Cancer du sein pendant la grossesse

218 Pages·2017·10.35 MB·French

by  Paul Berveiller

Cancer du sein pendant la grossesse: interactions des
taxanes avec le trophoblaste humain par une approche
ex vivo et in vitro
Paul Berveiller
To cite this version:
Paul Berveiller. Cancer du sein pendant la grossesse: interactions des taxanes avec le trophoblaste
humain par une approche ex vivo et in vitro. Cancer. Université René Descartes - Paris V, 2014.
Français. ￿NNT: 2014PA05T029￿. ￿tel-01165040￿
HAL Id: tel-01165040
https://theses.hal.science/tel-01165040
Submitted on 18 Jun 2015
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THÈSE DE DOCTORAT DE L’UNIVERSITÉ PARIS DESCARTES

Spécialité : Développement
Ecole doctorale de rattachement : Gc2ID

Présentée par
Paul BERVEILLER
Le 6 Mai 2014

Pour obtenir le grade de
DOCTEUR DE L’UNIVERSITÉ PARIS DESCARTES

Cancer du sein pendant la grossesse :
Interactions des taxanes avec le trophoblaste humain par une approche ex
vivo et in vitro.

Directeur de thèse : Dr. Danièle EVAIN-BRION

JURY
Monsieur le Professeur Vassilis TSATSARIS Président
Madame le Docteur Nadia ALFAIDY Rapporteur
Monsieur le Professeur Olivier FARDEL Rapporteur
Madame le Docteur Danièle EVAIN-BRION Examinateur
Madame le Professeur Sophie GIL Examinateur
Monsieur le Professeur Bruno CARBONNE Examinateur
Remerciements

A Madame le Dr. Danièle Evain-Brion, directrice de l’Unité INSERM 767, et
directrice de ce travail, de m’avoir si gentiment accueilli au sein de son unité et de
m’avoir permis de réaliser ce travail dans les meilleures conditions possibles. Je vous
remercie infiniment d’avoir guidé si subtilement mon travail.

A Monsieur le Pr. Vassilis Tsatsaris, d’avoir accepté de présider cette Thèse de
Sciences. Tous vos conseils, votre disponibilité exceptionnelle, votre constante
gentillesse font de vous un réel exemple à suivre, dont je m’efforce chaque jour d’être
digne.

A Madame le Dr. Nadia Alfaidy et à Monsieur le Pr. Olivier Fardel, d’avoir accepté
d’être rapporteurs de cette Thèse de Sciences et d’y avoir prêté autant de temps et
d’attention.

A Madame le Pr. Sophie Gil, de m’avoir supervisé depuis le début de ce cursus
scientifique, avec une disponibilité constante, une gentillesse à toute épreuve et une
particulière sensibilité. Vous m’avez transmis votre passion de la thématique du
« médicament pendant la grossesse », et je vous en remercie infiniment.

A Monsieur le Pr. Bruno Carbonne, qui a si gentiment accepté cette invitation pour
être examinateur. De par vos conseils depuis le début de mon cursus médical, votre
savoir et votre réussite, vous êtes un modèle de médecin auquel j’aimerais ressembler.

A tous les membres de l’Unité INSERM 767, avec une mention toute particulière à
Pascale Gerbaud, Guillaume Pidoux, Nadine Segond, Fatima Ferreira qui m’ont
appris les rudiments de la Science Fondamentale. Je leur dois cette Thèse de Sciences.
A Christelle Simasotchi, qui m’a montré ce que voulait dire le terme « efficacité »…
Merci !
A Sarah Berndt, pour son dynamisme, ses conseils et son amitié simplement.
A Mélanie Cocquebert, d’avoir passé cette étape avant moi et de m’avoir toujours
conseillé parfaitement.
A Alicia Grosso, pour sa sympathie, sa disponibilité et sa (quasi)-constante bonne
humeur.
A Josette Badet, pour son incommensurable savoir et sa constance, à Thierry Fournier
pour nos discussions dont les thématiques étaient aussi diverses qu’animées, à
Françoise Aucouturier sans qui aucune expérimentation ne serait réellement possible.
Enfin à Audrey Chissey, d’avoir su et bien voulu m’inculquer les bases, et ce dès le
départ de mon cursus de recherche. Merci à toi !

! ! 1!
A mes ami(e)s les plus cher(e)s:

Jean-Patrick Le Meaux et Jean-Marie Malaret, mes deux premiers exemples
d’Obstétriciens,

Olivier Mir, sans qui rien ne serait arrivé. Je lui dois beaucoup, beaucoup… Je lui en
serai éternellement reconnaissant,

Toute l’ « Alésia Connection » : mon Instructeur Mathieu Tastard, mon PNC préféré
Anthony Clément, Mathieu Ferrand, Julie Lohard, Anaïs Boilly, Amanda Cox,
Nathalie Suprano.

Emmanuel Bailly, Anne-Laure Margulies,

Olivier Morel, Nicolas Veyrie, Jérôme Naudin, Elisabeth Chéreau, Martin Koskas,

A Alix Defline qui m’a si gentiment repris des gardes pour me libérer du temps,

A Juliette, Patricia, Michèle, Camille et Marie,

A ma belle-famille, Catherine, Vincent, Charlotte, Edouard, Etienne, Marie-Agnès,
Claude,

A ma famille, Christelle Humbert, Gaïa Lequindre, Fantic et Claudine Berveiller,
Martine Roland-Manuel, Jean-François et Jocelyne Angst,

Aux Professeurs Edouard et Henri-Edouard Brissaud, en espérant qu’ils seront fiers
de moi, de là où ils sont,

A Marie-Josée et Pierre-Yves Berveiller, mes parents adorés, qui m’ont toujours
encouragé et se sont sacrifiés pour me donner ce qu’il y a de meilleur,

A mon épouse aimée, Marine, pour son soutien permanent, sa patience, son écoute, sa
tendresse, ses avis toujours précieux, sa complicité et son amour,

A Henri, mon fils adoré.
« A quoi sert la vie si les enfants n’en font pas plus que leurs pères ? » Gustave Courbet
« La théorie, c’est quand on sait tout et que rien ne fonctionne. La pratique, c’est quand tout fonctionne et que
personne ne sait pourquoi. Ici, nous avons réuni théorie et pratique : rien ne fonctionne… et personne ne sait
pourquoi » Albert Einstein
« Le succès, c’est aller d’échec en échec, sans jamais perdre son enthousiasme. » Winston Churchill
! 2!
Table des matières
!
REMERCIEMENTS!.................................................................................................................!1!
TABLE DES MATIERES!........................................................................................................!3!
LISTE DES ABREVIATIONS!...............................................................................................!8!
LISTE DES FIGURES!...........................................................................................................!12!
LISTE DES TABLEAUX!.......................................................................................................!15!
INTRODUCTION!...................................................................................................................!16!
I - LE PLACENTA HUMAIN!..............................................................................................!18!
A.!LE!DEVELOPPEMENT!DU!PLACENTA!HUMAIN!................................................................................!18!
Stade&prélacunaire&.............................................................................................................................&19!
Stade&lacunaire&....................................................................................................................................&20!
Stade&villeux&..........................................................................................................................................&21!
Le&trophoblaste&villeux&et&les&villosités&flottantes&.................................................................&22!
Les&CT&extravilleux&et&la&villosité&crampon&..............................................................................&23!
La&mise&en&place&de&la&circulation&fœtale&.................................................................................&24!
La&vascularisation&utéroBplacentaire&........................................................................................&25!
B.!LE!TROPHOBLASTE!VILLEUX!ET!LA!BARRIERE!PLACENTAIRE!.....................................................!28!
II!*!LE!PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!DES!MEDICAMENTS!.....................................!30!
A.! LES!DETERMINANTS!DU!PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!..........................................................!30!
1.&La&diffusion&passive&.......................................................................................................................&30!
2.&La&diffusion&facilitée&.....................................................................................................................&33!
3.&Le&transport&actif&...........................................................................................................................&33!
B.! LES!DIFFERENTS!MODELES!D’ETUDE!DU!PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!DES!MEDICAMENTS
! 3!
! 35!
1.&Modèle&du&cotylédon&placentaire&perfusé&...........................................................................&35!
2.&Modèle&des&lignées&cellulaires&cancéreuses&........................................................................&37!
3.&Modèle&de&culture&primaire&de&trophoblastes&humains&................................................&38!
4.&Explants&villositaires&....................................................................................................................&39!
5.&Fractions&cellulaires&.....................................................................................................................&40!
C.!LES!TRANSPORTEURS!PLACENTAIRES!–!REVUE!DE!LA!LITTERATURE!.......................................!41!
1B&Les&transporteurs&«&Solute&Carrier&»&B&SLC&(Tableau&2)&................................................&41!
Organic!anionGtransporting!polypeptides!(OATP)!........................................................................................!41!
Organic!anion!transporters!(OAT)!........................................................................................................................!43!
Organic!cation!transporters!(OCT)!.......................................................................................................................!44!
Les!monoamines!transporters!(MAT)!.................................................................................................................!45!
Les!transporteurs!d’acides!aminés!.......................................................................................................................!46!
Les!monocarboxylate!transporters!(MCT)!........................................................................................................!47!
Les!transporteurs!de!glucose!..................................................................................................................................!48!
Les!peptide!transporters!(PT)!................................................................................................................................!49!
Concentrative!nucleoside!transporters!(CNT)!................................................................................................!50!
Equilibrative!nucleoside!transporters!(ENT)!..................................................................................................!51!
2B&Les&transporteurs&ATPBbinding&Cassette&(ABC)&(Tableau&3)&.....................................&61!
ABCB1/MDR1,!PGglycoprotein!(PGgp)!.................................................................................................................!61!
ABCB4/MDR3!................................................................................................................................................................!62!
ABCC1/MRP!(multidrug!resistanceGassociated!protein!)1!........................................................................!63!
ABCC2G3/MRP2G3!........................................................................................................................................................!63!
ABCC4G5/MRP5G5!........................................................................................................................................................!64!
ABCC6G10G12/MRP6G7G9!..........................................................................................................................................!64!
ABCG2/BCRP!..................................................................................................................................................................!65!
TAP!(transporter!associated!with!antigen!processing)/ABCB2GABCB3!..............................................!66!
ABCF1/ABC50!...............................................................................................................................................................!66!
3B&Autres&familles&de&transporteurs&............................................................................................&73!
Aquaporines!(AQP)!......................................................................................................................................................!73!
! 4!
Les!ATPases!de!transport!du!cuivre!.....................................................................................................................!73!
Major!vault!protein!(MVP)!–!Lung!resistanceGrelated!protein!(LRP)!....................................................!74!
VDAC1!(VoltageGdependent!anionGselective!channel!protein!1)!.............................................................!74!
III!–!CANCER!DU!SEIN!DURANT!LA!GROSSESSE!ET!PASSAGE!
TRANSPLACENTAIRE!DES!TAXANES!ET!AUTRES!AGENTS!ANTICANCEREUX!............!76!
AG!CANCER!DU!SEIN!DURANT!LA!GROSSESSE.!.....................................................................................!76!
BG!LES!TAXANES:!HISTORIQUE,!STRUCTURE!CHIMIQUE,!PROPRIETES!PHARMACOLOGIQUES!ET!
MODE!D’ACTION.!...............................................................................................................................................!78!
CG!PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!DES!TAXANES!................................................................................!85!
DG!PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!DES!AUTRES!AGENTS!ANTICANCEREUX!...................................!87!
OBJECTIFS!DE!L’ETUDE!........................................................................................................!89!
MATERIEL!ET!METHODES!...................................................................................................!90!
1G!LE!MODELE!DU!COTYLEDON!PLACENTAIRE!HUMAIN!PERFUSE!...................................................!90!
Matériels&et&réactifs&...........................................................................................................................&90!
Méthode&..................................................................................................................................................&92!
2G!LA!CULTURE!PRIMAIRE!DE!TROPHOBLASTES!.................................................................................!96!
3G!LES!MARQUEURS!DE!FUSION!CELLULAIRE!ET!DE!FORMATION!DU!ST!........................................!98!
4G!ETUDE!DE!L’EXPRESSION!GENIQUE!DES!DIFFERENTS!TRANSPORTEURS!DE!MEDICAMENT!100!
Réalisation&des&culots&en&vue&de&l’étude&transcriptionnelle&...........................................&100!
Extraction&des&ARN&..........................................................................................................................&100!
Dosage&des&ARN&–&Vérification&de&l’absence&de&dégradation&........................................&101!
Réalisation&de&la&PCR&(Polymerase&Chain&Reaction)&en&temps&réel&(Fig.&28)&.........&102!
5G!ETUDE!DE!L’EXPRESSION!PROTEIQUE!DES!DIFFERENTS!TRANSPORTEURS!PLACENTAIRES!EN!
FONCTION!DU!TERME!DE!LA!GROSSESSE,!SUR!UN!MODELE!DE!CULTURE!PRIMAIRE!DE!
TROPHOBLASTES!...........................................................................................................................................!103!
Récupération&des&culots&cellulaires&..........................................................................................&103!
! 5!
Extraction&protéique&.......................................................................................................................&104!
Réalisation&des&western&blots&......................................................................................................&104!
ARTICLE!1!..............................................................................................................................!106!
UTILISATION!DE!LA!METHODE!DE!CULTURE!PRIMAIRE!DE!TROPHOBLASTES!
HUMAINS!AFIN!D’ETUDIER!L’EXPRESSION!DES!TRANSPORTEURS!PLACENTAIRES!
AU!COURS!DE!LA!GROSSESSE.!.................................................................................................!106!
ARTICLE!2!..............................................................................................................................!149!
ETUDE!COMPARATIVE!DU!PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!DES!TAXANES!AVEC!
UTILISATION!DU!MODELE!DE!COTYLEDON!PLACENTAIRE!PERFUSE!.......................!149!
ARTICLE!3!..............................................................................................................................!158!
EVALUATION!DES!REPERCUSSIONS!PLACENTAIRES!APRES!EXPOSITION!AUX!
TAXANES!PAR!UNE!ASSOCIATION!DE!MODELES!EXPERIMENTAUX!IN!VIVO,!EX!VIVO!
ET!IN!VITRO!.................................................................................................................................!158!
PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!IN!VIVO!DU!PACLITAXEL!SUR!DES!COTYLEDONS!DE!FEMME!
ENCEINTES!TRAITEES!PAR!PACLITAXEL!DURANT!LEUR!GROSSESSE!POUR!UN!CANCER!DU!SEIN!.....!159!
PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!EX!VIVO!DU!PACLITAXEL!ET!SON!ACCUMULATION!
COTYLEDONAIRE!...........................................................................................................................................!161!
EFFETS!IN!VITRO!DU!PACLITAXEL!SUR!DES!CULTURES!PRIMAIRES!DE!TROPHOBLASTES!HUMAINS!
ISSUS!DE!PLACENTAS!A!TERME!...................................................................................................................!161!
EFFETS!IN!VITRO!DU!PACLITAXEL!SUR!L’EXPRESSION!PROTEIQUE!DE!DEUX!TRANSPORTEURS!
PLACENTAIRES!MAJEURS!(PGGP!ET!BCRP)!A!PARTIR!DE!CULTURES!PRIMAIRES!DE!TROPHOBLASTES!
HUMAINS!ISSUS!DE!PLACENTAS!A!TERME!.................................................................................................!162!
EFFETS!IN!VITRO!DU!PACLITAXEL!SUR!L’EXPRESSION!GENIQUE!DES!TRANSPORTEURS!
PLACENTAIRES!ABC!ET!SLC!A!PARTIR!DE!CULTURES!PRIMAIRES!DE!TROPHOBLASTES!HUMAINS!
ISSUS!DE!PLACENTAS!A!TERME!...................................................................................................................!162!
! 6!
PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!IN!VIVO!DU!PACLITAXEL!SUR!DES!COTYLEDONS!DE!FEMMES!
ENCEINTES!TRAITEES!PAR!PACLITAXEL!DURANT!LEUR!GROSSESSE!POUR!UN!CANCER!DU!SEIN!.....!162!
PASSAGE!TRANSPLACENTAIRE!EX!VIVO!DU!PACLITAXEL!ET!SON!ACCUMULATION!
COTYLEDONAIRE!...........................................................................................................................................!165!
EFFETS!IN!VITRO!DU!PACLITAXEL!SUR!DES!CULTURES!PRIMAIRES!DE!TROPHOBLASTES!HUMAINS!
ISSUS!DE!PLACENTAS!A!TERME!...................................................................................................................!165!
EFFETS!IN!VITRO!ET!IN!VIVO!DU!PACLITAXEL!SUR!L’EXPRESSION!PROTEIQUE!DE!DEUX!
TRANSPORTEURS!PLACENTAIRES!MAJEURS!(PGGP!ET!BCRP)!A!PARTIR!DE!CULTURES!PRIMAIRES!DE!
TROPHOBLASTES!HUMAINS!ISSUS!DE!PLACENTAS!A!TERME!ET!DE!COTYLEDONS!DE!PATIENTES!
TRAITEES!PAR!PACLITAXEL!DURANT!LA!GROSSESSE!...............................................................................!167!
EFFETS!IN!VITRO!DU!PACLITAXEL!SUR!L’EXPRESSION!GENIQUE!DES!TRANSPORTEURS!
PLACENTAIRES!ABC!ET!SLC!A!PARTIR!DE!CULTURES!PRIMAIRES!DE!TROPHOBLASTES!HUMAINS!
ISSUS!DE!PLACENTAS!A!TERME!...................................................................................................................!169!
DISCUSSION!ET!CONCLUSION!..............................................................................................................!170!
DISCUSSION!ET!PERSPECTIVES!......................................................................................!173!
CONCLUSION!.........................................................................................................................!181!
PUBLICATIONS!ADDITIONNELLES!................................................................................!182!
1G!BERVEILLER!ET!AL.!AM!J!OBSTET!GYNECOL.!2012!JAN;206(1):92.E1G6.!........................!182!
2G!BERVEILLER!ET!AL.!ANTICANCER!DRUGS.!2012!AUG;23(7):754G7.!..................................!188!
3G!MIR!O,!BERVEILLER!P.!LANCET!ONCOL.!2012!SEP;13(9):852G4.!......................................!192!
LISTE!DES!PUBLICATIONS!ET!DES!COMMUNICATIONS!..........................................!194!
PUBLICATIONS!INTERNATIONALES!DEPUIS!2010!..........................................................................!194!
COMMUNICATIONS!ORALES!OU!POSTERS!DEPUIS!2010!................................................................!195!
REFERENCES!.........................................................................................................................!197!
!
! 7!
Liste des abréviations

10-DAB : 10-désacétylbaccatine III
ABC : ATP binding cassette
ADNc : acide désoxyribonucléique complémentaire
ADNg : acide désoxyribonucléique génomique
AQP : aquaporine
ARN : acide ribonucléique
ARNm: acide ribonucléique messager
ARNt : acide ribonucléique de transfert
ATP : adénosine triphosphate
BCRP : breast cancer resistance protein
BET : bromure d’éthidium
CALG : groupe de travail « cancers associés à la grossesse »
CK7 : cytokératine 7
C : concentration maximale
max
CNT : concentrative nucleoside transporters
CT : cytotrophoblaste
CTEV : cytotrophoblaste extravilleux
CT1 : Copper transporter 1
! 8!