)(cid:20)(cid:26)-(cid:25)(cid:26)(cid:20) et ma grand(cid:28)mère 4(cid:18)(cid:24)@(cid:17)(cid:20)(cid:1)(cid:12)(cid:20)(cid:21)(cid:17)(cid:20)(cid:1)qui m’ont toujours
soutenu avec affection dans tout ce parcours médical et scientifique. Merci également à mes
oncles (cid:12)-(cid:21)0 et (cid:2)(cid:18)+(cid:18)(cid:20)(cid:21)(cid:1)(cid:12)(cid:20)(cid:21)(cid:17)(cid:20).

Merci à mon grand(cid:28)père, (cid:12)(cid:18)0.(cid:20)(cid:17)(cid:1)(cid:12)(cid:20)(cid:21)(cid:17)(cid:20)(cid:1)pour tout ce qu’il a fait pour moi dans ma vie. Merci
pour le goût de la médecine et de la science qu’il a su me transmettre.

Une pensée à mes parents.

4
Je remercie infiniment (cid:28)(cid:29)(cid:5)(cid:29), ma femme, pour la patience et l’écoute tout au long
de ces années de médecine, de gardes, d’astreintes ou de science. L’affection
que nous partageons apporte chaque jour une sérénité indispensable.
5
(cid:30)(cid:29)(cid:1)(cid:24)(cid:9)(cid:3)(cid:1)(cid:19)(cid:3)(cid:7)(cid:1)(cid:5)(cid:29)(cid:18)(cid:7)(cid:1)

Certains rats ont un destin très exceptionnel
Ils commencent leur vie cérébrale en jouant
A des jeux de piste dans cubes et venelles
Et le docteur subtil les observe en comptant

Sur leur aptitude à comprendre et réfléchir
C’est la première phase de leur destinée
Alors vient la deuxième phase sans fléchir
Des piqûres dans la tête ou le périnée

Sont enfoncées par le médecin moins câlin
C’est la troisième phase ils sont mis en jeu
Il faut dès lors déterminer le plus malin

Celui qui résiste le mieux mais quel enjeu
Le bon et merveilleux gagnant thérapeutique
Permet à la science une avancée mirifique

Didier Merle
6
A Jeanne et Tristan.
7
(cid:13)(cid:3)(cid:12)(cid:12)(cid:7)(cid:11)(cid:6)(cid:8)(cid:1)

(cid:11)(cid:16)(cid:1)(cid:11)(cid:9)(cid:5)(cid:6)(cid:3)(cid:2)(cid:14)(cid:4)(cid:5)(cid:11)(cid:3)(cid:9)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)&&
I.1. ACCIDENT VASCULAIRE CEREBRAL (AVC).................................................................................................12
I.1.1. Définitions : AVC et vascularisation artérielle encéphalique............................................................12
I.1.2. Données cliniques..............................................................................................................................16
I.1.3. Données épidémiologiques.................................................................................................................17
I.1.4. Physiopathologie de l’ischémie cérébrale..........................................................................................19
I.1.5. Traitements actuels de l’AVC.............................................................................................................26
I.1.6. Mécanismes impliqués dans la récupération spontanée....................................................................31
I.2. CELLULES SOUCHES ET THERAPIE CELLULAIRE...........................................................................................37
I.3. THERAPIE CELLULAIRE ET ACCIDENT VASCULAIRE CEREBRAL....................................................................43
I.3.1. Thérapie cellulaire et AVC chez l’homme : études cliniques.............................................................43
I.3.2. Transplantation dans les modèles animaux d’ischémie cérébrale.....................................................48
I.4. OBJECTIFS GENERAUX................................................................................................................................50
(cid:11)(cid:11)(cid:16)(cid:1)(cid:12)(cid:8)(cid:5)(cid:10)(cid:3)(cid:2)(cid:3)’(cid:3)4(cid:11)(cid:8)(cid:1)4(cid:8)(cid:9)(cid:8)(cid:6)(cid:7)’(cid:8)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)A%
II.1. METHODE DE CULTURE DES CELLULES SOUCHES MESENCHYMATEUSES HUMAINES..................................52
II.2. MODELE MURIN D’ISCHEMIE CEREBRALE FOCALE.....................................................................................53
II.2.1. Anesthésie.........................................................................................................................................53
II.2.2. Modèle d’ischémie cérébrale focale : occlusion intraluminale transitoire......................................54
II.3. METHODES D’ADMINISTRATION DES CSMH..............................................................................................56
II.3.1. Choix de la voie d’administration chez le rat...................................................................................56
II.3.2. Choix des doses étudiées chez le rat.................................................................................................56
II.4. METHODES D’ANALYSE COMPORTEMENTALE............................................................................................57
II.4.1. Tests sensori>moteurs........................................................................................................................57
II.4.2. Test de mémoire spatiale : labyrinthe radial....................................................................................59
II.5. METHODES GENERALES D’IRM.................................................................................................................60
II.6. METHODES D’HISTOLOGIE.........................................................................................................................61
II.7. METHODES STATISTIQUES.........................................................................................................................63
(cid:11)(cid:11)(cid:11)(cid:16)(cid:1)(cid:12)(cid:7)(cid:6)B(cid:14)(cid:7)4(cid:8)(cid:1)(cid:2)(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:4)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:22)(cid:3)(cid:14)(cid:6)(cid:1)(cid:11)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:4)(cid:8)’’(cid:14)’(cid:7)(cid:11)(cid:6)(cid:8)(cid:1)(cid:8)(cid:5)(cid:1)(cid:12)(cid:11)(cid:4)(cid:6)(cid:3)(cid:13)(cid:4)(cid:3)(cid:22)(cid:11)(cid:8)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)CD
III.1. METHODES...............................................................................................................................................65
III.2. RESULTATS..............................................................................................................................................67
III.2.1. Marquage des CSMh et viabilité.....................................................................................................67
III.2.2. Absence de modification phénotypique des CSMh marquées et de leur potentiel de différenciation
.....................................................................................................................................................................68
III.3. DISCUSSION..............................................................................................................................................70
8
(cid:11)(cid:15)(cid:16)(cid:1)4(cid:6)(cid:8)55(cid:8)(cid:1)(cid:11)(cid:9)(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:4)(cid:8)(cid:6)(cid:8))(cid:6)(cid:7)’(cid:8)(cid:1)(cid:2)(cid:8)(cid:1)(cid:4)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:7)(cid:22)(cid:6)(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:11)(cid:13)(cid:4)(cid:10)(cid:8)(cid:12)(cid:11)(cid:8)(cid:1)(cid:4)(cid:8)(cid:6)(cid:8))(cid:6)(cid:7)’(cid:8)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)E%
IV.1. MATERIEL ET METHODES.........................................................................................................................73
IV.2. RESULTATS..............................................................................................................................................75
IV.2.1. Effets fonctionnels de la greffe intracérébrale de CSMh.................................................................75
IV.2.2. IRM cellulaire in vivo......................................................................................................................76
IV.2.3. Histologie.........................................................................................................................................78
IV.3. DISCUSSION.............................................................................................................................................83
IV.3.1. Effets de la greffe intracérébrale des CSMh après ischémie...........................................................83
IV.3.2. IRM cellulaire in vivo......................................................................................................................84
IV.4. CONCLUSION............................................................................................................................................85
(cid:15)(cid:16)(cid:1)(cid:11)(cid:9)3(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:11)(cid:3)(cid:9)(cid:1)(cid:11)(cid:15)(cid:1)(cid:2)(cid:8)(cid:1)(cid:4)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:7)(cid:22)(cid:6)(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:11)(cid:13)(cid:4)(cid:10)(cid:8)(cid:12)(cid:11)(cid:8)(cid:1)(cid:4)(cid:8)(cid:6)(cid:8))(cid:6)(cid:7)’(cid:8)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)FC
V.1. MATERIEL ET METHODES..........................................................................................................................86
V.2. RESULTATS...............................................................................................................................................88
V.2.1. Effets fonctionnels de l’injection IV de CSMh...................................................................................88
V.2.2. Suivi IRM et IRM cellulaire..............................................................................................................92
V.2.3. Histologie..........................................................................................................................................93
V.3. DISCUSSION...............................................................................................................................................99
V.3.1. Bénéfice fonctionnel de l’injection IV de CSMh après une ischémie cérébrale..............................100
V.3.2. Limites de l’IRM cellulaire après injection IV de CSMh marquées................................................101
V.3.3. Mécanismes d’action des CSMh administrées après une ischémie cérébrale.................................102
V.4. CONCLUSION...........................................................................................................................................107
(cid:15)(cid:11)(cid:16)(cid:1))(cid:11)(cid:3)(cid:2)(cid:11)(cid:13)(cid:5)(cid:6)(cid:11))(cid:14)(cid:5)(cid:11)(cid:3)(cid:9)(cid:1)(cid:2)(cid:8)(cid:1)(cid:4)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:11)(cid:9)3(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:8)(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:22)(cid:7)(cid:6)(cid:1)(cid:15)(cid:3)(cid:11)(cid:8)(cid:1)(cid:11)(cid:15)(cid:1)(cid:7)(cid:22)(cid:6)(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:11)(cid:13)(cid:4)(cid:10)(cid:8)(cid:12)(cid:11)(cid:8)(cid:1)(cid:4)(cid:8)(cid:6)(cid:8))(cid:6)(cid:7)’(cid:8) &!F
VI.1. MATERIEL ET METHODES.......................................................................................................................109
VI.2. RESULTATS............................................................................................................................................112
VI.2.1. Marquage et viabilité des CSMh radiomarquées...........................................................................112
VI.2.2. Lésions cérébrales en IRM.............................................................................................................113
VI.2.3. Imagerie nucléaire « corps entier »...............................................................................................113
VI.2.4. Biodistribution par comptage sur organes isolés..........................................................................115
V.2.5. Histologie........................................................................................................................................118
VI.3. DISCUSSION...........................................................................................................................................120
VI.3.1. Radiomarquage cellulaire et viabilité............................................................................................120
VI.3.2. Les CSMh injectées par voie IV sont attirées vers la lésion ischémique cérébrale.......................120
VI.3.3. Quelle voie d’injection des CSMh ?...............................................................................................122
(cid:15)(cid:11)(cid:11)(cid:16)(cid:1)(cid:8)55(cid:8)(cid:5)(cid:13)(cid:1)(cid:12)(cid:11)(cid:4)(cid:6)(cid:3)(cid:15)(cid:7)(cid:13)(cid:4)(cid:14)’(cid:7)(cid:11)(cid:6)(cid:8)(cid:13)(cid:1)(cid:2)(cid:8)(cid:1)’G(cid:11)(cid:9)3(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:11)(cid:3)(cid:9)(cid:1)(cid:11)(cid:9)(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:4)(cid:8)(cid:6)(cid:8))(cid:6)(cid:7)’(cid:8)(cid:1)(cid:2)(cid:8)(cid:1)(cid:4)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:7)(cid:22)(cid:6)(cid:8)(cid:13)(cid:1)
(cid:11)(cid:13)(cid:4)(cid:10)(cid:8)(cid:12)(cid:11)(cid:8)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)(cid:16)&%D
VII.1. MATERIEL ET METHODES......................................................................................................................125
VII.2. RESULTATS...........................................................................................................................................128
VII.2.1. Suivi IRM du volume lésionnel et de l’oedème.............................................................................128
VII.2.2. Evolution des paramètres microvasculaires en IRM....................................................................129
VII.2.3. Paramètres microvasculaires histologiques.................................................................................132
9