Etude phytochimique et évaluation des activités biologiques de deux plantes du genre Sedum

250 Pages·2012·10.76 MB·French

République Algérienne Démocratique et Populaire
Ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche scientifique
UNIVERSITE FRERES MENTOURI CONSTANTINE
FACULTE DES SCIENCES EXACTES
DEPARTEMENT DE CHIMIE
0
N d’ordre:………..
0
N de série:……….
THESE
Présentée pour obtenir le diplôme de Doctorat en Sciences
en ChiOmPiTeI oOrNga:nique
Phytochimie
Etude phytochimique et évaluation des
activités biologiques de deux plantes du
genre Sedum (Crassulaceae)
Par:BENSOUICI Chawki
Devant le jury composé de :
Président: Prof. A.Kabouche UniversitéfrèresMentouriConstantine
Rapporteur: Prof. Z.Kabouche UniversitéfrèresMentouriConstantine
Examinateurs:
Prof. S. Akkal Université frères Mentouri Constantine
Prof.A. Zellagui Université Larbi Ben'Mhidi (OEB)
Prof.L.Arrar Université Ferhat Abbes (Sétif)
Prof.A.Baghiani Université Ferhat Abbes (Sétif)
Année 2014-2015
Remerciements
Remerciements
En préambule, je souhaite rendre grâce à Dieu, le Clément et Miséricordieux de m’avoir
donné la force, le courage et la patience de mener à bien ce modeste travail
Je tiens à remercier sincèrement mon encadreur Pr. KABOUCHE ZAHIA, Professeur à
l’Université frères Mentouri Constantine 1, de m’avoir suivi et dirigé tout au long de la
réalisation de ce mémoire. Je la remercie aussi pour la confiance qu’elle a placée en moi, pour
sa disponibilité permanente, pour sa patience et ses conseils.
Je souhaite également remercier les membres du jury, Mr. KABOUCHE AHMED,
professeur à l’Université frères Mentouri Constantine 1 qui m’a fait l’honneur d’accepter
d’être président de jury.
Je remercie également Mr. AKKAL SALAH, professeur à l’Université frères Mentouri
Constantine 1 et Mr. ZELLAGUI AMAR, professeur à l’Université Larbi Ben'Mhidi
(OEB), Mr. ARRAR LEKHMISSI, professeur à l’Université Ferhat Abbes (Sétif) et Mr.
BAGHIANI ABDERRAHMANE, professeur à l’Université Ferhat Abbes (Sétif), pour
l’importance qu’ils ont accordé à mon travail en acceptant d’être membres de ce jury et pour
le temps qu'ils ont consacré à l'examen de ce mémoire.
Enfin, mes remerciements vont également à l’équipe de l’université de Mugla, Pr. Mehmet
Öztürk, Pr. Mehmet Emin Duru et à tous ceux et celles qui, de près ou de loin, m’ont
apporté aide et encouragements. Qu’ils trouvent ici l’expression de ma profonde gratitude
Chawki
Dédicaces
Je dédie ce mémoire
À mes chers parents
À mes frères et sœurs
À tous mes amis
Liste des abréviations
DPPH : 1,1-Diphényl-2-PicrylHydrazyl
ABTS : 2,2`-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonique)
ATCC: American Type Culture Collection
BHA : ButylHydroxyAnisole
BHT : ButylHydroxyToluene
CMI : Concentration Minimale Inhibitrice
CUPRAC: Cupric Reducing Antioxidant Capacity
EDTA : Ethylenediaminetetraacetic acid
CI : Concentration Inhibitrice à 50%
50
NCCLS : National Committee for Clinical Laboratory Standard
CCM: Chromatographie sur Couche Mince
CLHP: Chromatographie Liquide Haute Performance
LC/MS : Chromatographie Liquide couplée à la spectrométrie de masse
LC/MS/MS : Chromatographie Liquide coupléeà deux spectrométries de masse
COSY : Correlated Spectroscopy
d : doublet
dd : doublet de doublet
DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer
HMBC : Heteronuclear Multiple Bonding Connectivity
HSQC : Heteronuclear Single Quantum Connectivity
J (Hz): constante de couplage exprimée en Hertz
RMN1H : Résonance Magnétique Nucléaire du proton
RMN 13C : Résonance Magnétique Nucléaire du carbone
COSY: Correlation spectroscopy
UV: Ultra-Violet
λmax : longeur d’onde maximale
µg : Micro-gramme
ECSC : Extrait chloroformique deSedum caeruleum
EASC: Extrait acétate d’éthyle de Sedum caeruleum
EBSC: Extrait butanolique deSedum caeruleum
EHSP: Extrait hexane deSedum pubescens
ECSP: Extrait chloroformique deSedum pubescens
EBSP: Extrait butanolique deSedum pubescens
Liste des tableaux
No Titre Page
1 Usages et propriétés de quelques espèces du genre Sedum 12
2 Distribution des Acides phénoliques dans le genre Sedum 13
3 Distribution des Flavonoïdes dans le genre Sedum 17
4 Distribution des coumarines dans le genre Sedum 30
5 Distribution des terpenoides dans le genre Sedum 32
6 Distribution des alcaloïdes dans le genre Sedum 35
7 Distribution des mégastigmanes dans le genre Sedum 39
8 Distribution d’autres composés dans le genre Sedum 42
9 Classification des polyphénols 57
10 Structures des diffèrent flavonoïdes aglycones étudiés 61
11 Fragment ESI-MS/MS des flavones 1-6 63
12 Fragment ESI-MS/MS des flavonols 7-11 64
13 Fragment ESI-MS/MS des flavonones 12-15 65
14 Résultats de séparation par chromatographie sur colonne de gel de silice de 92
la fraction chloroformique
15 Résultats de séparation de la fraction F 93
4
16 Résultats de séparation de la fraction F 93
15
17 Résultats de séparation de la fraction F 94
19
18 Résultats de séparation de la fraction F 94
69
19 Résultats de séparation de la fraction F 95
74
20 Résultats de séparation de la fraction F 95
77
21 Résultats de séparation de la fraction F 95
91
22 Résultats de séparation de la fraction F 96
106
23 Résultats de séparation par chromatographie sur colonne de gel de silice de 96
la fraction acétate d’éthyle
24 Résultats de séparation de la fraction AC 98
10
25 Résultats de séparation de la fraction AC 98
10
26 Résultats de séparation de la fraction AC 98
12
27 Résultats de séparation de la fraction AC 99
12
28 Résultats de séparation de la fraction AC 99
14
29 Résultats de séparation de la fraction AC 99
15
30 Résultats de séparation de la fraction AC 100
122
31 Calibration de LC/MS/MS en présence des standards 104
32 Données de la série spectrales UV du produit F60 118
33 Données de la RMN 1H du produit F60 (DMSO-d à 400 MHz) 119
6
34 Données de la série spectrale UV du produit AC10 123
35 Données de la RMN 1H du produit AC10 (CD OD, 400 MHz) 124
3
36 Données de la série spectrale UV 131
37 Données de la RMN 1H du produit AC122 132
38 Données RMN 13C (400 MHz, CD OD) du produit AC122 133
3
39 Déplacements chimiques en RMN1H (400MHz) et RMN 13C (100 MHz) du 142
produit F19 dans le DMSO-d
6
40 Déplacements chimiques en RMN1H (400 MHz) et RMN 13C du composé 155
F75enregistré dans le DMSO-d
6
41 Données RMN13C (100 MHz, DMSO-d ) du produit F72 165
6
42 Composés de l’extrait butanolique identifiés par LCMSMS 199
43 Polyphénols totaux de Sedum caeruleum et Sedum pubescens. 203
44 Inhibition du radical DPPH par les extraits de S. caeruleumetS. pubescens 204
45 Activité des extraits de Sedum caeruleum sur les ions chélates
208
46 Inhibition du CUPRAC par les extraits de Sedum caeruleum 209
47 Inhibition du CUPRAC par les extraits deSedum pubescens 210
48 Activité deblanchissement duβ-carotènepar les extraits de Sedum 212
caeruleum
49 Activité deblanchissement duβ-carotènepar les extraits de Sedum 213
pubescens
50 Activité antiradicalaire (ABTS) des extraits deSedumpubescens 214
51 Inhibition de l’acétylcholinestérasepar les extraits de Sedumcaeruleum 215
52 Inhibition de labutyrylcholinestérase par les extraits de Sedum caeruleum 217
53 Activité anti-inflammatoire in vivo de Sedum caeruleum 219
54 Résultats de l’activité antibactérienne de l’ECSC 220
Liste des figures
No Titre Page
1 Photos de la plante sedum caeruleum. 11
2 Photos de la plante Sedumpubescens 11
3 Structures des acides phénoliques isolés du genre Sedum 16
4 Squelette de base des flavonoïdes 17
5 Structures des flavonoïdes isolés du genre Sedum 29
6 Structures des coumarines isolées du genre Sedum 31
7 Structures des terpenoides isolés du genre Sedum 34
8 Structures des alcaloïdes isolés du genre Sedum 39
9 Structures des mégastigmanes isolés du genre Sedum 41
10 Structures des autres composés isolés du genre Sedum 42
11 Détection des acides gras par LC/MS/MS 55
12 Classification des polyphénols 59
13 Nomenclature adoptée pour le retrocyclisation et différents clivages observés 62
dans cette étude
14 Fréquence d’utilisation des méthodes d’évaluation in vitro de l’activité 70
antioxydante
15 Principaux composés naturels (ou synthétisés) possédant des propriétés 71
antioxydantes
16 Transformation du radical DPPH•en DPPH 73
17 Formation et piégeage du radical ABTS•+ par un antioxydant donneur de H• 75
18 Réduction du complexe chromogène de Cu+2-Nc 76
19 Sites d’ions métalliques par les flavonoïdes 77
20 Mécanisme chimiques de la méthoded’Ellman’s 78
21 Schéma d’extraction de Sedum caeruleum 90
22 Spectre RMN 1H du produit F60 (CD OD,400 MHz) 120
3
23 Spectre RMN 1H étalé du produit F60 (CD OD,400 MHz) 121
3
24 Spectre RMN 1H du produit AC14 (CD OD,400 MHz) 126
3
25 Spectre RMN 1H étalé 1 du produit AC14 (CD OD,400 MHz) 127
3
26 Spectre RMN 1H étalé 2 du produit AC14 (CD OD,400 MHz) 128
3
27 Identification par HPLC du produit AC14 129
28 Spectre RMN 1H du produit AC122 (CD OD,400 MHz) 135
3
29 Spectre RMN 1H étalé 1 du produit AC122 (CD OD,400 MHz) 136
3
30 Spectre cosy1H-1H du produit AC122 (CD OD,400 MHz) 137
3
31 Spectre HSQC 1H-1H du produit AC122 (CD OD,100 MHz) 138
3
32 Chromatogramme LC/MS/MS du produit AC122 139
33 Spectrométrie de masse LC/MS/MS du produit AC122 139
34 Spectre RMN 1H du produit F19 (DMSO-d ,400 MHz) 142
6
35 Spectre RMN 1H étalé du produit F19 (DMSO-d ,400 MHz) 144
6
36 Spectre Dept 135 du produit F19 (DMSO-d ,100 MHz) 145
6
37 Spectre Dept 135 étalé du produit F19 (DMSO-d ,100 MHz) 146
6
38 Spectre COSY étalé du produit F19 (DMSO-d ,400MHz) 147
6
39 Spectre COSY étalé du produit F19 (DMSO-d ,400 MHz) 148
6
40 Spectre HSQC du produit F19 (DMSO-d ,400 MHz) 149
6
41 Spectre HSQC du produit F19 (DMSO-d ,400 MHz) 150
6
42 Spectre HMBC du produit F19 (DMSO-d ,400 MHz) 151
6
43 Spectre HMBC du produit F19 (DMSO-d ,400 MHz) 152
6
44 Spectre RMN 1H du produit F75 (DMSO-d ,400 MHz) 156
6