Regina Aparecida Gomes Assenço AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIVIRAL DE EXTRATOS

122 Pages·2017·4.44 MB·Portuguese

UFOP CiPharma/EF.000
D.000

Regina Aparecida Gomes Assenço

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIVIRAL DE EXTRATOS
POLARES DE ESPÉCIES DA FAMILIA CELASTRACEAE

Dissertação apresentada ao Programa de
Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas
da Universidade Federal de Ouro Preto,
como parte dos requisitos necessários para
obtenção do grau de Mestre em Ciências
Farmacêuticas

UNIVERSIDADE FEDERAL DE OURO PRETO

Ouro Preto
2013
O trabalho descrito nesta dissertação foi
realizado sob a orientação do Professor Sidney
Augusto Vieira Filho e co-orientação da
Professora Doutora Maria Célia da Silva Lanna.
A845a Assenco, Regina Aparecida Gomes.
Avaliação da atividade antiviral de extratos polares de espécies da família
Celastraceae [manuscrito] / Regina Aparecida Gomes Assenco - 2013.

110f.: il. color.; graf.; tab.; mapas.

Orientador: Prof. Dr. Sidney Augusto Vieira Filho.
Coorientadora: Profª Drª Maria Célia da Silva Lanna.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Ouro Preto. Escola de

Farmácia. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas.

Área de concentração: Fármacos e Medicamentos

1. Celastraceae - Austroplenckia populnea - Teses. 2. Celastraceae -
Maytenus gonoclada - Teses. 3. Citotoxicidade - Teses. 4. Agentes antivirais
- Teses. I. Vieira Filho, Sidney Augusto. II. Lanna, Maria Célia da Silva.

III. Universidade Federal de Ouro Preto. IV. Título.

CDU: 615.3:582.766.5

Catalogação: [email protected]

4
Agradecimentos

Dedico este trabalho...

Aos meus filhos, André, Bárbara e Raíssa
pelo amor e incentivo sempre constantes.

-
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS

Em primeiro lugar a Deus, pela certeza de Sua presença e direção em toda minha
vida.
Aos meus pais, irmãos pelo amparo em todos os momentos, principalmente os mais
difíceis e ao Sebastião Assenço Neto (In memóriam) pela motivação sempre dada aos
estudos.
Ao Prof. Dr. Sidney Augusto Vieira Filho, por ter acreditado em meu potencial,
pela valiosa orientação, oportunidade. Sem sombra de dúvida, aprendi muito mais do que
está exposto neste trabalho, aprendendo lições que levarei por toda a vida pessoal e
profissional.
À Profa. Dra. Maria Célia da Silva Lanna, pela co-orientação e portas abertas para
realização deste trabalho, pelo apoio e palavras oportunas durante estes anos.
Aos fitoquímicos do Icex/ UFMG, pelos preciosos extratos e substâncias obtidos
da Austroplenkia e Maytenus.
À Prof. Dra. Cíntia Magalhães do LBTM/UFOP, pelo incentivo, apoio e toda
colaboração na realização deste trabalho.
À Profa. Dra. Silvana Queiroz Silva e Prof. Dr. Breno de Melo Silva, pela
compreensão e apoio.
Aos alunos de iniciação científica Eduardo da Costa Marçal e Letícia Gomes
Barcelos, pela ajuda, pela amizade, presença e por participarem ativamente na realização
deste projeto.
Aos colegas de Mestrado no Cipharma.
À toda equipe do Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas,
(Cipharma) pela oportunidade.
Ao Prof. Dr. Ivo Caldas, do Laboratório de Doença de Chagas do ICEB, UFOP, por
tornar possível a realização do ensaio de apoptose.
Ao Prof. Dr. Wanderson Geraldo de Lima NUPEB, UFOP e Laser Oliveira
CiPharma, UFOP por toda contribuição na parte de morfometria e fluorescência.
À Profa. Dra. Erna Kroom pela acolhida e importante treinamento de cultivo celular
no Laboratório de Virus/ UFMG.
Ao amigo João Rodrigues do Laboratório de Vírus, ICB, UFMG, pelos
ensinamentos básicos deste trabalho.
A Profa. Dra. Edel Figueiredo Barbosa e Tânia Mara Gomes de Pinho pela acolhida
e apoio no Laboratório de Vacinas, ICB, UFMG, pelo apoio para o aperfeiçoamento deste
trabalho nas questões de cultura da frágil célula MA-104.
Aos membros da banca por avaliarem e melhorarem a qualidade deste trabalho.
Enfim, a todos que, de uma forma ou de outra me ajudaram a realizar esse trabalho.
“Sempre fico entusiasmado com projetos que cruzam saberes como o popular e o
científico. Afinal, foi da observação do natural, dos fazeres comuns do ser humano, das
práticas vivenciais que os grandes mestres da humanidade retiraram inspirações ou motivo
para as suas descobertas”.
(José Carlos Carvalho - S.E.M.A.D.S - 2010)

“O prazer é um impulso rápido. Já o desejo é um impulso de demoras. É feito de
vagarezas. Assim como ter que andar mil quilômetros, mas certos de que há um lugar a se
chegar. A dureza da viagem e o cansaço serão sempre vencidos cada vez que o desejo for
relembrado. Não haverá prazer durante todo o trajeto. Por vezes, os limites serão aflorados,
mas o desejo de se chegar nos manterá firmes”.

Padre Fábio de Melo

R. Assenco, 2013.
SUMÁRIO

Índice de Figuras .............................................................................................i
Índice de Tabelas ............................................................................................v.
Abreviaturas, siglas e símbolos ....................................................................v..ii i
Resumo ............................................................................................................x.
Abstract ............................................................................................................x. i

1. Introdução ..............................................................................................1. .........

2. Revisão da literatura 9
.........................................................................................................................

2.1 Espécie da família Celastraceae.................................................................... 9
......................................................................
2.2 Aspectos gerais do Poliovirus e dos Rotavírus 14
...............................................................................................................
2.3 Poliovirus 14
................................................................................................................
2.4 Rotavirus 15
...........................................................................
2.5 Aspectos epidemiológicos das rotaviroses 17
............................................................................................
2.6 Transmissão dos Rotavirus 19
..................................................................................
2.7 Aspectos patogênicos dos Rotavirus 19
.....................................................................................................
2.8 Multiplicação viral 20
...............................................................................
2.9 Aspectos imunológicos das rotaviroses 21
.................................................................................................
2.10 Vacinas anti-Rotavirus 23
.............................................................................................
2.11 Diagnóstico de rotaviroses 24
............................................................................
2.12 Espécies vegetais com atividade antiviral 26

3. Objetivos ................................................................................................2.9.. ........

4. Parte experimental ...............................................................................3.0.. ........
...................................................................................
4.1 Equipamentos, vidraria e reagentes 30
.................................................................................................................
4.2 Métodos 31
...............................................................
4.3 Extratos polares de espécies da família Celastraceae 33
..............................................................................................
4.4 Citotoxicidade do DMSO 35
....................................................................................................
4.5 Linhagens celulares 35
4.6 Esquema de distribuição dos componentes dos experimentos nas microplacas 36
Avaliação da citotoxicidade de extratos e constituintes de espécies da família 37
4.7
............................................................................................................
Celastraceae
....................................................................................
4.8 Vírus utilizados nos experimentos 41
.....................................................................................
4.9 Titulação: Poliovirus e Rotavírus 42
................................................................................
4.10 Leitura e interpretação dos resultados 43
..........................................................................................
4.11 Ensaio de atividade antiviral 45
........................................................................................................
4.12 Técnica do MTT 45
......................................................................................................
4.13 Análise estatística 48
................................................
4.14 Imagens do efeito citopático causado por Rotavirus (RV, AS-11) 48
..............................................................................
4.15 Ensaio de microscopia de fluorescencia 48
4.16 Indice apoptótico de células VERO, pelo método anexina iodeto de propidio 50
.........................................
4.17 Teste de avaliação de apoptose pelo método anexina iodeto de propidio 51

5. Resultados e discussão ..........................................................................5.2.. ........

5.1 Citotoxidade dos extratos e constituintes de espécies da família Celastraceae 52
5.2 Citotoxicidade do DMSO ...................................................................................5.2.. ........
5.3 Ensaio de citotoxidade ......................................................................................5.3.. ........
5.4 Determinação da citotoxicidade em células VERO ......................................................5.3.. ........
5.5 Determinação do título do Poliovirus e Rotavírus (RV símio SA-11) .................................6.2.. ........
5.6 Avaliação da atividade anti-Rotavirus de extratos de Celastraceae ....................................6.3.. ........
5.7 Citotoxicidade de extratos constituintes observada por microscopia óptica 69
5.8 Análise de variância com Teste de Comparações múltiplas de Tukey..................................7.4.. ........
5.9 Efeito citopático do Rotavirus (RV, SA-11) em células MA-104 .......................................7.5.. ........

5.10 Ensaio por microscopia de fluorescência ..................................................................7.8.. ........
5.11 Marcação de apoptose com anexina V-FITC/PI analisada por citometria de fluxo ...................8.0.. ........

Conclusão e perspectivas .....................................................................8.8.. ........

Referencias ............................................................................................9.0.. ........

Anexos ....................................................................................................9.8.. ........